Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN >>>

  Ответов в этой теме: 52
  Страница: 1 2 3 4 5 6
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


OldBrave
VIP Member
Ранг: 1226


09.12.2021 // 23:17:14     
Редактировано 3 раз(а)


Chamomillablue пишет:
...Неужели колонка CN вообще не держит эти соединения? и перейти на Luna Silica?
Вы темните со своей целью. Плохо сформулированная задача - отсутствие правильного решения. Если нужно препаративно выделить TAG, то это можно с успехом сделать хроматографией низкого давления на силикагеле.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


10.12.2021 // 17:15:09     

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...Неужели колонка CN вообще не держит эти соединения? и перейти на Luna Silica?
Вы темните со своей целью. Плохо сформулированная задача - отсутствие правильного решения. Если нужно препаративно выделить TAG, то это можно с успехом сделать хроматографией низкого давления на силикагеле.


Текущая цель из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1226


11.12.2021 // 22:37:13     
Редактировано 6 раз(а)


Chamomillablue пишет:
...из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов
Хлорофилл и каротинойды по группам возможно определить прямо в экстракте спектрофотометрически. Колоночной хроматографией низкого давления на силикагеле, начиная со 100% гексана, небольшим градиентом ЭА до 5% смываете воска+TAG+эфиры стеролов. Контроль ТСХ. Хлорофилл+стеролы сядут на колонку. Затем увеличивая долю ЭА смываете каротинойды, затем стеролы. Контроль ТСХ. В конце промывкой ЭА+хлф смываем хлорофиллы. Фосфолипиды мы таким путем, естественно, потеряем. Первую фракцию - анализировать ГХ, - алкиловые эфиры, затем эфиры стеролов и в конце полетят TAG (дет. ПИД + МС). Все группы разделятся. Фракцию каротинойдов - анализировать ВЭЖХ на прямой фазе (детально), или каротинойты + стеролы - на обратной фазе.
В прочем, схемы анализа растительных липидных экстрактов в литературе хорошо освещены.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


12.12.2021 // 17:43:11     

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов
Хлорофилл и каротинойды по группам возможно определить прямо в экстракте спектрофотометрически. Колоночной хроматографией низкого давления на силикагеле, начиная со 100% гексана, небольшим градиентом ЭА до 5% смываете воска+TAG+эфиры стеролов. Контроль ТСХ. Хлорофилл+стеролы сядут на колонку. Затем увеличивая долю ЭА смываете каротинойды, затем стеролы. Контроль ТСХ. В конце промывкой ЭА+хлф смываем хлорофиллы. Фосфолипиды мы таким путем, естественно, потеряем. Первую фракцию - анализировать ГХ, - алкиловые эфиры, затем эфиры стеролов и в конце полетят TAG (дет. ПИД + МС). Все группы разделятся. Фракцию каротинойдов - анализировать ВЭЖХ на прямой фазе (детально), или каротинойты + стеролы - на обратной фазе.
В прочем, схемы анализа растительных липидных экстрактов в литературе хорошо освещены.


Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум. Колоночная хроматография с контролем ТСХ мне извенстна -- с таким же успехом можно просто на ТСХ полупрепаративной делить.. была идея применить к этому ВЭЖХ с рефрактометром.. УФ в таких ПФ не видит пиков (
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1226


12.12.2021 // 18:52:09     
Редактировано 1 раз(а)


Chamomillablue пишет:
...Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум...
В таком случае используют патроны с силикагелем (1г). Воска+TAG+эфиры стеролов смываете гексаном, Остальное отделяете обратной промывкой хлф. Низкая чувствительность RI не позволит определить общие TAG в р-ре меньше ~2 мг/мл.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Микроскоп бинокулярный UV-1380В Микроскоп бинокулярный UV-1380В
Микроскоп предназначен для исследования препаратов в проходящем свете, светлом поле. При биохимических, патологоанатомических, цитологических, гематологических, урологических, дерматологических, биологических и общеклинических исследованиях в лабораториях любого медицинского учреждения. Увеличение: 40х-1500х. Объективы: Планахроматические, 4х, 10х, 20х, 40х, 60х и 100х МИ
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


14.12.2021 // 9:20:47     

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум...
В таком случае используют патроны с силикагелем (1г). Воска+TAG+эфиры стеролов смываете гексаном, Остальное отделяете обратной промывкой хлф. Низкая чувствительность RI не позволит определить общие TAG в р-ре меньше ~2 мг/мл.


А вот это идея!! Спасибо!!
Я про них совсем забыл, что они водятся в хозяйстве -- когда-то для этого и покупал, а потом болел почти 3 года и позабыл..
Вчера на фоне того, что доля ацетона в ПФ снизилась до 4%, оказалось приемлемым использовать УФ (202 нм) -- нулевая почти не шумит и, о чудо! -- пики снова стали видны и отклик на порядки превосходит рефрактометр! ) Кажется, теперь дело пойдёт веселее )

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


14.12.2021 // 9:21:31     
OldBrave, vmu,
ещё раз спасибо за консультации, опыт и идеи -- было непросто запустить прибор после годичного простоя, но оно того стоило
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


27.12.2021 // 18:53:31     
Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si?
Имел глупость вколоть в неё суммарный экстракт (по Блаю и Дайеру) из клеток микроводорослей, перерастворенный в гексане, и теперь базовую линию порой накрывает частоколом мелких пиков. Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор..
Будет ли правильным отмывать её 2-пропанолом, потом от спирта -- ацетоном, а от последнего -- н-гексаном?
или есть другие способы?
У Сычевых, увы, по этому поводу ничего конкретного в книгах не нашел (
kurgachev
Пользователь
Ранг: 1


28.12.2021 // 6:54:30     

Chamomillablue пишет:
Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si? Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор.(

Лучше для силикагеля использовать радикальное промывание кишок, например что-то такое:

ИПС --> АЦН-ВОДА (1:1) --> ИПС --> [2,5% 2,2-Dimethoxypropane + 2.5% Glacial Acetic Acid in Hexane] --> ваша подвижная фаза
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1300


29.12.2021 // 14:33:43     

kurgachev пишет:

Chamomillablue пишет:
Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si? Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор.(
Лучше для силикагеля использовать радикальное промывание кишок, например что-то такое:

ИПС --> АЦН-ВОДА (1:1) --> ИПС --> [2,5% 2,2-Dimethoxypropane + 2.5% Glacial Acetic Acid in Hexane] --> ваша подвижная фаза


А чисто теоретически, может ли регулярно повторяющийся частокол мелких пиков быть вызван 99% чистоты гексаном категории Zur synthese? Может, это 1% примесь углеводородов сорбируется на колонке, а потом элюируется?

  Ответов в этой теме: 52
  Страница: 1 2 3 4 5 6
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты