| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
Жидкостная хроматография и смежные методы (Liquid chromatography and related techniques) >>>
|
 |
|
PavelPopov Пользователь Ранг: 17 |
 16.03.2006 // 13:40:46
Добрый день! ВЭЖХ Глюкозамина гидрохлорида и хондроитин сульфата Химические названия: 2-дезокси-2-амино глюкозы гидрохлорид и сополимер из натриевой соли хондроитин-4-сульфата Дано по НД (Сагмел США): Оборудование и реактивы: высокоэффективный жидкостный хроматограф, оборудованный УФ-детектором; колонка (ц Bondapack Waters C-l8; 3,9 мм х 300 мм); скорость потока - 0,6 мл/мин; длина волны - 195 нм; мобильная фаза - в мерную колбу вместимостью 1000 мл добавляют 10 мл концентрированного буферного раствора, 100 мл ацетонитрила и 1,2 г натриевой соли октансульфоновой кислоты и доводят содержимое колбы водой до метки объем введения - 20 мкл; температура колонки - 20°С; время регистрации хроматограммы - 10 мин; время удерживания: глюкозамина гидрохлорид - около 3,6 мин; хондроитин сульфат натрия - около 2,6 мин. Концентрированный буферный раствор для ВЭЖХ В мерную колбу вместимостью 1000 мл добавляют 100 мл триэтиламина и около 800 мл воды (степень чистоты для ВЭЖХ). Осторожно добавляют 80 мл фосфорной кислоты. Перемешивают и охлаждают до комнатной температуры (20+1° С). Устанавливают рН=2,23, доводят объем водой до метки. Делаю на 100мм С 18 колонке градиент от 0 до 25% (естественно колонка уравновешена). Что крутить - если для хондроитин сульфата время удерживания при 100 мкл \мин - 1,48!!!! Как такое м.б. если мертвый объем колонки ок 200мкл? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
24.03.2006 // 14:28:29
Редактировано 1 раз(а) Полная Ж, извините за выражение. Полностью недееспособная методика. И невоспроизводимая. Просто не будет работать. Если попытаться все-таки ее модернизировать... Первое - все реагенты должны быть суперчистые импортные. Сразу надо выбрасывать градиент - только изократика. Со временами и правда какие-то нелады. Если удерживание надо увеличить - можно убавлять ацетонитрил, или помаленьку увеличить концентрацию додецилсульфата. Можно рискнуть выкинуть триэтиламин, просто приготовив буфер нужного рН. Тогда, может быть... и то вряд ли. А по идее, нужно брать чистый силикагель, или аминофазу, и разрабатывать совершенно новую методику. Желательно, используя как ПФ просто смесь ацетонитрила с водой. Удерживание меньше нулевого времени? Вполне логично, так как это "сополимер", т.е. - полимер. Он эксклюдируется из пор, при этом не удерживаясь. Таким оразом, двигается бысрее фронта растворителя, который "заглядывает" во все поры. |
|||||
|
Artem Пользователь Ранг: 193 |
24.03.2006 // 15:26:49
Знаем такую методу. Пробовали. Хондраитин то вылетает в мертвом объеме. И никаких воспроизводимых результатов. К методикам, которые пишутся в НД зарубежных фирм нужно относиться крайне осторожно. По собственному опыту: более 40% методик, описанных в таких НД не воспроизводятся и требуют доработки. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
25.03.2006 // 22:07:35
Собственно, оно так и задумано - полимер элюировать в эксклюзионном режиме, а глюкозамин в ион-парном. Разумеется, нужна изократика, а размер пор сорбента должен быть такой же, как и у разработчика, дабы полимер вышел между свободным и мертвым объемом приличным по форме пиком. Не блеск, но вполне может быть воспроизведена и давать приличные результаты при правильном выборе размера колонки и пористости сорбента. |
|||||
|
Vlad Orlovsky Пользователь Ранг: 60 |
26.03.2006 // 22:55:05
пришли мне свой емаил и я тебе переправлю метод. Он у наc есть но еше не на саите. Механизм разделения ion-exchange (glucosamine) and ion-exclusion/size exclusion (chondroitin) |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
27.03.2006 // 15:58:41
Резюме - на микроколонках эта методика не может быть реализована. Нужны полупрепаративные колонки, ну или хотя бы "стандартные" 250х4.6. |
|||||
|
PavelPopov Пользователь Ранг: 17 |
28.03.2006 // 4:54:56
|
|||||
|
Vlad Orlovsky Пользователь Ранг: 60 |
28.03.2006 // 12:44:11
Для Павла и всех остальных заинтересованных: метод для глюкозамина and chondroitine на нашеи колонке |
|||||
|
PavelPopov Пользователь Ранг: 17 |
28.03.2006 // 12:57:15
Еще раз Спасибо. AmFm - это что такое? |
|||||
|
Vlad Orlovsky Пользователь Ранг: 60 |
28.03.2006 // 17:07:22
AmFm-ammonium formate AmAc-ammonium acetate MeCN-acetonitrile |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 401
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
