Форумы ANCHEM.RU: НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN >>>

  Ответов в этой теме: 52
  Страница: 1 2 3 4 5 6
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1314

09.12.2021 // 23:17:14

Редактировано 3 раз(а)

Chamomillablue пишет:
...Неужели колонка CN вообще не держит эти соединения? и перейти на Luna Silica?

Вы темните со своей целью. Плохо сформулированная задача - отсутствие правильного решения. Если нужно препаративно выделить TAG, то это можно с успехом сделать хроматографией низкого давления на силикагеле.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

10.12.2021 // 17:15:09

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...Неужели колонка CN вообще не держит эти соединения? и перейти на Luna Silica?
Вы темните со своей целью. Плохо сформулированная задача - отсутствие правильного решения. Если нужно препаративно выделить TAG, то это можно с успехом сделать хроматографией низкого давления на силикагеле.

Текущая цель из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1314

11.12.2021 // 22:37:13

Редактировано 6 раз(а)

Chamomillablue пишет:
...из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов

Хлорофилл и каротинойды по группам возможно определить прямо в экстракте спектрофотометрически. Колоночной хроматографией низкого давления на силикагеле, начиная со 100% гексана, небольшим градиентом ЭА до 5% смываете воска+TAG+эфиры стеролов. Контроль ТСХ. Хлорофилл+стеролы сядут на колонку. Затем увеличивая долю ЭА смываете каротинойды, затем стеролы. Контроль ТСХ. В конце промывкой ЭА+хлф смываем хлорофиллы. Фосфолипиды мы таким путем, естественно, потеряем. Первую фракцию - анализировать ГХ, - алкиловые эфиры, затем эфиры стеролов и в конце полетят TAG (дет. ПИД + МС). Все группы разделятся. Фракцию каротинойдов - анализировать ВЭЖХ на прямой фазе (детально), или каротинойты + стеролы - на обратной фазе.
В прочем, схемы анализа растительных липидных экстрактов в литературе хорошо освещены.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

12.12.2021 // 17:43:11

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...из экстракта суммарных липидов (по Блаю и Дайеру) количественно оценить и полупрепаративно выделить ТАГ, если помимо них получится что-то ещё (типа низших алкиловых эфиров ЖК, эфиров стеринов) -- то только в плюс. Задача осложняется большим содержанием хлорофилла и каротиноидов
Хлорофилл и каротинойды по группам возможно определить прямо в экстракте спектрофотометрически. Колоночной хроматографией низкого давления на силикагеле, начиная со 100% гексана, небольшим градиентом ЭА до 5% смываете воска+TAG+эфиры стеролов. Контроль ТСХ. Хлорофилл+стеролы сядут на колонку. Затем увеличивая долю ЭА смываете каротинойды, затем стеролы. Контроль ТСХ. В конце промывкой ЭА+хлф смываем хлорофиллы. Фосфолипиды мы таким путем, естественно, потеряем. Первую фракцию - анализировать ГХ, - алкиловые эфиры, затем эфиры стеролов и в конце полетят TAG (дет. ПИД + МС). Все группы разделятся. Фракцию каротинойдов - анализировать ВЭЖХ на прямой фазе (детально), или каротинойты + стеролы - на обратной фазе.
В прочем, схемы анализа растительных липидных экстрактов в литературе хорошо освещены.

Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум. Колоночная хроматография с контролем ТСХ мне извенстна -- с таким же успехом можно просто на ТСХ полупрепаративной делить.. была идея применить к этому ВЭЖХ с рефрактометром.. УФ в таких ПФ не видит пиков (

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1314

12.12.2021 // 18:52:09

Редактировано 1 раз(а)

Chamomillablue пишет:
...Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум...

В таком случае используют патроны с силикагелем (1г). Воска+TAG+эфиры стеролов смываете гексаном, Остальное отделяете обратной промывкой хлф. Низкая чувствительность RI не позволит определить общие TAG в р-ре меньше ~2 мг/мл.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Химико-экологическая научно-исследовательская лаборатория ОАО «Ленморниипроект»
Анализ природных, сточных, морских, грунтовых вод; грунтов, донных отложений на содержание компонентов согласно области аккредитации: тяжелые металлы, хлорорганические пестициды,полихлорированные бифенилы, нефтепродукты и т.д.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

14.12.2021 // 9:20:47

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
...Цимес в малом количестве исходного материала для экстракции -- десятки миллиграммов сырой массы максимум...
В таком случае используют патроны с силикагелем (1г). Воска+TAG+эфиры стеролов смываете гексаном, Остальное отделяете обратной промывкой хлф. Низкая чувствительность RI не позволит определить общие TAG в р-ре меньше ~2 мг/мл.

А вот это идея!! Спасибо!!
Я про них совсем забыл, что они водятся в хозяйстве -- когда-то для этого и покупал, а потом болел почти 3 года и позабыл..
Вчера на фоне того, что доля ацетона в ПФ снизилась до 4%, оказалось приемлемым использовать УФ (202 нм) -- нулевая почти не шумит и, о чудо! -- пики снова стали видны и отклик на порядки превосходит рефрактометр! ) Кажется, теперь дело пойдёт веселее )

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

14.12.2021 // 9:21:31

OldBrave, vmu,
ещё раз спасибо за консультации, опыт и идеи -- было непросто запустить прибор после годичного простоя, но оно того стоило

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

27.12.2021 // 18:53:31

Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si?
Имел глупость вколоть в неё суммарный экстракт (по Блаю и Дайеру) из клеток микроводорослей, перерастворенный в гексане, и теперь базовую линию порой накрывает частоколом мелких пиков. Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор..
Будет ли правильным отмывать её 2-пропанолом, потом от спирта -- ацетоном, а от последнего -- н-гексаном?
или есть другие способы?
У Сычевых, увы, по этому поводу ничего конкретного в книгах не нашел (

kurgachev
Пользователь
Ранг: 1

28.12.2021 // 6:54:30

Chamomillablue пишет:
Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si? Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор.(

Лучше для силикагеля использовать радикальное промывание кишок, например что-то такое:

ИПС --> АЦН-ВОДА (1:1) --> ИПС --> [2,5% 2,2-Dimethoxypropane + 2.5% Glacial Acetic Acid in Hexane] --> ваша подвижная фаза

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

29.12.2021 // 14:33:43

kurgachev пишет:

Chamomillablue пишет:
Как можно регенерировать колонку Phenomenex Luna Si? Я уже отмывал колонку 100% ацетоном -- хлорофилллы удалось вымыть, а вот частокол мелких пиков появляется до сих пор.(
Лучше для силикагеля использовать радикальное промывание кишок, например что-то такое:

ИПС --> АЦН-ВОДА (1:1) --> ИПС --> [2,5% 2,2-Dimethoxypropane + 2.5% Glacial Acetic Acid in Hexane] --> ваша подвижная фаза

А чисто теоретически, может ли регулярно повторяющийся частокол мелких пиков быть вызван 99% чистоты гексаном категории Zur synthese? Может, это 1% примесь углеводородов сорбируется на колонке, а потом элюируется?


Ответов в этой теме: 52 Страница: 1 2 3 4 5 6 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты