Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

LC-MS стеролов >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


16.03.2010 // 14:18:53     
Работаем по теме, так что "чем дальше в лес, тем толще партизаны" -.

Коллеги, никто для дериватизации кето-стеролов не пользовался Girard P or Girard T реагентами?

У нас с ними проблема. В более -менее стандартных (по литературе) условиях (типа, 70% спирт в 1% уксусе; 50 - 70 С (пробовали в этом диапазоне) 12 часов; 1000х избыток реагента; концентрация субстрата 10 микромоль/литре) остается до 30% интактного стерола и простая оптимизация (по температуре, спирту, времени) ничего вобщем не дала.

В чем здесь может быть дело? В литературе проблемой выхода как то не заморачивались, типа видели продукт и ладно и обсуждения вопроца нет. Но мне не понятно почему там вообще остается интактный стерол?

Мы думали, как бы вода мешает (все таки там равновесие), но работа в "безводной" системе (кислота в спирте без воды) выход только ухудшила.

Мы новички в этом деле, так что буду очень признателен за любые советы.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
virtu
VIP Member
Ранг: 2130


16.03.2010 // 20:12:25     
Редактировано 1 раз(а)

Я бы попробовал поиграть с уксусной кислотой (в сторону уменьшения), точнее с рН.
И еще я бы попробовал вместо этанола - метанол или изопропанол и ацетат аммония с раскруткой рН (интуитивно).

Думается, если не поможет и если никто опытом не ответит, тогда надо аналит назвать или реакционный центр и окружение описать и сам дериватизирующий агент - здесь синтетики ошиваются.
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


16.03.2010 // 21:10:51     
Редактировано 1 раз(а)

Детали:

методику ставили по экдизону (доступен и относительно дешев):

en.wikipedia.org/wiki/Ecdysone

Реагенты Girard T and Girard P:

www.chemblink.com/products/123-46-6.htm

а Girard P такой же, только с пиридином

Уменьшить кислоту попробуем, но вообще то это катализатор, каk то уменьшать его ..counter-intuitive

virtu
VIP Member
Ранг: 2130


16.03.2010 // 22:43:08     
Хотел добавить.
Попробуйте так же заменить АА на FA.
trozen
Пользователь
Ранг: 205


16.03.2010 // 23:29:33     
я работал с р-вом Жирара Т
раствор готовил так:
18 мл метанола + 2 мл ледяной уксусной кислоты, потом туда 1 грамм реактива Жирара
модельным стероидом был дегидроэпиандростерон
60 градусов, 30 мин, выход был практически 100%
реакционной смеси брал 1 мл на 5 мкг стероида
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Потенциостат Gamry Reference 600 Потенциостат Gamry Reference 600
Прибор идеален для фундаментальных электрохимических исследований в области физической электрохимии, исследований коррозии, источников тока и т.д.. Высокоскоростной, с широким диапазоном измерений тока и наименьшим уровнем шума среди существующих потенциостатов.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


17.03.2010 // 1:45:18     
Т.е. все делается без воды, просто в метаноле, так?

Спасибо!
trozen
Пользователь
Ранг: 205


17.03.2010 // 7:50:46     

Spectrometrist пишет:
Т.е. все делается без воды, просто в метаноле, так?

Спасибо!


да, правда я потом потом добавлял карбонатный буфер для нейтрализации кислоты и экстрагировал непрореагировавшее эфиром, т.к. у меня стояла обратная задача - максимально полно избавиться от кетостероидов и оставить стероиды с одними гидроксилами
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


17.03.2010 // 9:57:34     
Редактировано 1 раз(а)


trozen пишет:

да, правда я потом потом добавлял карбонатный буфер для нейтрализации кислоты и экстрагировал непрореагировавшее эфиром

понятно - и в экстракте уже кетостеролов не было? Т.е. логика в том что не экстрагироваться кетостероиды не могли, в экстракте их не было и следовательно выход был близкий к количественному?

А производные оставались в "водной" фазе? Мне как раз производные нужны для масс спека
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


17.03.2010 // 15:26:07     
Редактировано 1 раз(а)

Я пользовался. Из двух реактивов наилучшим для наших целей оказался Girard-P (из-за более приличной фрагментации). Реакцию довольно тщательно оптимизировали, в результате пришли к следующему раствору реактива: 30 мг/мл в 50/50/0.1 ацетонитрил/метанол/трифторуксусная кислота. К сухому остатку после испарения ж/ж экстракта добавляли 100 мкл этого раствора и выдерживали 15 мин при комнатной температуре. После чего можно рзбавлять водой с бикарбонатом и закалывать, но если нужно добиться высокой чувствительности, стоит использовать ТФЭ, либо on-line, либо в 96-well формате, чтобы избавиться от избытка реагента.
Но во многих случаях гидроксиламина вполне достаточно для получения требуемой чувствительности...
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


17.03.2010 // 16:32:29     
Trozen, Islander

Огромное спасибо! - будем пробовать. ТФЭ вроде как не проблема, мы отладили clean-up реакц смеси так как сейчас пользуем 0.5 мм колонку, но потом я хочу уйти на 75 мкм и там грязи лучше иметь по-минимуму.

Пользуясь вашей любезностью, хотел бы спросить вдогонку:

по вашему опыту, зависит ли выход от положения кето-группы? Может, только в экдизоне (ну и его "родственниках") кето группа стерически закрыта, к тому же она сопряжена с двойной связью - не могу понять, это сопряжение - чисто теоретически - хорошо или плохо для реакции

Еще раз спасибо!

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты