Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

LC-MS/MS >>>

  Ответов в этой теме: 9

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: LC-MS/MS
zinj
Пользователь
Ранг: 19

27.12.2006 // 13:51:20     
Редактировано 1 раз(а)

Посоветуйте какой высоко-эффективный жидкостной хромато-масс-спектрометр выбрать для количественного определения стероидных и тиреоидных гормонов в сыворотке крови человека?

Что вы можете сказать о таких приборах как:
Shimadzu LCMS-2010 EV
www.analit-spb.ru/lcms_2010ev.php
или
API 3000™ LC/MS/MS System
https://products.appliedbiosystems.com/ab/en/US/adirect/ab?cmd=catNavigate2&catID=600847&tab=DetailInfo
Спасибо
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


28.12.2006 // 0:04:04     
Во-первых, давайте "котлеты отдельно, мухи отдельно". То есть, отдельно выбирать масс-спектрометр и отдельно - хроматографмческую систему.
Имея многолетний опыт работы на МС фирмы Applied Biosystems, в том числе по интересующей Вас задаче определения стероидов в сыворотке, могу с определенностью сказать, что эти приборы Вам подойдут. Чего не смогу сказать о Shimadzu - не только не работал сам, но и не видел приличных публикаций на эту тему, сделанных на этих приборах. Подойдут, насколько мне известно, и некоторые приборы фирм Thermo Electron, Agilent, Waters. Но, насколько я знаю по опыту работы моих коллег и по общению со специалистами из конкурирующих фирм, наиболее надежные и чувствительные тройные квадрупольные инструменты, заточенные именно под этот класс задач, выпускает, все-таки, Applied Biosystems/MDS Sciex.
Подойдет ли API-3000 ? Зависит от задачи. Хотелось бы более четкой ее постановки. В худшем случае, может оказаться недостаточно чувствительным. Например, если надо определять уровни свободных эстрогенов в сыворотке пост-менопаузных женщин. Это величины порядка нескольких пикограмм на мл. В таком случае, Вам надо будет приобрести более чувствительный API-4000 или, еще лучше, API-5000. В этом случае даже на API-4000 Вам не обойтись без дериватизации (подойдет дансилирование). Есть слабая надежда, что на API-5000 может хватить чувствительности для недериватизированных эстрогенов при использовании фотоионизации, но литератруных свидетельств этому пока нет (сам не пробовал, у меня только API-3000 и API-4000).
Если же речь идет о обших уровнях эстрогенов (свободный+конъюгаты), то после энзиматического гидролиза хватит чувствительности и у API-3000, либо после дансилирования, либо с фотоионизацией.
Так что правильная постановка задачи может сэкономить много десятков тысяч долларов.
Я намеренно не касался ни тестостерона, ни многих других гормонов - там сходные проблемы, и прежде, чем покупать оборудование, надо четко представлять себе задачи.
Что касается хроматографической системы, то многое зависит от требуемой производительности. Если речь идет о сотнях анализов в сутки на каждый прибор, то упор надо делать на надежность и совместимость программой Analyst фирмы Applied Biosystems. Если у Вас нет необходимости запускать более 182 анализов в одной партии (2 обоймы по 96), то подойдет совершенно неубиваемый Perkin-Elmer Series 200. Я работал также с Shimadzu, емкость инжектора SIL-HT 4x95 образцов, но его надежность похуже.
Нужна или нет градиентная система, зависит от числа одновременно анализируемых компонентов. Если не более 2-х - 3-х близких соединений, то лучше обойтись изократикой - будет выше производительность. Опять же, не зная Ваших задач, трудно представить, какая конфигурация для Вас оптимальна.
Что касается колонки, то, конечно, упомянутая Вами Phenomenex Synergi Max-RP может подойти для многих задач. А может и не подойти. Например, если Вам надо делить изомеры дегидроэстрона по положению двойной связи.
Что касается пробоподготовки, то вам не обойтись без ТФЭ. Подойдут обычные С18 патроны любой фирмы. Но чем выше чувствительность Вам нужно обеспечить, тем больше проблем с пробоподготовкой у Вас возникнет. Причем как с посторонними пиками, так и с подавлением ионизации. При работе на уровнях в пг/мл будьте готовы к второй ТФЭ после дериватизации и/или применению хроматографической системы с преключением колонок (on-line SPE).
Только не надо писать, что Ваша задача - определять все одновременно в одном заколе и с максимальной чувствительностью. В таких задачах я Вам не помощник...
DSP
Пользователь
Ранг: 352


28.12.2006 // 10:34:04     
Браво,Islander !Ответ супер!
zinj
Пользователь
Ранг: 19


28.12.2006 // 11:42:37     
Редактировано 5 раз(а)

Четкая постановка задачи:
получить референсную методику количественного определения стероидных и тиреоидных гормонов в сыворотке (не плазме) крови человека на основе хромато-масс-спектрометрии для твердофазного иммуно-ферментного анализа (т.к. технология определения общего тестостерона с применением высокоспецифичных мноклональных АТ, разработанная ВОЗ в рамках Программы по репродукции человека, была калибрована с референсным методом – хромато-масс-спектрометрия)

Список интересующих аналитов:
1. Стероидные гормоны (только общий уровень гормонов)
a. Кортизол (4-pregnen-6β, 11β, 21-triol-3, 20-dione)
Молекулярная масса: 362.46
steraloids.com/pages/page195.html#Q3880-000

b. Прогестерон (4-pregnen-3, 20-dione)
Молекулярная масса: 314.46
steraloids.com/pages/page185.html#Q2600-000

c. Тестостерон (4-androsten-17β-ol-3-one)
Молекулярная масса: 288.42
steraloids.com/pages/page040.html#A6950-000

d. Дегидроэпиандростерон-сульфат (5-androsten-3β-ol-17-one sulphate, sodium salt)
Молекулярная масса: 390.47
steraloids.com/pages/page051.html#A8530-000

2. Тиреоидные гормоны (свободный и общий уровень гормонов)
a. Трийодтиронин (3,5,3'-трийодтиронин)
Молекулярная масса: 651

b. Тироксин (3,5,3',5'-тетрайодтиронин)
Молекулярная масса: 777

Чувствительность метода должна быть меньше:
5 нмоль/л для кортизола
0,5 нмоль/л для прогестерона
0,2 нмоль/л для тестостерона
0,04 мкг/мл для дегидроэпиандростерон-сульфата
0,15 нмоль/л для трийодтиронина
5 нмоль/л для тироксина

Производительность: 200 сывороток крови на 1 анализ 1-ого из вышеперечисленных аналитов

Колонки 150 х 2.0 (i.d.) mm Phenomenex Synergi 4 Max-RP использовались в этой работе
Liquid Chromatography–Tandem Mass Spectrometry Assay for Simultaneous Measurement of Estradiol and Estrone in Human Plasma
Robert E. Nelson, Stefan K. Grebe, Dennis J. O’Kane, and Ravinder J. Singh
AB
Пользователь
Ранг: 5


28.12.2006 // 17:22:17     
Согласен с Islander – минимальная конфигурация системы зависит от решаемых задач. А так же от бюджета... Масс-спектрометры AB/Sciex совместимы со многими хроматографами других производителей и дают большую гибкость в выборе периферии.
API-3000 уже морально устарел и практически снят с производства – вместо него выпускается API-3200 – прибор на базе API-2000, но с новым источником ионов TurboV с улучшеной аэродинамикой. По чувствительности он сопоставим с 3000 но совместим с потоками элюэнта до 3 мл/мин без деления потока. Для решения Ваших задач Вам может больше подойти система QTrap – это тройной квадруполь, в котором третий квадруполь одновременно является линейной ионной ловушкой. Сочетает в себе все преимущества тройного квадруполя и классической ионной ловушки.
Что касается чувствительности, то она лишней не бывает – чем более чувствительный прибор – тем проще пробоподготовка, меньше объём начальной пробы и возможность вводить более разбавленные образцы. Соответственно меньше нагрузка на систему – меньше времени на обслуживание прибора. Оптимальная система – API-4000QTrap.
Большое значение будет иметь и источник ионизации. Как отмечал ранее Islander для решения Ваших задач больше подойдёт фотоионизационный источник.
Я работаю в представительтстве AB в Москве и буду рад предоставить Вам дополнительную информацию.

epodvalni(sobaka)mail.ru,
Evgeni.Podvalni(sobaka)eur.appliedbiosystems.com
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


28.12.2006 // 18:24:24     
Ну что ж, задачи проясняются. Из всего набора мне довелось работать только с прогестероном. Пожалуй, Вам еще повезло, что отсутствуют эстрогены, и требуемые пределы обнаружения не слишком низки. Как верно замечено, API-3000 с производсва снят, но на вторичном рынке весьма доступен (почему-то уважаемый AB забыл об этом упомянуть, а ведь в Applied Biosystems не гнушаются поставками подержаных API-3000 с заводской гарантией). В принципе, его возможностей для заявленных задач вполне хватит. Что касается API-3200, то при всех достоинствах новых источников результат может оказаться хуже, чем у старого доброго API-3000, особенно при использовании подвижных фаз с высоким содержанием органики, на которых неплохо работают и старые источники. А ведь для малополярных стероидов подвижная фаза будет весьма летуча и преимущества новой геометрии источника не проявятся, и общая чувствительность будет хуже за счет худшей ионной оптики API-3200. Ведь Вам придется, по крайней мере, для стероидов, использовать фотоионизационный источник. По моему опыту, этот вид источника в сочетании с API-4000 дает не более чем 10-и кратное увеличечение чувствительности по сравнению с API-3000 со своим фотоионизационным источником. То есть, все увеличение чувствительности идет лишь за счет большего отверстия и лучшей ионной оптики в API-4000.
Если уж покупать новый прибор, то лучше API-4000, но никак не API-3200. Дополнительная чувствительность поможет Вам легче справиться с проблемами пробоподготовки и уменьшить влияние матрицы.
Помимо фотоионизации, для кетостероидов можно использовать и дериватизацию для увеличения чувствительности в ESI. Для этого есть очень хорошие призводные гидразина с кватернизованным азотом, но нужно владеть хроматографией подобных веществ.
Для заявленных задач с известными анализируемыми веществами Вам совершенно не нужны ионные ловушки, и уважаемому г-ну AB это тоже хорошо известно. Просто работа у него такая, так что держите с ним ухо востро!
А вот насчет источников, то я бы порекомендовал обзавестись сразу тремя в случае API-3000 (Turbo-Ion-Spay, Heated Nebulizer, Photospray) и двумя в случае API-4000 (Turbo-V для ESI и APCI режимов и Photospray). Г-н AB станет Вам предлагать Dual Turbo-V с переключением режимов - это полностью на Ваше усмотрение, но я большого смысла для данных задач не вижу.
Хроматограф лучше покупать отдельно, а то г-н AB Вам на него хорошо накрутит. Основной критерий для выбора автосамплера, помимо совместимости с Analyst-ом, это как можно более низкий уровень последовательного загрязнения проб. Градиент не нужен, раз для каждого анализируемого вещества будет отдельный метод. Не забудьте о внутренних стандартах, лучше всего, дейтерированных. Упомянутая Вами колонка может подойти для многих, если не всех, перечисленных веществ (хотя я при использовании фотоионизации предпочитаю нормально-фазное разделение). И проведите исчерпывающий литературный поиск. Хотя фирменные методики (вроде наших) в литературе не всегда отражаются, это полезно для идей и кругозора, особенно если это дело для Вас новое. Лучше, конечно, если Вы наймете опытного разработчика, но где ж Вы его найдете...
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Cистема автоматизации хроматографии МультиХром 3.x Cистема автоматизации хроматографии МультиХром 3.x
Программа МультиХром может быть подключена к хроматографическому оборудованию иностранного и отечественного производства. Система состоит из интерфейсного модуля и программного обеспечения для обработки данных и управления процессом хроматографии.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
AB
Пользователь
Ранг: 5


28.12.2006 // 20:56:00     
Конечно же API-4000 предпочтителнее 3200 – это прибор другого уровня – это и улучшенная ионная оптика, и более мощная вакуумная система и много других преимуществ. В среднем, в линейке приборов API-3200-4000-5000 идёт увеличение чувствительности на порядок. По конкретному веществу этот показатель может отличаться – для одного в-ва в 5 , для другого – в 20 раз. Подержанные и восстановленные 3000 бывают – но это разовые варианты и их появление непредсказуемо.
С анализом стероидов мне лично сталкиваться не приходилось, хотя много работал с лекарствами и метаболитами – в Sales Rep-ах недавно . Поскольку я побывал по обе стороны прилавка, то стараюсь предлагать клиентам не спецификации приборов и даже не прибор – а РЕШЕНИЕ конкретных задач.

Если Вы серьёзно настроены на приобретение прибора – то это тема более детального обсуждения в реальной жизни. Обращайтесь в наше представительство – тел.495-7818191. Тогда можно будет подобрать и наиболее подходящую Вам конфигурацию системы. Dual Spray и Linear Ion Trap – опции иногда полезные, но если Вы чётко знаете, что будете проводить только количественный анализ конечного количества соединений – то Islander абсолютно прав – Вам эти опции не нужны и лучше на эти деньги купить что-нибудь полезное. Наверное, навлеку на себя ещё обвинения в лукавстве и возможно, в чём-нибудь похуже, но хроматографы мы продаём без наценки, а иногда даже немного дешевле, чем производители. Впрочем, я не любитель голословных заявлений – обращайтесь и мы всё обсудим. Естественно, что тандемный масс-спектрометр, да ещё и класса API4000 будет несопоставим по цене с упомянутой Вами ранее LC-MS системой от Shimadzu. Так что Ваш бюджет является немаловажным лимитирующим фактором...

Удачи!
AB
Пользователь
Ранг: 5


29.12.2006 // 11:30:08     
Если интерес к теме ещё не пропал, могу выслать статью по определению 9-ти стероидов, включая 4 стероида из Вашего списка (Тестостерон, DHEA, кортизол и прогестерон). Использовался API-3000 с фотоионизацией, пробоподготовка - осаждение белков ацетонитрилом с последующей ТФЭ. Пределы обнаружения сопоставимы с указанными Вами или ниже.
zinj
Пользователь
Ранг: 19


29.12.2006 // 12:34:55     

AB пишет:
Если интерес к теме ещё не пропал, могу выслать статью по определению 9-ти стероидов, включая 4 стероида из Вашего списка (Тестостерон, DHEA, кортизол и прогестерон). Использовался API-3000 с фотоионизацией, пробоподготовка - осаждение белков ацетонитрилом с последующей ТФЭ. Пределы обнаружения сопоставимы с указанными Вами или ниже.
Спасибо! Если не трудно, прошу Вас выслать статью на zinj{coбaчkа}yandex.ru
Написал вам на Evgeni.Podvalni(sobaka)eur.appliedbiosystems.com
zinj
Пользователь
Ранг: 19


22.01.2007 // 15:42:27     
Уважаемые участники беседы!
Прошу Вас помочь с поиском внутренних стандартов, меченных дейтерием:
a. Кортизол-9,11,12,12-d4
b. Прогестерон-2,2,4,6,6,17a,21,21,21-d9
c. Тестостерон-1,2-d2
d. Дегидроэпиандростерон-16,16-d2
Спасибо.

  Ответов в этой теме: 9

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты