Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
![]() |
|
ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
![]() |
Анализ биожидкостей >>>
|
![]() |
Автор | Тема: Анализ биожидкостей | |||||
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
![]() Здравствуйте! Поставлена задача: определить концентрацию антибиотика в сыворотке крови методом ВЭЖХ. Уровень концентрации составляет порядка 1-5 мкг/мл, связывание с белками 70-80%. Я полагаю, что т.к. содержание белков крови у различных пациентов будет отличаться, то на стадии пробоподготовки (методом ТФЭ или экстракции) возможно возникновение значительных погрешностей определения. Поэтому определять концентрацию можно только методом внутреннего стандарта (после внесения в пробу крови известного количества структурного аналога антибиотика). Верно ли это, или существуют способы учёта таких погрешностей? |
|||||
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
![]() Верно, использование внутреннего стандарта как раз таким способом и является. Кстати, не надо думать, что связанный с белками антибиотик не будет извлекаться методами ТФЭ или жидкостной экстракции. В большинстве случаев можно подобрать условия, чтобы степень извлечения была не хуже 70%. Недавно это уже обсуждалось: А какой антибиотик, если не секрет? |
|||||
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
![]() Большое спасибо за ответ. Когда что-то впервые делаешь - хочется услышать ответ специалиста, что делаешь правильно. Антибиотик - эритромицин. |
|||||
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
![]() Редактировано 1 раз(а) Кстати тут возникает ещё один вопрос: Эритромицин поглощает в короткой УФ - области и детектировать его можно при длине волны до 220 нм. Отсюда низкая чувтвительность и высокие требования к чистоте растворителей. Флуориметрического же детектора у нас нет. Вопрос: существует ли (как бы это назвать) послеколоночные картриджи, которые могли бы модифицировать структуру антибиотиков макролидов таким образом, чтобы они поглощали в видимой области. Если такое есть - кто это производит? (или как правильно называется) |
|||||
sp Пользователь Ранг: 5 |
![]() Уважаемый Slawa ...Вы наверняка делаете обращенно-фазовый вариант...колонка С18... Поделитесь пожалуйста какую используете подвижную фазу ...какой градиент(если есть)... ![]() |
|||||
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
![]()
Я пока что ничего не делаю, только копаю литературу. Использовать видимо буду C18, фосфатный буфер-ацетонитрил. И вообще специалистом себя не считаю, потому что за хроматограф сел совсем недавно. |
|||||
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
![]() Могу Вам только посочувствовать, Вы попали конкретно. Флуорометрический детектор Вам в дюбом случае без интереса, а вот электрохимический не помешал бы - большая часть работ по определению макролидов в биологических объектах сделана именно с ним (на втором месте - LC-MS, как у меня). Той штуки, о которой Вы мечтаете, для этого случая не существует, и вообще, послеколоночная дериватизация возможна лишь в очень редких случаях. Вам остается либо мучиться с низкими длинами волн, оптимизируя экстракцию и хроматографию дабы отделиться от мешающих компонентов сыворотки (а мешать будет все), либо дериватизировать до хроматографии. Первый путь может дать приемлемые результаты, но трудности я Вам обещаю: Второй путь тоже возможен, так как эритромицин это кетон. Надо только чтобы и внутренний стандарт тоже был кетоном. Кларитромицин, например, подойдет. Можно использовать ДНФГ. А можно посмотреть статью: Селективность будет выше, хроматография проще, время анализа можно будет сделать короче, но пробоподготовка может оказаться достаточно сложной. Выбирать вам. |
|||||
valerra Пользователь Ранг: 141 |
![]()
|
|||||
GCuber Пользователь Ранг: 15 |
![]() Посоветую постколоночную иммунохимическую дериватизацию, особенно если есть флуориметрический детектор |
|||||
Slawa Пользователь Ранг: 323 |
![]() to Islander: большое спасибо за ссылку в The Analyst. to GCuber: к сожалению флуориметрического детектора у нас нет. to valerra: может подскажете, где бы почитать в чём принципиальное отличие между различными марками хроматографических колонок, например, XDB С-18 и BDS С-18? |
|||||
valerra Пользователь Ранг: 141 |
![]() Редактировано 1 раз(а) Описание колонок Зорбакс, включая расшифровку абревиатур, принцип их работы, формулы привитой фазы и стратегию разработки метода анализа есть в представителствах Agilent Tehnologies в переводе на русский язык в виде отдельной брошюрки с цветными картинками. Года три назад я им позвонил -- по факсу сбросили копию. |
|
||
|
ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
Размещение рекламы / Контакты |