| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Опасность использования тетрабутиаммония гидросульфата на колонке С18 >>>
|
 |
|
Jora Пользователь Ранг: 23 |
 22.11.2010 // 0:11:51
Спасибо! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Jora Пользователь Ранг: 23 |
30.11.2010 // 13:17:34
Добрый день! Достали тетрабутиламмония гидросульфат. Взяли вещество и стали пробовать. Система - 15 мМ фосфатного буфера + 10 мМ ТБАГС (рН 6) Колонка - Zorbax Eclipse XDB-C18 4.6Х250 мм, 5 мкм Температура колонки - 40 грС Скорость потока 1 мл/мин Вещество - цитидиндифосфатхолин. Приблизительное время удерживания 4,7 мин по документации. У нас получается около 3 мин. Хотим попытаться увеличить время удерживания. Попробовать рН 3-4, может изменить молярность буфера и скорость потока. Температуру уменьшали, пик становится шире и ниже. Вопросы такие: 1. Возможно ли и как еще в данных условиях повлиять на время удерживания? 2. Нужно ли вообще на него влиять и годится ли такое время для анализа, если получается, что время неудерживаемых веществ (мертвое время?) примерно 2 мин? 3. Как, и нужно ли, отмывать колонку в конце рабочего дня? Например, метанол-вода 60-40? Ведь с одной стороны, колонка должна быть насыщена ТБАГС (собираемся с ним работать около 2-3 недель), с другой стороны, как поступать с хорошо сорбировавшимися веществами? Заранее спасибо! |
|||||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
30.11.2010 // 13:46:06
Редактировано 1 раз(а) Пользователь удалил свое сообщение |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
30.11.2010 // 15:38:23
Редактировано 1 раз(а) Елки зеленые... все очень плохо.. система абсолютна непригодна для определения этого вещества.. а удерживания (3мл на 240х4.6 это фактически мертвое время) просто нет.. Не знаю - кто придумывал эту систему, но она непригодна в принципе.. т.е. не спасут никакие манипуляции.. эта задача не решается в ОФ режиме - нужен HILIC С формулы вещества и надо было начинать разговор... а фосфаты - я подумал о стандартной задаче разделения фосфатов нуклеотидов.. |
|||||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
30.11.2010 // 15:55:40
Редактировано 1 раз(а) Хотите и чего-то добиться и при этом не совсем логично действуете Молекулка очень интересная pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/summary/summary.cgi?cid=13804&loc=ec_rcs понижение пш превратит её в нечто, но цитидин и даже цитидиндифосфат вы точно увидите). Вам наоборот надо работать на верхнем пределе пш данной колонки.(8.2).-это обеспечит лучшее разрешение, увеличить молярность буфера до 25мМ и в пределах 5% менять содержание ТБАГС, Т +-5С-это в пределах данного метода. А вообще уменьшите поток и не партесь)))). Бонусы: -МеOH от 3 до 20% -вообще поменять фазу на ацетатный буфер пш 6-8 -полностью соглашусть с Константином можно на хилых попробовать., -XDB чисто из практического опыта худшая в своем классе, да простят меня купцы заморские, альтернатива-работающие полярных фазах аналоги но др производителей -модификатор попробовать-TEAA Думайте, пробуйте вариантов масса |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
30.11.2010 // 16:25:20
Редактировано 5 раз(а) Ах, ДИфосфат.. извините, не заметил этого "ДИ".. это получше, конечно, но не особенно.. Не знаю, но от первого своего поста не отказываюсь.. не годится здесь ОФ ни в каком виде.. Чисто так - действительно постараться сделать слабщелочной рН. Конечно, удерживание чуть подрастет, но Вы тогда просто хорошую дорогую колонку моментально угробите Поток-то здесь причем - раз удерживание вообще отсутствует? |
|||||
|
MeOH Пользователь Ранг: 487 |
30.11.2010 // 17:52:05
человек хочет увеличить время  эффективность ему не критично. можно еще 2 колонки по 30 см друг за другом присоединить |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
30.11.2010 // 18:31:46
Андрей, удерживания-то вообще нет, в принципе.. это же почти амфолит.. при нейтральном рН у него и отрицательного заряда-то никакого толком нет.. |
|||||
|
Алексей (СамГУ) Пользователь Ранг: 367 |
30.11.2010 // 20:42:36
Я попробовал сделать для увеличения удерживания вашего соединения следующее: 1. Температуру бы не трогал 2. Уменьшил концентрацию буфера до 0.005М, и поднял рН=6.9-7.0 3. Увеличил концентрацию ион-парного реагента до 0.025М В самой методике представленной вами, меня беспокоит то, что нет совсем органики в ПФ, для ОФ колонки это ни есть хорошо. Вобщем, если мои рекомендации не помогут, попробуйте то что вам советуют КонстантинС и MeOH. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
30.11.2010 // 22:16:32
Редактировано 1 раз(а) Ну, Алексей, я это и советовал.. только это все мертвому припарки, там k' < 0.2.. если толком заряда нет, то сколько реагента не повышай.. соль вообще может удерживание уменьшить, так что тут вообще непонятно.. выкинуть бы ее, да и все дела.. единственно, рН - тут было самым действенным средством.. но всего на 1 единицу.. То есть, да, сделать просто воду с 25 мМ реагента.. если это не поможет, то уже не поможет ничего.. И да, есть опасность фазового коллапса - если нет органики. Но с ион-парным реагентом вероятность его меньше -все-таки, реагент гидрофилизует поверхность.. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 61
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
