Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

SOS! Опять сдохла колонка для ГХ-МС (HP-1). Плазма крови убивает колонки? >>>

  Ответов в этой теме: 68
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Serga
Пользователь
Ранг: 1806


26.10.2010 // 17:18:00     
Че то я не пойму- мы о разном говорим, что ли? LVI, я понимаю, многократный ввод пробы (по 10 мкл) в [достаточно холодный] инжектор, где отдувается через сброс растворитель от каждого ввода, а потом уже быстрый разогрев инжектора (PTV) и перенос накопленного образца в колонку. О какой конденсации пойдет речь? Уловили в инжекторе и перегнали в колонку (и там сфокусировали, но уже не на пленке растворителя, а на холодной колонке). 50 мкл в режиме без деления- это не ЛВИ, в колонку так загонять едва ли станут. Да и объема лайнера (1 см3) для 50 мкл явно маловато.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


26.10.2010 // 20:42:57     

Serga пишет:
Че то я не пойму- мы о разном говорим, что ли?..

...50 мкл в режиме без деления- это не ЛВИ, в колонку так загонять едва ли станут. Да и объема лайнера (1 см3) для 50 мкл явно маловато.

LVI - Large Volume Injection, т.е. общее название всех методов. И их относительно много.

Я просто упомянул ("между строк" ) метод/способ, который, в общем-то известен, но не "пропиарен" как следует. Плюс многие думают, что это невозможно. Стереотипы

Вы, в общем, поищите в сети

З.Ы.: Сам лично "загонял" 30мкл гептана и это не предел, конечно, здесь есть свои "трюки".
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


27.10.2010 // 12:20:48     

virtu пишет:

Дмитрий (anchem.ru) пишет:
Думаю многим "читателям" будет полезно... если не трудно конечно...
1. Из первого поста понятно, что юзер "не в теме". Где внятное описание задачи? Где ГХ-МС условия (+метод и способ ввода пробы, используемый лайнер, темп. испарителя и т.д.)? Где нормальное описание пробоподготовки? Какая "нагрузка" на прибор (кол-во вколов и кол-во образцов) в месяц? И т.д.? Что имеется ввиду под "опасными" БВ для КК? О "возрасте" КК я вообще молчу.

2. Затем, те, у которых есть "третий глаз" дают советы. Например, кто-то рассуждает про эфир и дихлорметан (HP-1 у юзера сшитый и пришитый), про гибель от "жира" (жк и стерины), "гениальный" совет по установке предколонки (по-хорошему, во-первых, нужен пресс-фит, пресс-фит+полимидный клей, пресс-фит+спец. эпоксидный клей, конечно есть и другие варианты, во-вторых, КК с НЖФ толщиной 0.05-0.2мкм, лучше 0.1мкм и 0.25-0.32мм в.д., DB-1 или DB-5, хорошо, если + ms). Не думаю, что "колоть" гексан при 200 оС, а тем более воду при 150 оС – разумное решение в данной ситуации, хотя, честно признаюсь и сам подобным "баловался" когда-то (в других ситуациях и часто безрезультатно).

3. Что понимать под "гибелью" КК? Полный унос НЖФ и/или "тотальное" физическое или химическое повреждение НЖФ и/или КК? Или в данных условиях с помощью нее невозможно решить поставленную задачу?
Боюсь, что очень часто люди путают последнее с предыдущим. Я, иногда, беру таких "мертвецов" у людей, немного "колдую" и спокойно работаю с ними дальше. Да, можно отрезать 50% длинны КК, изменить условия и решить ту же задачу. Да, можно, если НЖФ позволяет (сшита и пришита) ее промывать растворителями (было, делал, даже FFAP и WAX) и если все правильно делать, то "хуже не становится".

4. Работал с плазмой КЧ, с различными биологическими объектами (различное содержание липидов), по сравнению с которыми плазма КЧ – "подарок". Были и стерины и ЖК и др., но что-то ничего не "умирало".
Насчет "жира": очень многое зависит от состава (кач. и кол.) липидов вводимых в ГХ и ГХ условий. Посмотрите работы, где "напрямую вводят" растительные масла, разбавленные ацетоном, гексаном и др. в 2-5 раз (не ВТГХ и т.д., а просто ГХ с КК) и т.д. и т.п.

Например, липиды сорбируются на начале колонки и там накапливаются (изм. форма пиков, время удерживания и др.). Что делать?
Можно "мыть" (см. выше), "отрезать" нач. часть КК, делать прогрев в обратном направлении (макс. темп. для НЖФ минус 10-15 оС + об. скорость газа-носителя на максимум) или "проблемный участок" начала колонки вытащить наружу, конец в испаритель + обычная об. скорость газа-носителя, темп. ТК 50-70 оС, и "колоть" 10-20*2-4мкл гексана или ацетона без каких-либо делений и т.д.

На мой взгляд, разумно поставить предколонку (см. выше), между предколонкой и колонкой поставить тройник (пресс-фит и др.), клапан (руч. или авто, я ставил руч., хотя, можно и "правильную" заглушку) и, правильно, делать "прогрев и продувку" предколонки после N-го количества анализов. Есть так же и уже готовое решение от производителей – "back flush".
А ставить предколонку, чтобы ее потом менять на другую предколонку – все равно что "резать" основную КК.

Допустим, если используется испаритель сплит/сплитлесс, лайнер – пустая трубка без стекловаты, и режим ввода сплитлесс, то нужно ставить стекловату и оптимизировать условия, и потом только менять стекловату, с более редкой чисткой/заменой лайнера.

Допустим, неправильная темп. программа ТК (например, до 200оС) – исправить.

5. Химическая деградация НЖФ. То же отдельная тема и весьма глубокая. Многое зависит от ГХ условий и пробоподготовки. Например, неорганические щелочи и кислоты. Не думаю, что dionisii колол "холостую" (без плазмы КЧ) 100-500 раз.
Здесь тоже своя стратегия защиты КК.

Например, отмывка экстракта от "щелочей" водой при ЖЖЭ ОБЯЗАТЕЛЬНА, если следующий шаг - ввод в ГХ.

6. И что в итоге? Причина найдена? Нет. Что сделали? Поговорили. О чем? По сути - ни о чем.

Исходя из п.1 и т.д., я и дал совет.

Как бы хорошо Вы не играли не глядя на доску, глядя на доску, Вы все же играете лучше. (М. Таль)

Чем меньше мы знаем, тем более очевидными, простыми и понятными нам кажутся многие вещи, явления и события.

З.Ы.: Используемая юзером пробоподготовка, даже приведенная в "отрывках" - мягко говоря, уже не вызывает восхищения.



Спасибо за конструктивную, на этот раз, критику. Даю подробности по методике:
Задача исследования: Количественное определение карбамазепина и ламотриджина в человеческой плазме крови (внутренний стандарт - нордиазепам).
Способ экстракции: В плазму крови объемом 0,5 мл добавляем 30 мкл раствора внутреннего стандарта объемом 30 мкл (50 мкг/мл нордиазепам в этаноле), затем защелачиваем плазму 100 мкл 2М NaOH. К пробе приливаем 2,5 мл диэтилового эфира (хч) , затем пробы встряхиваем в течение 10 минут на орбитальном шейкере, скорость – 500 r.p.m. Далее пробы центрифугируем при 3000 g, органический слой переносим в стеклянные конические пробирки. Далее к плазме крови вновь приливаем аналогичный объем эфира и делаем повторную экстракцию аналогично первой. Органические слои объединяем и ставим упариваться в концентратор. Сухой остаток восстанавливаем 0,5 мл этилацетата (после долива смываем со стенок, в течение 30секунд встряхивая пробирки на шейкере-вортексе). Полученный экстракт закалываем в хроматограф.
Условия хроматографирования:
• Инжектор Agilent 7683 В с автосамплером. Объем вводимой пробы – 1 микролитр. Ввод пробы – с делением потока (Split) Температура нагрева инжектора - 260°С, давление (psi) – 21.38, газ носитель – гелий. Используемый лайнер: #5183-4647 Liner,split,low prs drop,glswl,tpr,deact.
• Колонка: НР-1 (каталожный номер у Agilent – 19091Z-413Е), неподвижная фаза-диметилполисилоксан, неполярная, длина 30 метров, диаметр – 0,32 мм, толщина пленки -0,25 мкм, температурные ограничения – от – 60 до +325°С. Дата изготовления – декабрь 2009 года, дата ввода в эксплуатацию – 10 июля 2010 года. Нагрузка – 150 инжекций в течение месяца.
Схема хроматографического анализа .
1. Газ-носитель – гелий.
2. Стартовая температура - 220 °С, длительность 2 минуты (Общая продолжительность хроматографирования – 2 минуты)
3. Подъем температуры со скоростью 20 °С в минуту до 240°С, на этой температуре продолжительность термостатирования 3,5 минут (Общее время от начала хроматографирования – 6,50 минут)
4. Подъем температуры со скоростью 20 °С в минуту до 280°С, на этой температуре продолжительность термостатирования 0 минут.
5. Общее время хроматографирования -8,50 минут.

Под "смертью клонки" я действительно имел в виду невозможность выполнять на ней поставленные задачи. Это связано с повышением ассиметрии пиков (пики хвостят), падением чувствительности, дрейфом базовой линии и нарушением воспроизводимости.
Я сам понимаю что методика несовершенна, но она мне "досталась в наследство". Причем, в прямом смысле. Предыдущий сотрудник умер. А прописи остались. Я воспроизвел. Буду благодарен за любые критические замечания по методике. Денис.
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


27.10.2010 // 12:26:58     
Под опасными БВ я имел в виду, прежде всего, действительно, стерины и липиды. Также я слышал, что можно коэкстрагировать олигопептиды, которые также осаждаются на колонке и влияют на ее работу. Да, и еще вопрос. Лайнер со стекловатой в нашем случае, как я понял, предпочтительнее?
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


27.10.2010 // 12:45:14     
Редактировано 1 раз(а)

Ну и для внесения окончательной ясности:



Хотел вставить картинку с хроматограммой, но у меня не получилось. Подскажите, пожалуйста, как это сделать.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Люмэкс Люмэкс
Группа компаний «Люмэкс» выпускает широкий спектр аналитических приборов для: люминесцентного и фотометрического анализа; атомно-абсорбционной спектрометрии; ИК–фурье-спектрометрии; высокоэффективной жидкостной и газовой хроматографии; капиллярного электрофореза; СВЧ - минерализации; дозиметрии; клинической диагностики.
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


27.10.2010 // 13:28:53     
Редактировано 4 раз(а)

ОК- вот еще вопрос- вы написали что у Вас ГХ-МС - в чем выражается в этом случае дрейф базовой линии ? Или у Вас в опыте просто ГХ с ПИД детектором , а МС использовался для разработки методики покойным автором?
Далее , хотя это и некритично- величина Split
Далее - при 260 С у Вас все полетит в колонку что естественно.
Далее -учтите что вода и все что в ней ограниченно смешивается с эфиром (ок 1 к 4000). Однако я не думаю что в данном случае в инжектор попадают соли и прочая водорастворимая дрянь- ведь вы восстанавливаете раствор этилацетатом
Далее - олигопептидам в эфире как бы делать нечего за исключением липопротеидов.
Далее- септу меняли, лайнер смотрели? 150 вколов это немало, на лайнере должны быть наслоения "грязи". Обрезание колонки проводить пробовали и что это дало если обрезание делалось?
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


27.10.2010 // 13:45:15     
Редактировано 1 раз(а)


DSP007 пишет:
ОК- вот еще вопрос- вы написали что у Вас ГХ-МС - в чем выражается в этом случае дрейф базовой линии ? Или у Вас в опыте просто ГХ с ПИД детектором , а МС использовался для разработки методики покойным автором?
Далее , хотя это и некритично- величина Split
Далее - при 260 С у Вас все полетит в колонку что естественно.
Далее -учтите что вода и все что в ней ограниченно смешивается с эфиром (ок 1 к 4000). Однако я не думаю что в данном случае в инжектор попадают соли и прочая водорастворимая дрянь- ведь вы восстанавливаете раствор этилацетатом
Далее - олигопептидам в эфире как бы делать нечего за исключением липопротеидов.
Далее- септу меняли, лайнер смотрели? 150 вколов это немало, на лайнере должны быть наслоения "грязи". Обрезание колонки проводить пробовали и что это дало если обрезание делалось?

Методика для ГХ-МС, нужно скорее сказать не "дрейф базовой линии", а "флуктуации базовой линии" (научите вставлять картинки - покажу на хроматограмме). Возможно сходит "биология. Да, и что значит "при 260 все полетит в колонку"? А какие альтернативные варианты? Лайнер поменяли, септу поменяли, колонку не обрезали (нет соответствующей феруллы). Стало лучше, но недостаточно.
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


27.10.2010 // 13:55:41     
Редактировано 1 раз(а)

При 260... ну вы что с маслом на раскаленной сковородке происходит видели. Кипит и разлагается.
Касательно отсутствия феррулы . Феррула из графита по колонке прекрасно сдвигается. Когда не будет загрузки работой- попробуйте пропихнуть колонку в гайку , придерживая феррулу . То что пластик при этом может поцарапаться - не страшно- колонка то уже не жилец.
Вдобавок эти самые феррулы копейки стоят. Ну а если денег не дают, но Вы в Москве- ну подарю я вам графитовые феррулы ради такого случая, их целый мешок упаковок купили, а бог велел делиться.
Касательно масспектрометра- вы в режиме сканирования масс работаете?
Dionisii
Пользователь
Ранг: 377


27.10.2010 // 14:16:30     
Редактировано 1 раз(а)


DSP007 пишет:
При 260... ну вы что с маслом на раскаленной сковородке происходит видели. Кипит и разлагается.
Касательно отсутствия феррулы . Феррула из графита по колонке прекрасно сдвигается. Когда не будет загрузки работой- попробуйте пропихнуть колонку в гайку , придерживая феррулу . То что пластик при этом может поцарапаться - не страшно- колонка то уже не жилец.
Вдобавок эти самые феррулы копейки стоят. Ну а если денег не дают, но Вы в Москве- ну подарю я вам графитовые феррулы ради такого случая, их целый мешок упаковок купили, а бог велел делиться.
Касательно масспектрометра- вы в режиме сканирования масс работаете?

Да феруллы мы сами заказали у Интерлаба, только на это время потребуется (до 3-х месяцев). Если у Вас есть феруллы на капилляр указанного диаметра - можно в метро или у метро пересечься, я бы с благодарностью принял этот дар. Кстати, я пробовал двигать феруллу, ферулла по капилляру не двигается, плотно обхватывает его, боюсь сломать капилляр. На хромасе мы работаем, как ни странно, в режиме Selected ion monitoring (SIM). Однако иногда мы на хроматограмме даже пики какие-то левые видим. Такие вот фокусы.
Boralex
Пользователь
Ранг: 308


27.10.2010 // 16:17:27     

Dionisii пишет:
Спасибо за
Денис.

Пробоподготовка:
1. перейдите на аммиак
2. уйдите от эфира. Пара причин
2.1. в сам эфир часто добавляют стабилизаторы, иногда не летучие. пару раз у меня чистый эфир хорошо фонил. Попробуйте сделать холостой опыт с эфиром - испарите свой объем эфира, растворите а этилацетате и вколите в МС, лучше на скрининге.
2.2. в эфир идет больше жиров, чем в, например, хлороформ. попробуйте использовать хлороформ.
3. двукратная экстракция не нужна. карбамазепина столько, что одной экстракции достаточно. поднимите литературу, выход экстракции порядка 60-70% в хлороформ.
4. в каких пробирках идет весь процесс? в эпендорфах? в полипропилене? в стекле? уверены, что не тащите пластификатор в растворитель из пластика?
проведите просто холостой опыт с водой вместо плазмы и на скрининге МС. думаю, будете удивлены.

ГХ
150 уколов в месяц- 5 проб в день - не много. Это только данных проб или всего на мс?
Если колите другие вещества - там та же картина, или на других веществах все нормально? Из моей практики, карбамазепин всегда немного хвостил, в то время как другие пики сохраняли свою симметрию.
имхо, очень быстрый нагрев. я бы работал на меньше скорости нагрева. гх дольше, но более воспроизводимы данные (из моего опыта). посмотрите, при какой температуре выходят ваши вещества. если < 240 - уменьшите скорость.
если предполагаете грязь в кк - 280 выдержите подольше, минут 3-5.

Феррула
Если вам не дадут чистую феррулу - обрежьте колонку по корень феррулы, остаток колонны высверлите сверлом 0.3-0.4мм
в магазинах моделирования продаются наборы микро свёрел, рублей 150-300 стоит. По крайней мере в Москве в политехническом музее было. купите, когда-нибудь пригодится еще.

то, что на СИМ видите левые пики - это нормально. Значит, там идет столько грязи (сопутствующих веществ), что в том наборе ионов, на которые она разваливается, есть даже немного тех. которые вас интересуют.


  Ответов в этой теме: 68
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты