| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
Жидкостная хроматография и смежные методы (Liquid chromatography and related techniques) >>>
|
 |
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
 08.12.2003 // 11:13:12
Разрешите опять встрять.  Костя просто на основании своего опыта указал, в каком интервале концентраций ацетонитрила при программировании состава элюента можно ожидать ПРЕИМУЩЕСТВЕННО те или иные классы веществ на хроматограмме. На самом деле, веществ у Вас будет значительно больше - это и алкалоиды, и гемилигнин, и гемицеллюлозы, и олигосахариды, и одному богу известно, что еще. Экстрактивные вещества из растительного сырья составляют около 30 классов соединений. И все это наверняка будет перекрываться друг с другом. Поэтому, воспользуйтесь советом Сычева-старшего, который сразу на Ваш вопрос предложил сделать обзорную хроматограмму в универсальном элюенте. После этого нужно пробовать менять крутизну и форму градиента, чтобы растянуть наиболее информативные участки хроматограммы. Далее, "кислая вода" - конечно фосфатный буфер с рН от 2 до 6. Какой рН будет оптимальным для этой смеси - нужно пробовать. Ну а что касается пробоподготовки, то Костя и имел в виду, что сахар мешать не будет. А вот предколонку я все таки поставил бы. Не от сахаров, а от смол и их образующих веществ (полифенолы, гетероциклы и т.п.) Кислый гидролизат пока делать не нужно. Обычно его делают, когда хотят освободить отдельные биоактивные вещества из природных соединений, например гликозидов, ацеталей или аддуктов. У Вас же пока такая задача, как я понял, не стоит. Примерно так. Успехов! Если Костя найдет нужным что-либо добавить - он напишет. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
leshich Пользователь Ранг: 69 |
08.12.2003 // 11:24:33
Предколонку поставил. Сделал уже 4 экстракта, как советовал Сычов. Результат удручающий - картина примерно одинаковая - сначала ничего, потом гора из примерно 300 пиков, выходящая просто платом-выглядит даже не как частокол, а как сплошная горная долина Какие тут более информативные участки- не очень понимаю. Попробую ещё сделать изократику на 45% метанола.
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
08.12.2003 // 11:48:15
Попробуйте растянуть эти слившиеся пики, начав с более высокой концентрации ацетонитрила (раз вначале ничего нет) и повысьте его конечную концентрацию до 70-80%. При этом стоит уменьшить крутизну градиента. Конец на такой высокой концентрации необходим, чтобы убедиться, что по крайней мере основные вещества из колонки вышли. В конце концов из всего этого скопища пиков можно выделить информативный участок. При этом часть веществ будет вылетать в мертвом объеме, штук 15-20 нормально поделятся, а остальные будут сидеть в колонке. Так что градиент после изократа сделать все равно придется, хотя бы в очистительных целях. Ваша задача - выбрать наиболее интересную группу пиков и растянуть их. То, что все вещества Вам сразу удастся посмотреть никто и не обещал, для этого эффективность колонки должна быть на порядки выше. |
|||||
|
leshich Пользователь Ранг: 69 |
08.12.2003 // 11:53:24
Спасибо за поддержку. Вы вселяете в меня надежду, что все не так уж плохо, как кажется с первого раза
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
08.12.2003 // 18:07:30
Нуууу... а я вот всегда считал, что "отпечаток пальцев" - это штука которая плохо сочетается с градиентом... лушее изократика. Особенно - градиент вредит при "горбе" из неразделенных пиков - изократика делит лучше. В любом случае - залог успеха - селективная детекция. Дело в том, что 330, 370 и 520 нм - очень селективные длины волн, и этого "бог знает чего" в определенных интервалах элюирующей силы системы не так и много... Далее, можно применять и флуресценцию. К примеру, я многие флаваноны ловил по возб. 290 эмиссия 400 за милую душу. Кислая вода - я готовлю елюент, а потом в нее капельку фосфорки капаю  рН - хрен ее знает, везде пишу - 3  Гидролиз сиропов делаю так - раза в 2-3 разбавляю водой чтоб не был таким густым, потом на 20 мл разб. сиропа 40 мл метанола и 5 мл конц. солянки, на водной бане около часа. Не дергайтесь, если при этом цвет резко меняется - проантоцианы превращаются в анто... Да, в 2 и 3 случаях - просто разбавьте сироп водой и колите... Если есть предколонка - ее надо применять ВСЕГДА... |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
09.12.2003 // 8:35:20
Костя! На данном этапе человеку до области отпечатков пальцев далековато. Сначала нужно выделить эту область снижая крутизну и сужая границы градиента. Добиться нормального разделения информативных пиков. И только потом переходить в изократ. Я, по крайней мере, именно так подходил к разделению сложных экстрактов. Может, оттого, что на Милихроме организовать псевдоградиент проще. А что касается детектирования, так это понятно, что нужно делать на нескольких длинах волн, иначе никак не определить, если в одном пике выходят несколько веществ. А такой вариант развития событий в данном случае как никогда вероятен. |
|||||
|
Andrey Пользователь Ранг: 40 |
09.12.2003 // 9:53:09
Леонид! Здравствуйте! Подскажите, пожалуйста, что такое псевдоградиент? И какая конфигурация у Вашего Милихрома? Всё дело в том, что сейчас очень остро стоит вопрос об определении микотоксинов в зерне, но методика, которая у нас есть, предполагает градиент. Но этого не позволяет наш насос (может и да, но я не знаю. 2,5 мл, стандарт для М-4). Благодарю. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
09.12.2003 // 12:50:14
Я имел ввиду обычный Милихром-4 стандартной комплектации (УФ-детектор). Любой Милихром идеально предназначен для создания градиентного элюирования из колонки. Для этого у него в "карусели" стоят несколько виал по 10 мл, в которые можно налить элюент со ступенчато понижаюшейся силой от первого до 8-го. Его насос на 2,5 мл прецизионным шаговым двигателем отбирает из виал последовательно, скажем, по 0,3 мл элюента каждого состава. Шприц насоса ориентируется так, чтобы слои засасываемой жидкости не смешивались. Далее, когда проходит анализ, из насоса начинают эти слои выходить в обратном порядке их набирания. Такой способ создания градиента называют еще ступенчатым, но на самом деле на выходе из шприца ступеньки сглаживаются и получается подъем элюирующей силы от минимальной до максимальной почти линейным. В отличие от схемы создания градиента от двух насосов и смесителя, такой градиент иногда называют псевдоградиентом, что совсем не сказывается на конечном результате. В Милихроме А-02 градиент создается уже по классической схеме, которая имеет перед ступенчатой схемой два основных преимущества: лучшую воспроизводимость и гибкость. Таким образом, Вы можете уже сейчас спокойно работать на своем Милихроме в градиенте, причем произвольно можете менять его форму и крутизну, давая задание прибору набирать разные количества элюента из соответствующих виал. |
|||||
|
Liolic Пользователь Ранг: 51 |
11.12.2003 // 18:45:20
Господа, извиняюсь что прерываю растительную тематику животной, но есть проблема - как избавиться от пигментов мочи при экстракции перед ВЭЖХ? Экстрагируем смесью изопропанола с гексаном и дихлорметаном с дихлорэтаном. Может есть какие добавки, чтобы связать эту дрянь в комплекс или что в таком роде. Liolic. |
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
11.12.2003 // 18:49:17
Редактировано 1 раз(а) А что определяете? Может просто подобрать градиент так. чтобы они практически не мешали? Пигменты мочи весьма гидрофильны и в основном вылетают в начале хроматограммы Похоже, что эта "животная" тематика близка к форуму по химико-токсикологическому анализу |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 401
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
