Форумы ANCHEM.RU: Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза?

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза? >>>

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

drynn
Пользователь
Ранг: 26

01.04.2009 // 14:14:14

2 Vitru. Сапсибо за совет по отмывке.

После 10 минут 2% TEA. Перестал двоить пик воды. И время удерживание вератрового спирта увеличилось на 3 минуты.
Значит, все-таки кислота там была...

Сейчас думаю - как глюкозу выловить

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Farma
Пользователь
Ранг: 382

01.04.2009 // 14:28:58

virtu пишет:
to Farma:
А Вы не пробовали другую хроматографическую систему для этой задачи применять (Вариантов-то хватает) или Вы чем-то "ограничены"? Если с аминофазой "аккуратно" обращаться, то иногда она живет долго (для аминофазы ) Да с HILICом это "развод". Можно, кстати говоря, эмулировать "аминофазу" на силикагеле (понятно, что добавляется в элюент ) , я могу Вам ссылку на статью скинуть, если есть потребность.

Вариантов хватает, да не все варианты в фармотрасли хороши. Если к аминофазе уже контролирующие органы попривыкли, то к лигандному обмену или HILIC - нет. Дольше доказывать придётся. Да и колонка аминофазная дешевше получается - на одну полимерную мы две с половиной аминофазные покупаем...почему бы их и не менять как перчатки тогда?

С эмуляцией на силикагеле я знаком, спасибо большое за совет. Но опять же отрасль накладывает свои ограничения...

virtu
VIP Member
Ранг: 2136

01.04.2009 // 17:17:35

to drynn: Фенолы не пойдут - водородная связь - селективность опять изменится, думайте. Можно толуол (0,1-1%об.) УФ254 и вперед, смотря, что у Вас еще есть "под ногами".

to Farma: Я так и подумал. Сочувствую (в плане того, что никакого творчества). В общем, на аминофазе я и сам делаю

drynn
Пользователь
Ранг: 26

02.04.2009 // 13:29:08

Добавил в раствор диметокисбензол, растворим в воде и хорошо светит. Базовая линия ушла в небеса. А дальше эффекта 0. Как небыло видно глюкозы - так и не видно.

Вопрос - не страшно ли добавить много органики, на столько что поглощение уйдет из Ламберта-Бера, и тогда отрицательные пики будут практически не видны?

DSP007
VIP Member
Ранг: 2228

02.04.2009 // 13:32:24

Редактировано 1 раз(а)

Farma пишет:

virtu пишет:
to Farma:
А Вы не пробовали другую хроматографическую систему для этой задачи применять (Вариантов-то хватает) или Вы чем-то "ограничены"? Если с аминофазой "аккуратно" обращаться, то иногда она живет долго (для аминофазы ) Да с HILICом это "развод". Можно, кстати говоря, эмулировать "аминофазу" на силикагеле (понятно, что добавляется в элюент ) , я могу Вам ссылку на статью скинуть, если есть потребность.
Вариантов хватает, да не все варианты в фармотрасли хороши. Если к аминофазе уже контролирующие органы попривыкли, то к лигандному обмену или HILIC - нет. Дольше доказывать придётся. Да и колонка аминофазная дешевше получается - на одну полимерную мы две с половиной аминофазные покупаем...почему бы их и не менять как перчатки тогда?

С эмуляцией на силикагеле я знаком, спасибо большое за совет. Но опять же отрасль накладывает свои ограничения...

Не надо за всех, HILIC я еще 13 лет назад попробовал для полупрепаративного выделения продуктов деструкции при дипломной работе ( бутиловый спирт/вода/аммиак на силикагеле, колонка из пипетки ) , только не ведал я тогда что оно HILIC называется... (:

Тут другая чума, метод имеет плохую переносимость. В одних руках картинка -конфетка , в других ( при незначительном изменении условий, которые не оговорены) - г

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный лабораторный центр ЦГЭ Москвы
ИЛЦ аккредитован в «Системе аккредитации лабораторий, осуществляющих санитарно-эпидемиологические исследования, испытания».

DSP007
VIP Member
Ранг: 2228

02.04.2009 // 13:39:50

Редактировано 1 раз(а)

drynn пишет:
Добавил в раствор диметокисбензол, растворим в воде и хорошо светит. Базовая линия ушла в небеса. А дальше эффекта 0. Как небыло видно глюкозы - так и не видно.

Вопрос - не страшно ли добавить много органики, на столько что поглощение уйдет из Ламберта-Бера, и тогда отрицательные пики будут практически не видны?

Ну вы даете...
Во первых тут важно не переборщить, "затемнение" раствора должно быть примерно на 0,2-0,4 ЕОП ( словно говоря наполовину) для данного детектора.
Во вторых глюкоза у Вас просто сидит на колонке и никаким ацетонитрилом не смывается. Попробуйте взять в качестве ПФ подкисленную где то до рН 3,5-4 воду, уверяю глюкоза пулей с аминофазы вылетит.

DSP007
VIP Member
Ранг: 2228

02.04.2009 // 13:45:23

drynn пишет:

Только, вот казалось бы, ACN должен поглощает сильнее воды в этой области, и пики должны быть отрицательные. Но похоже водичка не совсем чистая (содержит что-то поглощающее), поглащает в УФ и пики получаются нормальные.

К Михалычу претензии! Это он тут ацетонитрил криохромовский чистит.

drynn
Пользователь
Ранг: 26

02.04.2009 // 13:54:44

DSP007 пишет:
ПФ подкисленную где то до рН 3,5-4 воду, уверяю глюкоза пулей с аминофазы вылетит.

Как пишут умные люди, на воде данная колонка не живет. Да и если искуственно подкислить среду - представляю, что будет с амино фазой...
Вопрос: как определить ЕОП детектора?

Vlad Orlovsky
Пользователь
Ранг: 60

02.04.2009 // 16:28:59

Товарищи/Господа,
Зачем велосипед то изобретать? Неделю скоро дисскусия идет а воз и ныне там. Гоогл дает 1,2 миллиона ссылок по теме хроматография глюкозы. Почитайте.
Кртако:
1. УФ без дериватизации не будет работать по человечески
2. Амино колонка работате только в неитральной среде. Удерживание регулируется соотношением ацетонитрил/вода. Если попадает кислота удерживания нет
3. Алтернативный метод гидрофильная хроматография (HILIC). Будет работать даже простой силикагель. У нас есть метод на сахара, но его не предлагаю, просто посмотрите картинки номер 8, 9 и 10 в брошуре:
www.sielc.com/pdf/SIELC_Obelisc_Intro.pdf
Возмите простой силикагел и сделаите 90/10 ацетонитрил/вода. Простой силика гель намного стабильней чем амино фаза. Детектор нужен другой (RI, ELSD, MS). На УФ видите не УФ а смену рефракционного индекса когда вкалываете свой образец.

Вот Google поиска хроматография глюкозы. Яндекс даст что то похожее. Берегите свое время его не вернешь!!!!

www.google.com/search?client=safari&rls=en-us&q=HPLC+of+glucose&ie=UTF-8&oe=UTF-8

Farma
Пользователь
Ранг: 382

02.04.2009 // 18:17:24

drynn пишет:

DSP007 пишет:
ПФ подкисленную где то до рН 3,5-4 воду, уверяю глюкоза пулей с аминофазы вылетит.
Как пишут умные люди, на воде данная колонка не живет. Да и если искуственно подкислить среду - представляю, что будет с амино фазой...

Не претендую на роль умного, но из своего опыта могу сказать, что при 90% воды - живёт точно. И глюкоза при таком % точно не усидит. Кислоту тоже не стал бы добавлять - хилая всё-таки фаза...


Ответов в этой теме: 40 Страница: 1 2 3 4 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты