Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN >>>

  Ответов в этой теме: 55
  Страница: 1 2 3 4 5 6
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: НФ-ВЭЖХ на колонке Zorbax CN
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295

23.11.2021 // 22:56:40     
Редактировано 2 раз(а)

Дорогие коллеги, имею спросить: нормально ли, что пик чистого н-гексана на 250*4,6 (5 мкм) колонке CN при подвижной фазе н-гексан : ацетон 60:40 и потоке 1 мл/мин (изократика) наблюдается в районе 7,9-8,1 мин?..
Смущает, ибо "системный пик" на С-18 такой же длины в районе 3-4 минут

Второе: чем, помимо ацетона можно безопасно для колонки и удобно варьировать элюирующую силу ПФ, если речь идет об анализе моно-, ди- и триацилглицеринов? Подозреваю, что даже 100% ацетона может оказаться маловато ( Идей кроме этилацетата нет (но коллеги говорят, он слабокислый и будет модифицировать силикагель, т.е. не самый удачный выбор).. но, если верить Сычеву, он не сильно обходит ацетон по элюирующей силе.., а изо-пропанол хоть и смешивается с гексаном, крайне неудобен своей способностью модифицировать силикагель (
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


24.11.2021 // 14:50:06     
Редактировано 1 раз(а)

И ещё вопрос:

при работе с такой летучей органикой в качестве ПФ, есть ли какие лайфхаки по выходу на режим после ночного простоя?.. бывает по часу и дольше приходится делать purge, повышать/понижать скорость потока, чтобы избавиться от пузырей под плунжерами.. причем, проблема только у насоса, который качает гексан
это просто пытка какая-то на этапе, когда изократический поток приходится формировать в режиме бинарного градиента при постоянных значениях долей насосов А и В
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


24.11.2021 // 15:34:28     
ЛАЙФХАК ))

Если наблюдается такая хреномудия как у нас, то спасло сегодня вот что: по очереди включал 100% насоса А или В. Они по очереди не хотели качать и создавать давление )))
В итоге, когда один из них выдал стабильное давление, в 2 приёма довел долю насоса до нужного значения. Работает теперь стабильно.
vmu
Пользователь
Ранг: 786


24.11.2021 // 21:35:41     
Редактировано 1 раз(а)


Chamomillablue пишет:
Дорогие коллеги, имею спросить: нормально ли, что пик чистого н-гексана на 250*4,6 (5 мкм) колонке CN при подвижной фазе н-гексан : ацетон 60:40 и потоке 1 мл/мин (изократика) наблюдается в районе 7,9-8,1 мин?..
Смущает, ибо "системный пик" на С-18 такой же длины в районе 3-4 минут

Такое возможно. Гуглите "vacancy chromatography", "вакантная хроматография", "minor disturbance method".
Детектор-то какой? Рефрактометр?

Chamomillablue пишет:
изо-пропанол хоть и смешивается с гексаном, крайне неудобен своей способностью модифицировать силикагель
Какой такой способностью модифицировать силикагель? У вас и так модифицированный силикагель с привитыми цианопропильными группами. Можете хоть воду в ПФ добавлять (естественно, с другим, смешивающимся с водой и гексаном растворителем).

Chamomillablue пишет:
при работе с такой летучей органикой в качестве ПФ, есть ли какие лайфхаки по выходу на режим после ночного простоя
Оставляйте на ночь на малой скорости потока, а не выключайте насос.

Chamomillablue пишет:
пытка какая-то на этапе, когда изократический поток приходится формировать в режиме бинарного градиента при постоянных значениях долей насосов А и В
Кто вас заставляет? Смешивайте вручную и качайте готовую смесь. Дегазатор-то в приборе имеется? А "ручными" способами дегазируете растворители?

Chamomillablue пишет:
по очереди включал 100% насоса А или В
А у вас система градиента высокого давления (с двумя насосами {обычно они объединены в один блок, но фактически их два}) или же система градиента низкого давления (один насос и смеситель перед ним)?
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


25.11.2021 // 14:09:13     

vmu пишет:
Такое возможно. Гуглите "vacancy chromatography", "вакантная хроматография", "minor disturbance method".
Детектор-то какой? Рефрактометр?

Спасибо, погуглю!
Да, рефрактометр.


Какой такой способностью модифицировать силикагель? У вас и так модифицированный силикагель с привитыми цианопропильными группами. Можете хоть воду в ПФ добавлять (естественно, с другим, смешивающимся с водой и гексаном растворителем).

Скорее всего, я неудачно выразился.. но наблюдал, как при работе с ПФ н-гексан:2-пропанол 95-5 об/об давление в колонке стабильно росло вверх.. потом пришлось ацетоном несколько часов отмывать её от спирта ( так как стало понятно, что этот вариант не годится (

Оставляйте на ночь на малой скорости потока, а не выключайте насос.
Спасибо, попробую!


Кто вас заставляет? Смешивайте вручную и качайте готовую смесь. Дегазатор-то в приборе имеется? А "ручными" способами дегазируете растворители?

Я уже думал об этом.. и, оценив затраты ПФ при включении прибора, возможно и есть смысл просто смешивать самому.. В бинарном градиенте решил, будет проще найти оптимальную ПФ и потом уже мешать её..
"Дегазатор мембранный вакуумный DGU-20A5r" стоит на каждом насосе.


А у вас система градиента высокого давления (с двумя насосами {обычно они объединены в один блок, но фактически их два}) или же система градиента низкого давления (один насос и смеситель перед ним)?

У нас два насоса и к одному дополнительно подключен смеситель FCV-20AL
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1196


25.11.2021 // 17:09:02     
Редактировано 12 раз(а)


Chamomillablue пишет:
... чем, помимо ацетона можно безопасно для колонки и удобно варьировать элюирующую силу ПФ, если речь идет об анализе моно-, ди- и триацилглицеринов? ...
AOCS Method Ce 5c-93, детектор RI:
Колонка Ultracarb 3u ODS (20) 250x4,6 mm s/n 391660-1, Phenomenex, cat.00G-0205-E0, можно заменить на 150х4,6 mm;
Температура колонки: 20C (ambient temperature);
Элюент А (изократически): ACN - ацетон 30 : 70 v/v в течение 80 мин; При анализе кристаллизаторов лучше использовать 100% ацетон или поднять темп. колонки до 40С.
Подготовка системы: 60 мин при 60С (колонка) - промывка колонки с последующим охлаждением до комнатной температуры;
Кондиционирование: 30 мин. - уравновешивание RI;
Поток: 1,0 мл/мин (поток можно уменьшить до 0,8 мл/мин);
Объем пробы: 5 мкл;
Проба: 1,50 г жира/25 мл раствора (0,5г/10мл, 50мг/мл)
в ацетоне или смеси ацетон - хлф. 4:1, или, что еще лучше, смеси гекс-i-PrOH 1:4 или 2:1(что хуже);
Детектор: RI.
Температура ячейки детектора - комнатная или 40С.
Моно- и ди- частично перекрываются, требуется калибровка.
Лично я от этого метода давно отказался.
Еще лучшее разделение получается другим методом с использованием градиента четырех компонентного элюента (EtOH, ACN, ацетон, гексан) и ELSD:
yadi.sk/d/hoY7HUgnz18-Cw
yadi.sk/d/-m9gd7CCqiLFZA
yadi.sk/d/x1GVCZ7HMIb0-Q
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Абакус аналитические системы 98 Абакус аналитические системы 98
Фирма «Абакус аналитические системы 98» в течение многих лет успешно поставляет оборудование и комплектует аналитические лаборатории и производства различных направлений деятельности на всей территории бывшего СССР.
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


25.11.2021 // 18:09:01     

OldBrave пишет:

Chamomillablue пишет:
... чем, помимо ацетона можно безопасно для колонки и удобно варьировать элюирующую силу ПФ, если речь идет об анализе моно-, ди- и триацилглицеринов? ...
AOCS Method Ce 5c-93, детектор RI:
Колонка Ultracarb 3u ODS (20) 250x4,6 mm s/n 391660-1, Phenomenex, cat.00G-0205-E0, можно заменить на 150х4,6 mm;
Температура колонки: 20C (ambient temperature);
Элюент А (изократически): ACN - ацетон 30 : 70 v/v в течение 80 мин; При анализе кристаллизаторов лучше использовать 100% ацетон или поднять темп. колонки до 40С.
Подготовка системы: 60 мин при 60С (колонка) - промывка колонки с последующим охлаждением до комнатной температуры;
Кондиционирование: 30 мин. - уравновешивание RI;
Поток: 1,0 мл/мин (поток можно уменьшить до 0,8 мл/мин);
Объем пробы: 5 мкл;
Проба: 1,50 г жира/25 мл раствора (0,5г/10мл, 50мг/мл)
в ацетоне или смеси ацетон - хлф. 4:1, или, что еще лучше, смеси гекс-i-PrOH 1:4 или 2:1(что хуже);
Детектор: RI.
Температура ячейки детектора - комнатная или 40С.
Моно- и ди- частично перекрываются, требуется калибровка.
Лично я от этого метода давно отказался.
Еще лучшее разделение получается другим методом с использованием градиента четырех компонентного элюента (EtOH, ACN, ацетон, гексан) и ELSD:
yadi.sk/d/ulu67D6af4KxNg
yadi.sk/d/hQsBZyenFza9fA
yadi.sk/d/KyC2uN-lDUZJjA


про ELSD я давно мечтаю и, возможно, в следующем году специально под липидомику закупим такую машинку..
У меня получается, что ТАГ выходят раньше пика растворителя! Это нормально?.. Я что-то растерялся даже.. потом что перед пиком чистого гексана идет второй, я сделал разведение стандарта триолеина гексаном -- и пик перед ним уменьшился..
(ПФ гексан:ацетон 1:1)
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1196


25.11.2021 // 18:24:12     
Редактировано 5 раз(а)


Chamomillablue пишет:

У меня получается, что ТАГ выходят раньше пика растворителя! Это нормально?.. Я что-то растерялся даже.. потом что перед пиком чистого гексана идет второй, я сделал разведение стандарта триолеина гексаном -- и пик перед ним уменьшился..
(ПФ гексан:ацетон 1:1)

Колонки с CN-фазой непригодны для анализа TAG. При использовании RI с элюентом гекс-ацетон используют колонки с обратной фазой с макс. кол-вом углерода (макс. гидрофобности).

Давно установлено, что с детектором RI не удается добиться устойчивой базовой линии при формировании изократического потока в режиме бинарного градиента. Проблема решается при использовании предварительно приготовленного элюента и подачей его через оба насоса в соотношении 1:1, либо через один насос.

Для группового разделения TAG-, DAG-, MAG- и своб. жирные к-ты удобно использовать HILIC (diol), градиент элюентов и ELSD. Условия разделения те же, что и для фосфолипидов:
yadi.sk/d/wBI0itMdhTqR7w
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


26.11.2021 // 0:08:40     

OldBrave пишет:
Колонки с CN-фазой непригодны для анализа TAG. При использовании RI с элюентом гекс-ацетон используют колонки с обратной фазой с макс. кол-вом углерода (макс. гидрофобности).

Давно установлено, что с детектором RI не удается добиться устойчивой базовой линии при формировании изократического потока в режиме бинарного градиента. Проблема решается при использовании предварительно приготовленного элюента и подачей его через оба насоса в соотношении 1:1, либо через один насос.

Для группового разделения TAG-, DAG-, MAG- и своб. жирные к-ты удобно использовать HILIC (diol), градиент элюентов и ELSD. Условия разделения те же, что и для фосфолипидов:
yadi.sk/d/wBI0itMdhTqR7w

Да, я знаю, что бинарный градиент не годится для рефрактометра -- сейчас я его использую, чтобы понять, какой элюент готовить предварительно, т.е. как только подберу соотношение элюентов, чтобы ТАГ видеть одним пиком в разумное время, перейти на изократический режим через один насос.
ELSD пока нет.. приходится работать с тем, что есть :/


OldBrave пишет:
При использовании RI с элюентом гекс-ацетон используют колонки с обратной фазой с макс. кол-вом углерода (макс. гидрофобности).

У меня стоит задача получить ТАГ одним пиком, чтобы была возможность собрать его коллектором фракций. Неужели CN не годится для этой цели?
Есть ещё колонка Luna Silica -- с голым силикагелем.. но с ней очень неудобно было работать из-за большого времени уравновешивания, и тут на форуме когда-то и посоветовали CN взять..
А так да, я использовал гексан:ацетон на С-18 для деления ТАГ по углеродному числу и т.д.

Спасибо большое за рекомендации.

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1295


26.11.2021 // 15:37:09     
Попробовал на ночь оставить поток 0,01 мл/мин: давление на первом насосе было 0,1МПа, на втором -0,1МПа. Снова который час подряд пытаюсь добиться устойчивого давления в насосе, где чистый гексан ((
Нечто невозможное просто (((
vmu
Пользователь
Ранг: 786


26.11.2021 // 17:45:45     
Оставляйте на 0,05-0,10 мл/мин. Кстати, у вас насос-то вообще допускает длительную работу с гексаном? На аджилентовских насосах, например, для регулярной работы с такими растворителями ставят уплотнения (сальники) плунжеров из материала, отличного от того, что используют для водно-органических работ.

  Ответов в этой теме: 55
  Страница: 1 2 3 4 5 6
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты