| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
LC-MS/MS >>>
|
 |
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
DSP Пользователь Ранг: 352 |
 28.12.2006 // 10:34:04
Браво,Islander !Ответ супер! |
||
|
zinj Пользователь Ранг: 19 |
 28.12.2006 // 11:42:37
Редактировано 5 раз(а) Четкая постановка задачи: получить референсную методику количественного определения стероидных и тиреоидных гормонов в сыворотке (не плазме) крови человека на основе хромато-масс-спектрометрии для твердофазного иммуно-ферментного анализа (т.к. технология определения общего тестостерона с применением высокоспецифичных мноклональных АТ, разработанная ВОЗ в рамках Программы по репродукции человека, была калибрована с референсным методом – хромато-масс-спектрометрия) Список интересующих аналитов: 1. Стероидные гормоны (только общий уровень гормонов) a. Кортизол (4-pregnen-6β, 11β, 21-triol-3, 20-dione) Молекулярная масса: 362.46 steraloids.com/pages/page195.html#Q3880-000 b. Прогестерон (4-pregnen-3, 20-dione) Молекулярная масса: 314.46 steraloids.com/pages/page185.html#Q2600-000 c. Тестостерон (4-androsten-17β-ol-3-one) Молекулярная масса: 288.42 steraloids.com/pages/page040.html#A6950-000 d. Дегидроэпиандростерон-сульфат (5-androsten-3β-ol-17-one sulphate, sodium salt) Молекулярная масса: 390.47 steraloids.com/pages/page051.html#A8530-000 2. Тиреоидные гормоны (свободный и общий уровень гормонов) a. Трийодтиронин (3,5,3'-трийодтиронин) Молекулярная масса: 651 b. Тироксин (3,5,3',5'-тетрайодтиронин) Молекулярная масса: 777 Чувствительность метода должна быть меньше: 5 нмоль/л для кортизола 0,5 нмоль/л для прогестерона 0,2 нмоль/л для тестостерона 0,04 мкг/мл для дегидроэпиандростерон-сульфата 0,15 нмоль/л для трийодтиронина 5 нмоль/л для тироксина Производительность: 200 сывороток крови на 1 анализ 1-ого из вышеперечисленных аналитов Колонки 150 х 2.0 (i.d.) mm Phenomenex Synergi 4 Max-RP использовались в этой работе Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry Assay for Simultaneous Measurement of Estradiol and Estrone in Human Plasma Robert E. Nelson, Stefan K. Grebe, Dennis J. O’Kane, and Ravinder J. Singh |
||
|
AB Пользователь Ранг: 5 |
28.12.2006 // 17:22:17
Согласен с Islander – минимальная конфигурация системы зависит от решаемых задач. А так же от бюджета... Масс-спектрометры AB/Sciex совместимы со многими хроматографами других производителей и дают большую гибкость в выборе периферии. API-3000 уже морально устарел и практически снят с производства – вместо него выпускается API-3200 – прибор на базе API-2000, но с новым источником ионов TurboV с улучшеной аэродинамикой. По чувствительности он сопоставим с 3000 но совместим с потоками элюэнта до 3 мл/мин без деления потока. Для решения Ваших задач Вам может больше подойти система QTrap – это тройной квадруполь, в котором третий квадруполь одновременно является линейной ионной ловушкой. Сочетает в себе все преимущества тройного квадруполя и классической ионной ловушки. Что касается чувствительности, то она лишней не бывает – чем более чувствительный прибор – тем проще пробоподготовка, меньше объём начальной пробы и возможность вводить более разбавленные образцы. Соответственно меньше нагрузка на систему – меньше времени на обслуживание прибора. Оптимальная система – API-4000QTrap. Большое значение будет иметь и источник ионизации. Как отмечал ранее Islander для решения Ваших задач больше подойдёт фотоионизационный источник. Я работаю в представительтстве AB в Москве и буду рад предоставить Вам дополнительную информацию. epodvalni(sobaka)mail.ru, Evgeni.Podvalni(sobaka)eur.appliedbiosystems.com |
||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
28.12.2006 // 18:24:24
Ну что ж, задачи проясняются. Из всего набора мне довелось работать только с прогестероном. Пожалуй, Вам еще повезло, что отсутствуют эстрогены, и требуемые пределы обнаружения не слишком низки. Как верно замечено, API-3000 с производсва снят, но на вторичном рынке весьма доступен (почему-то уважаемый AB забыл об этом упомянуть, а ведь в Applied Biosystems не гнушаются поставками подержаных API-3000 с заводской гарантией). В принципе, его возможностей для заявленных задач вполне хватит. Что касается API-3200, то при всех достоинствах новых источников результат может оказаться хуже, чем у старого доброго API-3000, особенно при использовании подвижных фаз с высоким содержанием органики, на которых неплохо работают и старые источники. А ведь для малополярных стероидов подвижная фаза будет весьма летуча и преимущества новой геометрии источника не проявятся, и общая чувствительность будет хуже за счет худшей ионной оптики API-3200. Ведь Вам придется, по крайней мере, для стероидов, использовать фотоионизационный источник. По моему опыту, этот вид источника в сочетании с API-4000 дает не более чем 10-и кратное увеличечение чувствительности по сравнению с API-3000 со своим фотоионизационным источником. То есть, все увеличение чувствительности идет лишь за счет большего отверстия и лучшей ионной оптики в API-4000. Если уж покупать новый прибор, то лучше API-4000, но никак не API-3200. Дополнительная чувствительность поможет Вам легче справиться с проблемами пробоподготовки и уменьшить влияние матрицы. Помимо фотоионизации, для кетостероидов можно использовать и дериватизацию для увеличения чувствительности в ESI. Для этого есть очень хорошие призводные гидразина с кватернизованным азотом, но нужно владеть хроматографией подобных веществ. Для заявленных задач с известными анализируемыми веществами Вам совершенно не нужны ионные ловушки, и уважаемому г-ну AB это тоже хорошо известно. Просто работа у него такая, так что держите с ним ухо востро! А вот насчет источников, то я бы порекомендовал обзавестись сразу тремя в случае API-3000 (Turbo-Ion-Spay, Heated Nebulizer, Photospray) и двумя в случае API-4000 (Turbo-V для ESI и APCI режимов и Photospray). Г-н AB станет Вам предлагать Dual Turbo-V с переключением режимов - это полностью на Ваше усмотрение, но я большого смысла для данных задач не вижу. Хроматограф лучше покупать отдельно, а то г-н AB Вам на него хорошо накрутит. Основной критерий для выбора автосамплера, помимо совместимости с Analyst-ом, это как можно более низкий уровень последовательного загрязнения проб. Градиент не нужен, раз для каждого анализируемого вещества будет отдельный метод. Не забудьте о внутренних стандартах, лучше всего, дейтерированных. Упомянутая Вами колонка может подойти для многих, если не всех, перечисленных веществ (хотя я при использовании фотоионизации предпочитаю нормально-фазное разделение). И проведите исчерпывающий литературный поиск. Хотя фирменные методики (вроде наших) в литературе не всегда отражаются, это полезно для идей и кругозора, особенно если это дело для Вас новое. Лучше, конечно, если Вы наймете опытного разработчика, но где ж Вы его найдете... |
||
|
AB Пользователь Ранг: 5 |
 28.12.2006 // 20:56:00
Конечно же API-4000 предпочтителнее 3200 – это прибор другого уровня – это и улучшенная ионная оптика, и более мощная вакуумная система и много других преимуществ. В среднем, в линейке приборов API-3200-4000-5000 идёт увеличение чувствительности на порядок. По конкретному веществу этот показатель может отличаться – для одного в-ва в 5 , для другого – в 20 раз. Подержанные и восстановленные 3000 бывают – но это разовые варианты и их появление непредсказуемо. С анализом стероидов мне лично сталкиваться не приходилось, хотя много работал с лекарствами и метаболитами – в Sales Rep-ах недавно . Поскольку я побывал по обе стороны прилавка, то стараюсь предлагать клиентам не спецификации приборов и даже не прибор – а РЕШЕНИЕ конкретных задач.Если Вы серьёзно настроены на приобретение прибора – то это тема более детального обсуждения в реальной жизни. Обращайтесь в наше представительство – тел.495-7818191. Тогда можно будет подобрать и наиболее подходящую Вам конфигурацию системы. Dual Spray и Linear Ion Trap – опции иногда полезные, но если Вы чётко знаете, что будете проводить только количественный анализ конечного количества соединений – то Islander абсолютно прав – Вам эти опции не нужны и лучше на эти деньги купить что-нибудь полезное. Наверное, навлеку на себя ещё обвинения в лукавстве и возможно, в чём-нибудь похуже , но хроматографы мы продаём без наценки, а иногда даже немного дешевле, чем производители. Впрочем, я не любитель голословных заявлений – обращайтесь и мы всё обсудим. Естественно, что тандемный масс-спектрометр, да ещё и класса API4000 будет несопоставим по цене с упомянутой Вами ранее LC-MS системой от Shimadzu. Так что Ваш бюджет является немаловажным лимитирующим фактором...Удачи! |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
AB Пользователь Ранг: 5 |
29.12.2006 // 11:30:08
Если интерес к теме ещё не пропал, могу выслать статью по определению 9-ти стероидов, включая 4 стероида из Вашего списка (Тестостерон, DHEA, кортизол и прогестерон). Использовался API-3000 с фотоионизацией, пробоподготовка - осаждение белков ацетонитрилом с последующей ТФЭ. Пределы обнаружения сопоставимы с указанными Вами или ниже. |
||
|
zinj Пользователь Ранг: 19 |
29.12.2006 // 12:34:55
Спасибо! Если не трудно, прошу Вас выслать статью на zinj{coбaчkа}yandex.ru Написал вам на Evgeni.Podvalni(sobaka)eur.appliedbiosystems.com |
||
|
zinj Пользователь Ранг: 19 |
22.01.2007 // 15:42:27
Уважаемые участники беседы! Прошу Вас помочь с поиском внутренних стандартов, меченных дейтерием: a. Кортизол-9,11,12,12-d4 b. Прогестерон-2,2,4,6,6,17a,21,21,21-d9 c. Тестостерон-1,2-d2 d. Дегидроэпиандростерон-16,16-d2 Спасибо. |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
