Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Колонка Nucleosil 120-3 С18 быстро выходит из строя >>>

  Ответов в этой теме: 28
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Колонка Nucleosil 120-3 С18 быстро выходит из строя
Fox silver
Пользователь
Ранг: 12

24.04.2021 // 8:17:24     
Коллеги, помогите пожалуйста, уже всю голову сломала.
Есть методика из USP фармакопеи и Евр. Фарм.:
Колонка: C18 100*4,6 мм, 3 мкм.
Подвижная фаза: метанол:ацетонитрил:уксусная кислота ледяная:вода (27:2:6:65) (по европейской фармакопее соотношение 28:2:6:66)
Скорость потока 1,2 мл/мин (по европейской 1,5 мл/мин)
объем инжекции 10 мкл, растворитель для проб - диметилсульфоксид.
По Европейской фармакопее для этого анализа рекомендована колонка MN Nucleosil 120-3 C18 100*4,6 мм, 3 мкм. Ее и взяли. После буквально 3 анализов основной пик расплылся, захвостил, асимметрия упала до 0,5. После анализов колонку мыли ацетонитрилом с водой 10:90, постепенно переходя на 100 % ацетонитрил. Обратная промывка водой с метанолом слегка помогла, асимметрия выросла до 0,7, но этого мало.
Других колонок с такой длиной у нас нет, размер пор увеличить не могу, только уменьшить, согласно ФС ГФ, т.к. мне надо валидировать примеси по этой методике.
Попробовала взять колонку такую же, но 150 мм, ее вообще хватило на 1 закол, потом та же самая картина - пик поплыл и хвостит.
Я не совсем понимаю в чем дело? может я ее как то не так промываю? Давление на колонке 100 мм - 180 бар, на колонке 150 мм - 235 бар, но производитель допускает давление до 400 бар. pH подвижной фазы померяла на всякий случай - 2,4. Тоже вроде как не критично для данных колонок.
Может кто сталкивался с таким, есть какие мысли?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
voodensky
Пользователь
Ранг: 528


24.04.2021 // 9:43:08     
Редактировано 1 раз(а)


Fox silver пишет:
Коллеги, помогите пожалуйста, уже всю голову сломала.
Есть методика из USP фармакопеи и Евр. Фарм.:
Колонка: C18 100*4,6 мм, 3 мкм.
Подвижная фаза: метанол:ацетонитрил:уксусная кислота ледяная:вода (27:2:6:65) (по европейской фармакопее соотношение 28:2:6:66)
Скорость потока 1,2 мл/мин (по европейской 1,5 мл/мин)
объем инжекции 10 мкл, растворитель для проб - диметилсульфоксид.
По Европейской фармакопее для этого анализа рекомендована колонка MN Nucleosil 120-3 C18 100*4,6 мм, 3 мкм. Ее и взяли. После буквально 3 анализов основной пик расплылся, захвостил, асимметрия упала до 0,5. После анализов колонку мыли ацетонитрилом с водой 10:90, постепенно переходя на 100 % ацетонитрил. Обратная промывка водой с метанолом слегка помогла, асимметрия выросла до 0,7, но этого мало.
Других колонок с такой длиной у нас нет, размер пор увеличить не могу, только уменьшить, согласно ФС ГФ, т.к. мне надо валидировать примеси по этой методике.
Попробовала взять колонку такую же, но 150 мм, ее вообще хватило на 1 закол, потом та же самая картина - пик поплыл и хвостит.
Я не совсем понимаю в чем дело? может я ее как то не так промываю? Давление на колонке 100 мм - 180 бар, на колонке 150 мм - 235 бар, но производитель допускает давление до 400 бар. pH подвижной фазы померяла на всякий случай - 2,4. Тоже вроде как не критично для данных колонок.
Может кто сталкивался с таким, есть какие мысли?

1. Вопрос к методике. В USP я не встречал методики, где явно указывается колонка. Систематически, я конечно, это не смотрел. Если это не секрет, то приведите методику или ссылку.
2. по европейской фармакопее соотношение 28:2:6:66 - в сумме 100 не получается
3. Если коэффициент 0,5, то пик не хвостит. У него растянут фронт. С той информацией, что Вы дали я бы грешил на:
а. грязный образец. Состав образца не совпадает с USP, полявляется сильно удерживающий компонент, который пачкает колонку. Например, краситель в оболочке таблеток.
б. Коробку с колонками просто уронили на цементный пол или заморозили. Образовались трещины - по ним и выходит размытый фронт.
в. ПФ вязкая, давление большое. Колонку плохо закрутили, она подсохла, а Вы сразу подали ПФ на потоке 1,2 мл/мин. В результате - гидравлический удар и пошли трещины. Я встречал адептов экономии времени и подачи ПФ без каких-либо переходов. На 20-40% ацетонитриле это проходит. На 30% метаноле - вряд ли.
4. Если этот препарат в USP - то не надо изобретать велосипед. Посмотрите научные статьи с анализом этого препарата. Если ничего не найдете про проблемы с методикой или колонкой, то проблемы в реализации методики или образцами.
Fox silver
Пользователь
Ранг: 12


24.04.2021 // 10:44:42     

voodensky пишет:
1. Вопрос к методике. В USP я не встречал методики, где явно указывается колонка. Систематически, я конечно, это не смотрел. Если это не секрет, то приведите методику или ссылку.
2. по европейской фармакопее соотношение 28:2:6:66 - в сумме 100 не получается
3. Если коэффициент 0,5, то пик не хвостит. У него растянут фронт. С той информацией, что Вы дали я бы грешил на:
а. грязный образец. Состав образца не совпадает с USP, полявляется сильно удерживающий компонент, который пачкает колонку. Например, краситель в оболочке таблеток.
б. Коробку с колонками просто уронили на цементный пол или заморозили. Образовались трещины - по ним и выходит размытый фронт.
в. ПФ вязкая, давление большое. Колонку плохо закрутили, она подсохла, а Вы сразу подали ПФ на потоке 1,2 мл/мин. В результате - гидравлический удар и пошли трещины. Я встречал адептов экономии времени и подачи ПФ без каких-либо переходов. На 20-40% ацетонитриле это проходит. На 30% метаноле - вряд ли.
4. Если этот препарат в USP - то не надо изобретать велосипед. Посмотрите научные статьи с анализом этого препарата. Если ничего не найдете про проблемы с методикой или колонкой, то проблемы в реализации методики или образцами.
Спасибо большое за ответ.
Разберу по пунктам:
1. Сейчас в последней монографии USP online можно посмотреть дополнения к методике, и на многие методики указываются конкретные колонки. Раньше это была дополнительная книга к USP с указанием колонок. Иногда указывалась просто фаза, а в некоторых случаях и конкретные колонки. В данном случае в USP указаний на колонку нет и сама методика на пересмотре. Зато в Европейской указана конкретная колонка. Ее и взяли.
2. Как есть. Не верите, сами посмотрите) Монография "Диосмин".
3. Образец наичистейший. USP system suitability. Колю четко по методике 1 мг/мл. Развожу в диметилсульфоксиде Sigma Aldrich качества ВЭЖХ.
Колонки не падали и не замораживались, это точно. Да и падали в моей практике колонки, фазу С18 довольно сложно угробить, и чтоб вот так, моментально...
Перед анализом колонку промывала также вода : ацетонитрил, сначала 90:10, затем 65:35, затем переходила на подвижную фазу. Поток добавлялся постепенно, с шагом 0,2-0,3 мл/мин.
4. Да вот посмотрела, на самом деле конкретной инфы довольно мало, в основном флавоноиды с масс-детектором определяют, качественный состав. Может конечно плохо смотрела
voodensky
Пользователь
Ранг: 528


24.04.2021 // 11:00:08     
Так пик все-таки хвостит? Почему у него тогда коэф < 1?
voodensky
Пользователь
Ранг: 528


24.04.2021 // 11:07:45     

Fox silver пишет:
В данном случае в USP указаний на колонку нет и сама методика на пересмотре. Зато в Европейской указана конкретная колонка. Ее и взяли.

В 10 EP колонки нет. Только описание фазы.
vmu
Пользователь
Ранг: 1250


24.04.2021 // 11:09:38     

voodensky пишет:
В 10 EP колонки нет. Только описание фазы.
Тут ищут подробности по методикам из EP:
https://www.edqm.eu/en/knowledge-database
https://extranet.edqm.eu/4DLink1/4DCGI/Web_View/mono/1611
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Карботек, ЗАО Карботек, ЗАО
Производит и поставляет изделия из углеродных материалов с 1999 года. Основные продукты - изделия из графита для предприятий цветной металлургии, машиностроения, и аналитических лабораторий, в том числе: угли (электроды) спектральные, порошки графитовые, тигли для газоанализаторов, кюветы для атомно-абсорбционных спектрометров, тигли стеклоуглеродные, графитовые лопатки для вакуумных насосов, и другие виды изделий.
vmu
Пользователь
Ранг: 1250


24.04.2021 // 11:14:15     
Fox silver, проба стоит в охлаждаемом автосамплере? Температура плавления ДМСО равна 19 °C...
Объем пробы уменьшать пробовали? Кольните 5 мкл, 2 мкл.
Проблема только с основным веществом в концентрации 1 мг/мл или с пиками примесей тоже плохо?
voodensky
Пользователь
Ранг: 528


24.04.2021 // 11:24:09     

vmu пишет:

voodensky пишет:
В 10 EP колонки нет. Только описание фазы.
Тут ищут подробности по методикам из EP:
https://www.edqm.eu/en/knowledge-database
https://extranet.edqm.eu/4DLink1/4DCGI/Web_View/mono/1611

Спасибо. Буду иметь ввиду.
Но, если бы я не читал фармакопею, я бы начал с колонки C8.
Fox silver
Пользователь
Ранг: 12


24.04.2021 // 11:31:14     

voodensky пишет:
Так пик все-таки хвостит? Почему у него тогда коэф < 1?
Чуть позже доберусь до компа, выложу картинки для более наглядной картинки
Fox silver
Пользователь
Ранг: 12


24.04.2021 // 11:37:30     

vmu пишет:
Fox silver, проба стоит в охлаждаемом автосамплере? Температура плавления ДМСО равна 19 °C...
Объем пробы уменьшать пробовали? Кольните 5 мкл, 2 мкл.
Проблема только с основным веществом в концентрации 1 мг/мл или с пиками примесей тоже плохо?

Нет, проба конечно без охлаждения
Плохо именно с основным веществом, хотя и примеси становятся поразмытее. Дело именно в том, что это произошло как то одномоментно: я позавчера заколола ппхс на более длинной колонке, все хорошо, я ее помыла, так как задачи продолжать ещё не было определенной, на след день готовлюсь делать валидацию и чисто на всякий случай колю ещё раз ппхс. И все, на хроматограмме полный треш. То есть на колонку то даже нагрузки не было большой. Обычно такая ерунда бывает если делаешь какие нибудь мази, гели, постепенно расплывается основной пик - решается заменой предколонки и все. А тут с одной инжекции чистого вещества все поплыло.
vmu
Пользователь
Ранг: 1250


24.04.2021 // 11:40:22     

Fox silver пишет:
В данном случае в USP указаний на колонку нет и сама методика на пересмотре.
Действующая статья в USP есть, но подробностей про колонку на сайте USP для диосмина нет:
https://www.uspchromcolumns.com/chrom/display

  Ответов в этой теме: 28
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты