Форумы ANCHEM.RU: метод внутреннего стандарта в ГХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

метод внутреннего стандарта в ГХ >>>

  Ответов в этой теме: 129
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

14.03.2012 // 1:43:10

Редактировано 2 раз(а)

Пользователь удалил свое сообщение

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

kump
Пользователь
Ранг: 3126

18.03.2012 // 18:40:06

Редактировано 1 раз(а)

Chamomillablue пишет:
Миль пардон, но с помощью "внутренней нормализации" вы не сможете провести примерную идентификацию ЖК. Для этого, как правило, вычисляют ЭДЦ.

Нет, ну для растительных масел идентификация пиков жирных кислот от масляной до С24:2 осуществляется достаточно просто, поскольку картина в принципе везде одинаковая. Во всяком случае на капиллярных колонках с полиэфирными фазами. Для сливочного масла и маргаринов могут быть некоторые затруднения в связи с большим количеством изомеров и минорных кислот, но тоже задача волне решаемая даже без использования стандартов.
Единственное, что касается изомеров, то можно только отличить цис- от транс- а вот идентифицировать какие именно, тут нужны стандарты. Но по госту для маргаринов транс изомеры определяются суммарно, поэтому для рутинных анализов это не важно.

Дмитрий (anchem.ru)
Администратор
Модератор форума
Ранг: 4444

18.03.2012 // 19:16:04

Chamomillablue, давайте не будем мешать в одну кучу внутренний стандарт для количественных расчетов и идентификацию. ИМХО - разные вещи...

Marina_Kurkina, явно спрашивает про количественный расчет.

kump
Пользователь
Ранг: 3126

18.03.2012 // 20:54:22

Marina_Kurkina пишет:
помогите, пожалуйста, разобраться с методикой. Не могу понять в чем ее суть. Мы проводим определение концентрации очень длинно-цепочечных жирных кислот (С22, С24, С26) в плазме крови методом ГХ/МС с электронным ударом. Мы проводим расчет поправочных коэффициентов следующим образом. Взвешиваем навески стандартов метиловых эфиров С19, С22, С26, С27. С19 и С27 - внутренние стандарты. Масса навесок колеблется от 2 мг до 8 мг. Мне сказали, что это вполне нормально, такой разброс. Далее разводим навески в 1 мл хлороформа. Далее следует последующее двукратное разведение в 10 раз. Далее берем по 100 мкл каждого стандарта, высушиваем в N2 и растворяем в гексане. Полученную смесь вкалываем в прибор. Получаем хроматограмму стандартов с определенными площадями. Теперь самое интересное - расчет коэффициентов.
1) b19=n19/S19, где b - первый коэффициент, n - кол-во в-ва, S - площадь соотв. соед., 19 это длина цепочки кислоты (С19, С22, С26 и С27).
2) получаем коэф. b19, b22, b 26, b27.
3) Далее мы ведем расчет либо С27, либо по С19. Если в качестве i.s. берем С27, то следующее действие такое. Мы делим полученные коэф. b22, b26, b 27 на b 27, т. е. b22/b27=k22, b26/b27=k26.
4) Окончательным вариантом принимаются в качестве поправочных коэффициентов именно k22 и k26, причем для кислот С22 и С24 принимается одинаковый поправочный коэф k22.
5) В расчете концентраций исследуемых кислот (С22, С24, С26) в плазме крови, все как обычно.
С22=S22/S i.s. * Ci.s. * k22.
Вопрос такой: откуда может взяться такая хитрая система перерасчета? Нормально ли, что нет строго определенных масс навесок, которые будут использоваться для расчета коэффициентов?
Вся эта методика была дана мне старой сотрудницей нашей лаборатории, она не так давно вышла на пенсию На все вопросы, что и как, она отвечает, что уже не помнит, что откуда, но твердо уверена, что так надо делать.

Описание проблемы, кстати, было на предыдущей странице.

Ув. Марина, то, что Вы описываете – классический метод применения внутреннего стандарта, описанный в любом учебнике по хроматографии.

В общем, определение количества вещества (массы, молей, концентрации) определяется по калибровочному коэффициенту – то, что Вы описываете как например:
bi = ni/Si Здесь bi – калибровочный коэффициент устанавливающий зависимость количества вещества (ni) и отклика детектора (в Вашем случае плошадь Si). Для его определения вы должны использовать строго определённое количество вещества т.е раствор стандарта (калибровка).
Теперь Вы можете вводить неизвестное количество вещества, определять площадь пика, который оно даёт и, используя полученный при калибровке калибровочный коэффициент bi определять это самое неизвестное количество (массу, концентрацию) вещества ni = bi*Si.
Такой простой метод достаточно точен и применяется, например, при определении токсичных примесей в водке и спирте.

НО. Он требует БЕЗУКОРИЗНЕННОГО ввода пробы при калибровке и последующих перекалибровках. Т.е каждый раз Вы должны вводить СТРОГО определённый объём калибровочного раствора, что трудно достижимо, особенно при ручном вводе пробы.
Поэтому чаще используют ОТНОСИТЕЛЬНЫЙ калибровочный или НОРМИРОВОЧНЫЙ коэффициент, который представляет собой отношение калибровочного коэффициента для искомого вещества bi к аналогичному коэффициенту вещества, которое называется внутренним стандартом bст. Вы его называете поправочным. У Вас это коэффициент k.

(В качестве внутреннего стандарта обычно берётся вещество, которое 1)хорошо отделяется, 2)время выхода которого соизмеримо с временем выхода определяемых веществ и 3)которое НЕ ВСТРЕЧАЕТСЯ в исследуемой пробе. Именно поэтому в качестве вн. стандартов в Вашем случае используются кислоты с нечётным числом атомов углерода, практически не встречаются в природных жирах.)

Коэффициент k, который представляет собой отношение калибровочных коэффициентов определяемого вещества и внутреннего стандарта.
k = bi/bст = ni/Si/nст/Sст = ni*Sст/Si*nст
где: bi – калибровочный коэффициент определяемого вещества
bст - калибровочный коэффициент внутреннего стандарта
Si и Sст – площади пиков указанных веществ.
ni и nст – количества (или массы, концентрации) соответственно определяемого вещества и вн. стандарта.
Отсюда выводим формулу для определения количества определяемого вещества
ni = k* nст *Si /Sст Вместо n можно использовать концентрацию, что происходит в Вашем случае.
Данный метод обладает определённым преимуществом – он менее чувствителен к неточному вводу пробы, так как при изменении из-за погрешности ввода, калибр. коэффициента одного вещества, также изменяется и коэффициент внутреннего стандарта и их отношение (т.е. нормировочный (относительный) коэффициент k) остаётся постоянным. По этой же причине не столь важно количество вносимых стандартов, разумеется, в разумных пределах, не выходящих за границы диапазона линейности детектора.
Надеюсь я ответил на Ваши вопросы, а бабушку мучить не надо)))

Marina_Kurkina
Пользователь
Ранг: 55

31.03.2012 // 21:38:43

Ух ты! Спасибо! Понятно.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

АналитПро, ООО
Комплексное оснащение химико-аналитических и испытательных лабораторий. Консалтинг, информационное и научно-техническое сопровождение поставок лабораторного и аналитического оборудования. Комплектация лабораторий, подбор методик и оборудования.

Kalambet
Пользователь
Ранг: 484

01.04.2012 // 9:47:40

Про внутренний стандарт можно почитать также здесь
www.multichrom.ru/Docs/met-vn-st.pdf
А вскорости публикуется еще одна статья с тем примером, который был обкатан на этой ветке форума. Всем принявшим участие огромное СПАСИБО

Marina_Kurkina
Пользователь
Ранг: 55

20.06.2012 // 14:20:07

А еще не подскажете, какой хороший учебник по хроматографии можно почитать. Интересуют, такие вопросы как нюансы метода внутреннего стандарта, метода нормализации и прочее. В общем, учебник, где более ли менее нормально давались основные понятия. Спасибо!

Kalambet
Пользователь
Ранг: 484

20.06.2012 // 16:48:54

Появилась статья с примером, обсужденном на этой ветке форума. www.multichrom.ru/Docs/Myths-in-st.pdf

Kalambet
Пользователь
Ранг: 484

20.06.2012 // 17:15:21

Marina_Kurkina пишет:
А еще не подскажете, какой хороший учебник по хроматографии можно почитать. Интересуют, такие вопросы как нюансы метода внутреннего стандарта, метода нормализации и прочее. В общем, учебник, где более ли менее нормально давались основные понятия. Спасибо!

Нюансы метода внутреннего стандарта - в приведенной выше статье. В нормализации нюансов нет - нормируется сумма площадей (или концентраций) на 100% и все.
Я бы посоветовал более радикальную меру - поставить какую-нибудь хроматографическую программу и внимательно посмотреть на то, как изменяется таблица пиков для одной хроматограммы, расчитанной разными методами. Можно нашу

. www.multichrom.ru


Ответов в этой теме: 129 Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты