Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

LC-MS стеролов >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: LC-MS стеролов
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777

20.09.2009 // 2:09:01     
Редактировано 1 раз(а)

Коллеги,

подскажите пожалуйста хорошие обзоры или статьи общего характера по определению эндогенных стеролов методом LC-MS (/MS?). Судя по всему, нам придется это налаживать у себя.

Литературы море и способы анализа встречаются самые экзотические. поэтому хотелось бы прочитать один -два хороших обзора / статьи чтобы приблизительно понять как это люди делают. Намеренно не указываю организм где мерить будем, так как он довольно экзотический и вряд ли что то будет работать в лоб. Поэтому интересует общая методология в разных организмах и средах чтобы было хотя бы понятно с чего начинать.

Спасибо!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


21.09.2009 // 1:43:37     
Надо глянуть на работе, может, что-то есть. По эстрогенам точно есть, но Вас интересуют неароматические стеролы, не так ли? И какие пределы обнаружения нужны?
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


21.09.2009 // 8:54:23     
Редактировано 1 раз(а)

Спасибо!

Совершенно справедливо, ароматических стеролов там 99% не будет (или уж сразу Нобелевка светит), идеально если бы сработало на уровне 50-100 fmol - условно, порядок вниз от холестерола, которого в этих животинах мало (они ауксотрофы по холестеролу).

Будем эктрагировать из microdissected tissue, так что концентрация как таковая не принципиальна, а скорее общее количество материала. Принципиальнейший вопрос на сегодня - есть ли жизнь без APPI / APCI, и если да - с какой дериватизацией (что по определению не есть хорошо с самого начала)
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


21.09.2009 // 9:52:28     
ESI такое не возьмет, ИМХО. Если только не присобачить к нему чего-то заряженного.
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


21.09.2009 // 18:04:08     

Serga пишет:
ESI такое не возьмет, ИМХО. Если только не присобачить к нему чего-то заряженного.
Однозначно.

Обзора не нашел, попробую сделать сам не претендующий на полноту микро-обзор на основе лит-ры и собственного опыта.
APPI взять может: M. Varga,... J. Chrom. A, 1103, 278-283 (2006)
На APCI для таких концентраций никакой надежды.
ESI только с дериватизацией. По дериватизации в МС детектировании есть неполохой обзор:
Zaikin V.G.,... Eur. J. Mass Spectrom., 12(2), 79-115 (2006)
Наиболее перспективным может оказаться использование fluoro-1-methylpyridinium-p-toluenesulfonate (FMPT), этот реактив дает простой эфир с заряженной метилпиридиниевой группой:
Bunzo Kashiwagi,... J. Andrology, 26(5), 586-591 (2005)
J.M.E. Quirke,...J. Mass Spectrom., 36(12), 1294-1300 (2001)
Но не знаю, насколько он пригоден для молекул, содержащих два и более гидроксила. Мои оптимизированные условия дериватизации таковы: растворить выпаренный экстракт в 50 мкл 50 мг/мл DMAP в дихлорометане, добавить 150 мкл 20 мг/мл FMPT в ацетонитриле, греть час при 50 градусах. После дериватизации надо избавляться от избытка реактивов с помощью ТФЭ или двумерной хроматографии, иначе подавление сигнала будет жутким.
Другой реактив, который я пробовал, дает тоже хорошую чувствительность, но условия я не оптимизировал, просто оставлял на ночь в присутствии DMAP. Это 4-диметиламинобензоил хлорид. Можно, конечно, попробовать и 4-диметиламинофенилизоцианат, он тоже легко доступен, но я не пробовал.
Есть работы с более экзотическими реагентами, например:
D.W. Johnson,... J. Lipid Res., 42, 1699-1705 (2001)
Они утверждают, что их дериватизация дает чувствительность на порядок выше, чем с помощью FMPT. Только реактив коммерчески недоступен...
Еще один пример - получение диметилглициновых эфиров:
D.W. Johnson, J. Mass Spectrom., 36(3), 277-283 (2001)
Еще более экзотическая дериватизация дает очень сильный сигнал при отрицательной ионизации, но требует работы с комплексом пиридин-трехокись серы:
R. Sandhoff,... J. Lipid Res., 40, 126-132 (1999)

Успехов!
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


21.09.2009 // 20:33:26     
Спасибо огромное, пойду по ссылкам и буду смотреть.

Для архива добавлю что Sandhoff et al (последняя указанная вами ссылка) в наших руках работало плохо, огрмный бэкграунд и плохо воспроизводимые выходы. Интересно что простейший метод:

Liebisch, G., Binder, M., Schifferer, R., Langmann, T., Schulz, B. and Schmitz, G. (2006) High throughput quantification of cholesterol and cholesteryl ester by electrospray ionization tandem mass spectrometry (ESI-MS/MS). Biochim Biophys Acta, 1761, 121-128.

по крайней мере по холестерину работает гораздо лучше.

Идея в том что гидроксил мягко (чтобы не порушить эфиры холестерина и жирных кислот) зашивается ацетилированием и холестерилацетат замечательно летит как аддукт с аммонием (а сам холестерин практически нет). В МС/МС аддукта заряд уходит на холестерольный остаток который замечательно детектируется. Чутье даже выше чем у метода с сульфированием, потому что шума практически нет. К сожалению, с другими стеролами из нескольких которые мы пробовали чутье было сильно ниже: в причинах разбираемся, но уже ясно что нужно думать об альтернативах
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Жидкостной хроматограф Милихром А-02 Жидкостной хроматограф Милихром А-02
Высокоэффективный жидкостный хроматограф с УФ-спектрофотометрическим детектором, решающий большинство аналитических задач, характерных для метода ВЭЖХ.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Pavel
Пользователь
Ранг: 81


21.09.2009 // 20:35:48     

Spectrometrist пишет:
Коллеги,

подскажите пожалуйста хорошие обзоры или статьи общего характера по определению эндогенных стеролов методом LC-MS (/MS?). Судя по всему, нам придется это налаживать у себя.

Литературы море и способы анализа встречаются самые экзотические. поэтому хотелось бы прочитать один -два хороших обзора / статьи чтобы приблизительно понять как это люди делают. Намеренно не указываю организм где мерить будем, так как он довольно экзотический и вряд ли что то будет работать в лоб. Поэтому интересует общая методология в разных организмах и средах чтобы было хотя бы понятно с чего начинать.

Спасибо!


LipidMAPS, core J
www.lipidmaps.org/protocols/index.html
www.lipidmaps.org/protocols/PP0000002500.pdf
www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/17954216
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


22.09.2009 // 8:10:13     
Редактировано 2 раз(а)

Интересно! Т.е. Lipid Maps crowd советует вообще НЕ делать дериватизацию, а просто палить по аммониевым кластерам?

Кстати (так чтобы уж побрюзжать): ну что за манера давать протоколы которые не воспроизвести? Ежу понятно, что если они идут за кластерами, то orifice fragmentation / declustering и collision energy и решат какие будут результаты. И давать диапазон энергий (или вольт где то в орифисе) как-то не благородно, что ли.

И потом, времена удерживания тоже можно было бы указать. Никто не просил бы точного совпадения, но elution order можно было бы посмотреть

А так - вроде и работа сделана (и за NIH денюжку можно отчитаться), но каждому кто хочет методу воспроизвсти нужно по сути начать снова. Да и хоть бы одну оценку дали по чутью ...
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


22.09.2009 // 16:18:56     
Редактировано 1 раз(а)

Если верить утверждению, что чувствительность " between 10 and 2000 fmol on-column" (из последней ссылки), то по закону подлости для большинства стеролов она окажется ближе к верхнему пределу. И для ваших целей может не хватить. Кстати, мой опыт показывает, что чувствительность по аммиачным кластерам очень сильно зависит от конструкции источника. Самым лучшим в этом смысле был источник прибора API-III. Turbo-V современных приборов от Sciex тоже неплох для этого дела, но уже похуже. А вот HESI-II от Thermo, который на Vantage, давит их просто в зародыше...
Pavel
Пользователь
Ранг: 81


22.09.2009 // 21:41:40     
Просто кто-то в верхах этой организации объявил QTRAP4000 официальным прибором для липидомики.
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


23.09.2009 // 9:52:54     

Pavel пишет:
Просто кто-то в верхах этой организации объявил QTRAP4000 официальным прибором для липидомики.

Да, я тоже слышал они массово закупали QTRAPs - прибор хороший, "базара нет" (с). Но тревожно то, что есть стремление сделать прибор и методы что называется, неофициально (но жестко) признаным стандартом - типа, "так правильные пацаны делают липидомикс", а кто делает не так - делает неправильно. Проблема в том что идеология таких анализов довольно старая - те же precursor ion and neutral loss scan, ну или MRM если с LC. Когда же пришли Орбитрэпы, многие проблемы просто исчезли благодаря 100,000 разрешению. Т.е. в области наблюдается интересная динамика, которую жалко потерять если QTRAP'ы станут "индустриальным стандартом"

Все, заканчиваю - это уже флуд 100%. Но, пусть будет в архиве до кучи.

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты