| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение аторвастатина в плазме ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение аторвастатина в плазме ВЭЖХ | ||
|
DVM80 Пользователь Ранг: 1 |
 23.12.2008 // 14:17:46
Необходимо определить аторвастатин и метаболиты концентрации 5-100 нг/мл в плазме Если кто-то сделал помогите пожайлуста с методикой-никак не вытянуть концентрацию / работаем с - двумя мл плазмы ТФЭ колю 50 мкл ДАДдетектор Как еще сконцентрировать не знаю |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
23.12.2008 // 21:14:54
С учетом того, что надо еще и делить орто- и пара- гидрокси- метаболиты, думаю, что с УФ детектированием чувствительности Вам не хватит в принципе. Да и никто в мире так и не делает. |
||
|
Drone Пользователь Ранг: 124 |
08.09.2009 // 18:32:34
У меня сейчас большая проблема с аторвастатином. Тут, судя по всему, целый "букет". Работаю по схеме SPE-LC-MS. 1. Пытался работать просто осаждая белок. применял ZnSO, хлорную кислоту, метанол, ацетонитрил. Результат: аналит вместе с белком падает в осадок. 2. Если осаждать белок подкисленным МеОН или МеCN, то что-то можно увидеть...НО, если сушить супернатант, особенно при 40-60 градусах в вакууме, то он разваливается. Если поставить пробы в вакуумный концентратор,без нагрева, то сохнет всю ночь и опять же ничего не видно. Точнее, видно,но.... 3. ТФЭ (BondElute C18, 100мг, V-1mL) смывал и MeOH и MeCN и всякие вариации пробовал. Так вот, после осушки и перерастворения экстракта получается так, что есть динамика концентрации (при калибровке) в диапазоне 0,5-2 нг/мл, а более высокие концентрации дают мне пики, равнозначные 1-2 нг. Т.е. что 1 нг, что 50 !!! нг дают один и тот же сигнал! Аналит полностью смывается с сорбента, проверено. С прибором все в порядке, проверено. 4. Подметил, что аторвастатин вдобавок и неустойчив, причем не пойми от чего. В литературе ничего про его лабильность не встречал. Что может его разваливать? По моему мнению, кислород воздуха. В один из стандартов я добавлял аскорбинку, продержался он немного подольше. Кроме того, есть предположение, что он и на стекло виалок неплохо садится, они у меня не силированные. Вот так. Прошу совета, как забороть такую проблему. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2133 |
08.09.2009 // 19:32:07
Редактировано 1 раз(а) 2 Drone: 1. pKa 4.5 + LogP: 4.01 => Может ДХМ (или этилацетат) подкисленный (НСООН) попробовать? 2. В токе азота и не досуха. 3. Или "удачно" вышли за лин. область динамического диапазона детектора (если не проверяли) или сорбируется не на 99,9% или ? 4. Полипропиленовые "виалы" или ? |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
08.09.2009 // 20:38:58
Редактировано 1 раз(а) Про устойчивость. Один из метаболитов аторвастатина - лактон. Он довольно легко гидролизуется, особенно в щелочной среде (кстати, в клинических образцах тоже, так что пробоподготовка только на льду, проверьте также стабильность при хранении). И наоборот, при слишком сильном закислении возможна циклизация аторвастатина в лактон. С адсорбцией проблем не возникало. С ТФЭ проблем не было, но детали я Вам не скажу, подбирайте условия сами. То, что Вы наблюдаете на приборе, скорее всего, ионное подавление от остатков матрицы. Явление весьма распространенное и пакостное. Проверяется элементарно - инфузия раствора аторвастатина после колонки, закалываете экстракт "пустой" матрицы, смотрите, как себя ведет сигнал. Если "проваливается" при времени выхода аторвастатина - значит, оно... Улучшайте разделение и пробоподготовку. Извините, если не даю деталей - это деньги... |
||
|
Drone Пользователь Ранг: 124 |
08.09.2009 // 21:02:08
2 virtu 1.Скорее всего, так и придется сделать, от безысходности. Но первоначально задача стояла (и стоит) на ТФЭ, с прицелом на будущее. 2. Да, было бы хорошо, вот только девайса нет. Придется сваять на досуге. Если сушить в струе воздуха и не досуха, то что-то видно...иногда...временами. В малых концентрациях. 3.Аторвастатин сорбируется полностью, проверял каждый шаг при ТФЭ. Смывается тоже, проверял контрольным смывом. Грешить на прибор? Но вроде причин нет. 4. полипропиленовые виалы, конечно, вариант, но под рукой нет, и в Москве их (уверен на 99%) сейчас тоже нет. Я вношу подготовленную пробу в оплавленный "носик" на 200 мкл. 2 ALL Пользуясь случаем: существуют ли базы данных по pKa + LogP касательно фармпрепаратов? ACD Labs дает результат далеко не во всех случаях (а мож глюк, прога-то ломаная)? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
08.09.2009 // 22:29:46
Редактировано 2 раз(а) На стекло не садится, проверено, проблем не было. А если были деньги на МС-детектор, то должны были найтись и на нормальный испаритель: На пробоподготовку денег жалеть - последнее дело. С хорошей пробоподготовкой можно и на плохом приборе приличные результаты получать, а с плохой - и самый лучший прибор не поможет, и в случае МС детектирования это очень важно, так как многие вещества в плазме давят сигнал в ESI очень сильно. Мне кажется, у Вас именно эта проблема. А так аторвастатин, если без метаболитов, - типичная "ученическая" задачка. И если не принимать в расчет его возможную циклизацию в лактон (и наоборот, возможный гидролиз лактона, присутствующего в образцах в качестве метаболита), то других проблем со стабильностью мы не встречали. А про таблицы pK забудьте, не нужны они... Больше 10 лет методы разрабатываю с самыми разными пробоподготовками, ни разу не пользовался. Все проверяется экспериментом... |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2133 |
08.09.2009 // 22:55:01
Редактировано 1 раз(а) 2 Drone: 1. Есть какой-то смысл упираться в ТФЭ? Я прекрасно понимаю, что "смыслов" много и не все они адекватные. 2. Пять сек на коленке - делал  3. А как проба подготавливалась перед ТФЭ (центриф.?)? Матрица влиять может координально (+ то, что писал ув. Islander). 4. То же выход. З.Ы.: Стекло стеклу рознь  Надо экспериментально проверить просто.
|
||
|
Drone Пользователь Ранг: 124 |
09.09.2009 // 0:16:19
Редактировано 1 раз(а) 1. У меня задача - наладить быстрый и точный анализ в условиях большого потока образцов, причем большинство препаратов в концентрациях 1-100нг. Тут без ТФЭ с концентрированием, думаю, никак. Потому и мучаюсь долго с "ученическими" заданиями, руку,так сказать, набиваю. Хочу в ближайшем будущем перейти на 96-портовый манифолд, расширить "арсенал" колонок и патронов. Сильно желаю работать без лажи и "по-белочеловечьи". 2. Сделать-то не проблема, вот только где еще один генератор азота взять? 3. 0.5 мл плазмы + 0.5 мл 0.2% ТФУ кислоты. Раствор мутнеет, откручиваю и вношу в патрон. Пробовал разводить плазму водой, но в подкисленной среде recovery лучше. Затем быстро, под вакуумом, промывал 1 мл воды (здесь аналита нет) и 200 мкл метанола (здесь тоже "рыбы" нет). Элюировал 2 мл смеси ацетон:МеОН (30:70) с 1% ТФУ. С 1-м мл элюата выходит примерно 10% со 2-м мл все остальное. Степень извлечения контролировал домывкой и внесением димедрола. Да, я знаю что он не годится как IS (т.к. не сильно похож да еще и амин), я его брал из того, что он в данных условиях удерживается на сорбенте еще сильнее. В качестве IS пробовал симвастатин и правастатин, но они валятся еще быстрее. На пробоподготовку денег жалеть - последнее дело. С хорошей пробоподготовкой можно и на плохом приборе приличные результаты получать, а с плохой - и самый лучший прибор не поможет Золотые слова! Без иронии. Вот если бы они всегда и очень скоро в жизнь воплощались... |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2133 |
09.09.2009 // 12:06:06
2 Drone: 1. Может быть... хотя я не уверен, что + ТФЭ - самое простое решение, да и экспрессность... 2. Один и нужен - ставите тройник + клапан и все дела. 3. Думаю, что аналит не целиком переходит в 0.2%ТФУ (Вы проверяли на пробах с добавками?). Может просто сделать по той же схеме, только взять ацн + 0.1%НСООН или 0.05%ТФУ, затем открутить, отобрать, разбавить подкисл. водой, медленно через патрон, промыть вода-ацн-кислота, элюировать просто ацн. Да, в подкисленном и должно быть лучше, только у Вас уж очень подкислен, мне кажется. Может из элюента убрать ТФУ вообще, вместе с ацетоном, и взять просто ацетонитрил? |
||
|
Drone Пользователь Ранг: 124 |
09.09.2009 // 13:28:34
2 virtu Взять поток азота из лини генератор-МСД? Да, думал об этом. Но, боюсь, могут возникнуть проблемы с равномерностью потока газа на прибор (у меня Agilent G1946), если бы удалось это как-то отрегулировать, то было бы красиво. Клапан на добавленную линию, что бы не пропускал воздух в систему? Я правильно Вас понял? |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
