Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза? >>>

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Как отмыть -NH2 колонку от кислоты. Или почему не выходит глюкоза?
drynn
Пользователь
Ранг: 26

30.03.2009 // 19:35:08     
День добрый.

Приобрел колоночку Kromasil 100A NH2 с целью определять глюкозу и др. сахара. Подвижная фаза - 25:75 Вода:ACN. 1 мл/мин
Детектор УФ 190нм.

Закалываю раствор глюкозы из банки. На 3 минуте выходит вода (тоже самое, если заколоть просто воду.) и больше ничего! И то пик какой-то горбатый. Во многих местах видел статьи, где сахара смотрят на УФ-детекторе.
До этого на этом приборе работал с фенолами, в подвижной фазе был 1% кислоты.
Вопрос: Почему не вижу глюкозу? Колонка не делит? Или детектор не видит? Можно ли теоретически как-то забить это колонку кислотой с которой работал до того. Хотя и промывал прибор раствором без кислоты, но не долго..пару-тройку минут...
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


30.03.2009 // 21:20:01     
1) Длина волны какая? Выше 230 искать глюкозу бесполезно.
2) Вообще, глюкоза на аминофазу садится конкретно. А ацетонитрил вообще то снижает растворимость глюкозы.
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


30.03.2009 // 21:22:25     
Редактировано 2 раз(а)

Пары-тройки минут(правда с какой еще скоростью), конечно, маловато, если у Вас стандартная хроматографическая система. А концентрации моносахаридов какие? Вообще-то, для этой цели лучше РФ, особенно, если матрица даже "среденей" сложности. Помню, я "пулял" моносахариды в системе силикагель-ацетон:вода на уф с инверсией. Кислота изменит селектиность Вашей хроматографической системы, моносахариды будут слабее или вообще не будут на ней удерживаться - сколько надо "ввалить" на сорбент кислоты (органической), чтобы это произошло я не знаю. Сделайте так: возьмите МеСN : DEA 99.5:0.5 %v. (можно до 1%) и 5-10 геометрических объемов колонки прогоните через колонку, затем элюента вашего 5-10 (сразу)
Vlad Orlovsky
Пользователь
Ранг: 60


31.03.2009 // 2:11:22     
Привет Всем,

В моем понимании не благородное это дело смотреть глюкозу на УФ да еще с такои колонкой
1. Удерживание происходит по двум механизмам : гидрофильному (HILIC, слабое в не ионизированном состоянии фазы) и комплекс/водородные связи между фазой и сахаром. Если попала кислота то второй полностью пропадает а для гидрофильного механизма маловато органики (надо пойти в 80-90%).
2. Отмыть кислоту можно как уже предложили, зная количество носителя на фазе можно посчитать сколько там кислоты село. Колонка эта не очень стабильная в неитральной среде так как идет гидролиз фазы при рН выше 7 а в порах без буффера может быть и больше.
3. Детектор этот не годится, лучше взять ELSD, LC/MS or RI. УФ активности там нет (или очень очень маленкая, скорее изменение в рефрактивном индексе потока) видите вы на 3 минуты сигнал воды и может там и сахар есть. Колоть надо побольше и то что видно после промывки амином может быть глюкоза (удерживание 4-7 минут)
drynn
Пользователь
Ранг: 26


31.03.2009 // 12:16:21     
Спасибо всем за отклик!!! =)

Сейчас решил сначала помыть колонку дэионизированной водой (раньше просто дистилят был) и мерковский ацетонитрилом. Если не поможет возьму диэтиламин.

Про RI прекрасно понимаю - но сомневаюсь, что эсть такая возможность финансово. =(
Farma
Пользователь
Ранг: 382


31.03.2009 // 13:39:56     
Аминофаза - довольно капризная и недолговечная фаза. Могла и "слететь". Я в своей практике всегда покупаю эти колонки парами. Если одна слетает, то сразу перехожу на вторую...

К нам тут приезжал представитель фирмы Sequant и предлагал HILIC фазу для разделения сахаров. Картинки действительно понравились. Но цена такая, что можно несколько аминофазных колонок купить.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
ЦКП Оптико-спектральные исследования ЦКП Оптико-спектральные исследования
Создан на базе Института спектроскопии РАН. Среди оснащения: Фурье-спектрометры, Фемтонанооптический лазерный спектрометрический комплекс, хромато-масс-спектрометр.
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


31.03.2009 // 14:53:21     
to drynn:
А вот водой не надо. Кстати, у меня в запасе есть старенький рабочий РД(шимадзу), для Ваших задач как раз подойдет. (хотя Вы не описали точно аналитическую задачу, но я примерно догадываюсь). Пишите на utriv{coбaчkа}mail.ru - договоримся. Я в москве.

to Farma:
А Вы не пробовали другую хроматографическую систему для этой задачи применять (Вариантов-то хватает) или Вы чем-то "ограничены"? Если с аминофазой "аккуратно" обращаться, то иногда она живет долго (для аминофазы ) Да с HILICом это "развод". Можно, кстати говоря, эмулировать "аминофазу" на силикагеле (понятно, что добавляется в элюент ) , я могу Вам ссылку на статью скинуть, если есть потребность.

to Vlad Orlovsky:
На мой взгляд, HILICом для данных сорбатов (глюкоза) в этой системе можно пренебречь, даже если до 80-90% поднять. Если взять вместо апротонного растворителя (MeCN), протонный (МеOH), то сами знаете, что будет.
Да и аналитическая задача здесь, наверно (задача не представлена), достаточно проста, чтобы использовать ELSD и LC-MS.
drynn
Пользователь
Ранг: 26


31.03.2009 // 17:43:48     
2 ALL. Спасибо за совету.
2 Virtu: По поводу РФ - интересно. Будем держать связь =)

К сожалению DEA не нашлось. Но есть триэтиламин. Сколько его можно взять, чтоб смыть лишние протоны и ничего не загубить?

Вообще довольно странные картинки прибор сейчас рисует... (ПФ Н2О:АСN 20:80 или 30:70) Если заколоть воду - два двойных пика 2.5 и 3.0 минуты. Если заколоть смесь ACN:вода - один отрицательный одн положительный пик, если состав ПФ и смеси разные. И один пик если одинаковые... Ничего не понимаю.
А задача примерно такая - определить качественную и количествунную картинку после гидролиза смеси целлюлозы и гемицеллюлозы. Т.е. будет смесь мономеров, димеров и т.д. (Работаю естественно с предколонкой). А у меня сейчас даже модельный раствор глюкозы не получается проанализировать =(
Korvet
Пользователь
Ранг: 1114


31.03.2009 // 21:29:32     
а может ну её эту аминофазу, с плохим детектированием на УФ, да попробовать анализ на С18 с УФ, только сахара определять в виде фенилгидразонов, то есть с дериватизацией. а?

а кстати какой это Вы пик поды на УФ видите? она что на 190 разве поглощает?
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


01.04.2009 // 0:05:16     
Редактировано 1 раз(а)

to drynn: Триэтиламина можно 3-5% об., только затем сразу на элюент переходите. И я Вам, как "врач" говорю, что с УФ (прямое детектирование) эту задачу решать не стоит пытаться, это, как пытаться золото руками намывать Если все-таки упорствуете в своем выборе, тогда Вам прямая дорога в УФ (инверсия), т.е. "кидаете" в элюент что-нибудь "УФ поглощающее" - вариантов тьма, смотря, что у Вас есть "под ногами", чувствительность будет примерно как на РД. Иначе не стоит время тратить, лучше отдохните или еще чего
Можно так же и "связаться" с дериватизацией, но надо определенные реакивы и желательно "прямые" руки.

P.S.:Да, и то, что Вы наблюдаете вполне закономерно. Удивление, часто порождается недостатком информации.
drynn
Пользователь
Ранг: 26


01.04.2009 // 0:19:57     
Редактировано 5 раз(а)

2Korvet: Вода и ACN имеют разное поглощение в УФ, соответственно при изменении соотношения могут возникать пики.

Только, вот казалось бы, ACN должен поглощает сильнее воды в этой области, и пики должны быть отрицательные. Но похоже водичка не совсем чистая (содержит что-то поглощающее), поглащает в УФ и пики получаются нормальные.

2Virtu. Доктор, а скажите, пожалуйста, как Вы думаете, что подойдет для инверсии? Под ногам, еще что-нибудь феноло подобное есть. А что вообще для этого "белые люди" используют? К сожалению ни разу не работал с инверсией. Я так понимаю, концентрацию надо сделать порядка 10-4 (если для фенолов) или еще поменьше?
Заранее спасибо за помощь! =)
зы С дереватизацией не хочется связываться и по "политическим" причинам =) А насчет причин удивления - так никто и не спорит
ps Попробовал даже в литературке посмотреть о "инверсии" - так ничего и не нашел.

  Ответов в этой теме: 40
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты