| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » Персональные форумы ... |
 |
ВЭЖХ определение витаминов в кормах, премиксах и прочих продуктах животноводства. >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ определение витаминов в кормах, премиксах и прочих продуктах животноводства. | ||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
 07.08.2003 // 11:15:33
Редактировано 2 раз(а) Уважаемые Господа! Приглашаю всех подискутировать на тему определения витаминов в комбикормах, премиксах и прочих продуктах животноводства, обсудить проблемы, способы их решения, поделиться наработками.В рамках данной темы предлагаю затронуть все аспекты - аппаратурное оформление, пробоподготовка, хроматографирование и пр. С уважением, Роман. P.S.Для меня эта тема очень актуальна, поскольку я пишу МВИ и в дальнейшем собираюсь аттестовать эту методику. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
07.08.2003 // 18:34:19
Роман! Я вот что тут подумал (или даже - придумал)  Начну немного издалека, как водится... Сейчас у меня началать большая жирная греческая... работа по разработке методики группового анализа пестицидов в растительных образцах (в масле и животных - потом - это ЗНАЧИТЕЛЬНО более трудные образцы). Идея такова - эктракция ацетонитрилом 1мл/г, сульфат магния для расслоения фаз, ацетонитрил разбавить водой до 20% (объем уже 30-50 мл), и за 10 мин пропустить через сверхсшитый полистирол или уголь, смыть этилацетатом и хл. метиленом, оттдуть, перерастворить (я опустил очистку элюата, она ограничена только фантазией - через какие НФ патроны его пропускать) У меня 4 типа полистиролов - LiChrolut EN, Purosep 200, 270, и 200 нитрованный (мной правда ) а также неграфитизированный пиролизный уголь. Все в процессе. ТАК ВОТ , О ВИТАМИНАХ! Может сделать так же? Если речь идет о премиксах, то действительно сначала устроить разделение в системе - премикс - ацетонитрил, а потом по схеме - с учетом, что до 20% разводить не надо, полистирол вынесет и 30-40% (для витаминов и их эфиров) So what? |
||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
08.08.2003 // 6:54:34
Редактировано 1 раз(а) Костя, перенесем обсуждение в этот форум, ОК? Фаза такая Reduced Activity C18 (83 X 4.6мм, 3 мкм, Perkin Elmer), колонка новая. А "Д" стал выходить только тогда, когда я ацетонитрил заменил на метанол. До этого мучался с ацетонитрилом и не мог понять почему его нет ("Д" имеется в виду). Вот такие дела.  На счет твоих предложений с полистиролом думаю это не нужно, обдирать то нечего! Витаминные бленды практически состоят из одних только витаминов. Вот в премиксах матрица уже посложнее (отруби и прочая солянка). Но все равно хроматограмма относительно чистая. Вообще мне кажеться, что идея с полистиролом избыточна, слишком много игр с полярностью, хотя рациональное зерно есть (я встречал методики с ТФЭ для витаминов). Если бы речь шла о крови или каких то других сложных объекта, то тогда, пожалуй, это едиственный способ изолировать "жирорасты", а так...Заметь, что все официальные буржуйские методики (ГОСТ вообще не в счет) проводят омыление и экстракцию практически также как в ГОСТе. Т.е это говорит о том, что метода достаточно "прочная". С уважением, Роман |
||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
08.08.2003 // 7:13:55
Есть еще варианты. Я к сожалению не пробовал, да чесно сказать немного скептически отношусь к таким пробоподготовкам. Одни ребята поступили так: к навеске премикса добавили 0,1% раствор БОТ (бутилокситолуол) в метаноле, выдержали 2 часа, перемешали, отцентрифугировали и сразу в хромик ширнули. Но с "Д" у них тоже траблы были, в своей статье они так и написали, что результаты всегда занижены на 25% и причина этого не выяснена. Хотя я думаю, что причина кроется в ацетонитриле (у них была фаза MeCN-Water:95 к 5). Я даже на их хроматограммах витьамин Д не видел, только А и Е (а они еще говорят о каких-то 25%). А вот другие (им я доверяю) поступили так: навеску залили экстрагентом(1% лимонная в смеси этанол80%/вода), добавили гексана, премешали,отцентрифугировали, гексановый слой отделили и повторили еще раз, а потом в хромик. У "Д" рекавери почти 90%. Понимаешь, А и Е и так нормально переходят в органику, обычная экстракция и все, и выход приличный и пробоподготовка много времени не занимает. Красота да и только! А вот "Д" (засранец такой  )нервы всем портит.
|
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
08.08.2003 // 11:26:10
Костя! Какие пестициды ты собираешься выделять? Если судить по последовательности действий - довольно липофильные. Если это дубовые в-ва типа ДДТ, ГХЦГ и ПХБ, то проще разрушить матрицу серной кислотой. При сложных экстракциях, когда надо высолить орг. растворитель, лучше работает перхлорат магния или аммония. Каковы преимущества полистирола в ТФЭ перед, например, С16 с плотной пришивкой?. |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
08.08.2003 // 11:44:06
Роман! Вот тут к сожалению начинает сказываться тот факт, что я этим анализом не занимался - я не "чувствую" чувствительности анализа по витамину Д, только со слов С.Н.Сычева помню, что она весьма проблематична. Что касается простой экстракции - я это и предлагал, только - не метанолом, а ацетонитрилом (можно и с БОТ), во-первых думаю 2-х часов не потребуется а минут 10, во-вторых в ацетонитрил-то (обычно 3жды по 5 минут экстракция) фактически все (и Д) должно перейти количественно. Единственно - и чего я не понимаю из твоих ответов - неужели такого разбавленного раствора хватит на то чтоб почуять Д????  Еще раз подумал - в этом случае ТФЭ действительно не нужно. Тут проблемы две - сконцентрировать ацетонитрильный экстракт и при этом избавиться от жиров (а то при концентрировании они просто выпадут в осадок и витамины с собой прихватят). Я думаю, что ацтонитрильный экстракт (это мл 15-20 наверное выйдет) надо пропустить через обычный С18 патрон и элюат упарить. Последнее тоже можеть стать проблемой, тогда действовать так - уменьшить объем экстрагента до 12 мл (к примеру 3х4 мл), пропустить через С18 и ацетонитрил отогнать азотом со всеми предосторожностями. Рекавери тщательно померять для каждого типа пробы. Слушай, что с твоей фазой - ума не приложу - бред какой-то
|
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
08.08.2003 // 19:12:49
Леонид! Речь идет о ВСЕХ ВОЗМОЖНЫХ пестицидах. Пока идет апробация методики с ГХМС- определением, так что из рассмотрения пока выходят феноксиуксусные, а основные тагет групс - фосфорорганика, перетроиды, триазины и хлорорганика. Далее по идее можно подработать методику так, чтоб половина пробы шла на ВЭЖХ, т.е. ТФЭ-ГХ(МС)-ВЭЖХ(УФ). Судя по вопросу о преимуществах С16 над LiChrolute EN, доклад надо действительно делать о ТФЭ))) Я выслал тебе на мейл две статью, в пдфе. Вкратце так - ТФЭ на С18 - это все просто фуфло вольные эссенуации на тему  Где-то как-то - фазы вроде слабо сшитого 5-10% стирол-дивинилбензола PRP-1, PLRP-S или винилпирролидона Oasis, но лучше - сверхсшитые полистиролы LiChrolute EN, Isolute ENV+, Purosep итд или вообще - графизированная непористая сажа (похуже) или Hypercarb (porous graphitic carbon) - лучше.Если обсуждение пойдет дальше, то предлагаю создать новую тему
|
||
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
21.08.2003 // 10:43:28
Народ, я работаю на пищевке и столкнулся со следующей проблемой - мне надо организовать определение витаминов в витаминизированном маргарине с помощью ВЭЖХ(Varian ProStar320). Если просто закалывать маргарин растворенный в органике - он просто колонку(Inertsil) забивает и концентрации витаминов к тому же такие низкие, что их UV-detekter едва расчухивает. А методика на гельфильтрационной колонке(CHROMPAK MIKROGEL) не подходит,т ак как витамины выходят одним фронтом и невозможнео определить концентрацию. Никто не может посоветовать, как их можно экстрагировать и сконцентрировать? Короче , есть ли в этой области какие нибуть надежные методы? |
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
21.08.2003 // 14:18:23
Смотрите выше, мы вообще-то об этом и говорим!!!!!
|
||
|
Роман VIP Member Ранг: 327 |
21.08.2003 // 14:35:15
Редактировано 1 раз(а) Навеску (массу подбирают исходя из примерного содержания витаминов в образце) помещают в коническую колбу вместимостью 250 мл, снабженную обратным холодильником. Добавляют антиоксидант (0,1 г гидрохинона или аскорбинки), 50 мл водно-спиртового раствора щелочи и подвергают омылению на водяной бане при температуре 82-85С в течение 30 минут. По окончании омыления содержимое колбы охлаждают до комнатной температуры, добавляют 50 мл дистиллированной воды и 50 мл гексана, смесь тщательно перемешивают и дают отстояться. После расслаивания смеси гексановый слой осторожно сливают в делительную воронку вместимостью 500 мл. Экстракцию гексаном повторяют дважды порциями по 50 мл, последнюю фракцию переносят в делительную воронку, сливая содержимое колбы через воронку с марлевым слоем. Остаток на марле слегка отжимают стеклянной палочкой и выбрасывают. Воронку обмывают дистиллированной водой (около 50 мл) в делительную воронку, в которой собраны гексановые вытяжки. Содержимое воронки промывают дистиллированной водой порциями по 50 мл до нейтральной реакции среды (по индикаторной бумаге). Промытый экстракт переносят в сухую перегонную колбу, пропуская его через обеззоленный фильтр, заполненный безводным сульфатом натрия (около 50 г). Делительную воронку и фильтрующий материал промывают 40 мл гексана. Отгоняют гексан на ротационном испарителе при температуре бани не выше 40С. Сухой остаток растворяют в 3-5 мл гексана, который добавляют порциями, чтобы перенести в предварительно откалиброванную пробирку с притертой пробкой. Полученный экстракт (предварительно отфильтрованный через мембранный фильтр 0,45 мкм) используют для хроматографического анализа. Хроматографический анализ проводят в следующих условиях: Колонка PE reduced activity C-18, длиной 83 мм, диаметром 4,6 мм, заполненная октодецилсиланом зернением 3 мкм Подвижная фаза (элюент) начальные условия — метанол с водой в объемном соотношении 92:8, затем линейный градиент до 100% метанола за 5 минут, после — изократический режим со 100% метанолом в течение 5 минут Скорость элюирования 1,5 мл/мин Температура термостата колонки 350С Длина волны на УФ детекторе 265 нм Объем вводимого экстракта 10 мкл Это лишь общепринятая схема. Вариации по ходу анализа. Дерзай, коллега! |
||
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
22.08.2003 // 8:58:01
СПАСБО ОГРОМНОЕ И МОЕ ПОЧТЕНИЕ УВАЖАЕМОМУ РОМАНУ! Немедленно воспользуюсь вашим советом!!!! |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 101
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
