| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан? >>>
|
 |
| Автор | Тема: ВЭЖХ. Как лучше подкислить н-гексан? | |||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
 27.06.2016 // 20:22:26
Здравствуйте! В изократическом режиме н-гексаном анализируем триацилглицерины и ацетаты моноацилглицеринов (по сути, тоже ТАГи, только с остатком уксусной кислоты в одном из положений углеродного атома глицеринового остатка). Колонка: Luna Silica 250*4.6 мм, 5 мкм, 100А, детектируем при 212 нм, ширина щели 2 нм, температура ячейки 30 С. Триацилглицерины элюируются на 5 минуте, а вот АсДАГов не вижу вообще. Интуиция подсказывает, что гексан следует подкислить. Вопрос: как лучше? Изначально использовать кислый н-гексан или в качестве ПФ использовать смесь гексан/2-пропанол и подкислить именно 2-пропанол? Какую кислоту лучше взять? Серную, соляную или ортофосфорную? Спасибо! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2133 |
27.06.2016 // 20:28:55
Редактировано 1 раз(а) Не надо ничего "подкислять". Вам нужно просто увеличить элюирующую силу элюента, т.к. ацетаты МАГ намного более полярны, чем ТАГ. Соотв. добавьте просто изопропанол (начните с 1%об.). Время удерживания ТАГов уменьшится при добавке ИПС и может так получиться, что в условиях элюирования ацетатов МАГ, ТАГи вообще не будут удерживаться сорбентом. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
27.06.2016 // 21:05:35
Редактировано 1 раз(а) Но раньше ТАГов они точно не должны элюироваться? А то я только что сделал свежий экстракт гексаном, там должно быть 90% АсДАГ и 10% ТАГ, так вот на 4-й минуте появился мощный пик.. странно это как-то попробую уже завтра заколоть гексановый раствор подсолнечного масла, чтобы наверняка зафиксировать время элюирования ТАГ. |
|||||
|
virtu VIP Member Ранг: 2133 |
28.06.2016 // 0:16:22
Редактировано 1 раз(а) Нет, не должны. Кстати, ацетаты ДАГов должны элюироваться раньше ацетатов МАГов. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
28.06.2016 // 13:24:51
Да, вы были правы, АсДАГи все остались на колонке. Видимо, они будут элюироваться сильно позже ТАГов.. я наивно полагал, что на ВЭЖХ можно более или менее воспроизвести ТСХ )) |
|||||
|
Lipids Пользователь Ранг: 459 |
28.06.2016 // 17:33:03
Редактировано 1 раз(а) Воспроизвести можно, только вы можете не увидеть всех пятен.. Кстати, для лучшей стабильности лучше использовать гептан, вместо гексана - у него и полярность пониже чем у гексана, и базовая линия будет лучше совокупно со стабильностью времен удерживания. По теме, минеральные кислоты в гексане нерастворимы, более того они крепко сядут на силикагель колонки. Лучше всего использовать уксусную кислоту для подобных вещей (в смысле липиды с кислотными ионизируемыми группами), но в вашем конкретном случае добавлять кислоту в фазу, видимо смысла не имеет. Опять же, если вы работаете с градиентом, то добавляют по разному, и в более полярный компонент (IPA) и в оба - в зависимости от задачи. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
28.06.2016 // 17:58:55
Редактировано 1 раз(а) За идею с гептаном спасибо! Как раз меня не устраивает, что ТАГи элюируются так быстро... Сычёв в своей монографии не советуют органические кислоты для работы с немодифицированным силикагелем, поэтому я и спросил, можно ли взять серную... С градиентом ещё не пробовал, не знаю как поведёт себя нулевая линия при увеличении доли 2-пропанола... пока только в изократике работаю. |
|||||
|
Lipids Пользователь Ранг: 459 |
28.06.2016 // 18:14:06
Редактировано 1 раз(а) Вообще говоря, сильной разницы между гептаном и гексаном вы не увидите при анализе ТАГов у вас только сам процесс разделения пойдет стабильнее. Насчет уксусной (вар. ТФУ) и муравьиной кислот (вспомнил!) - а больше реально и выбирать не из чего. В принципе, можно переключиться на HILIC колонки - но судя по всему у вас УФ детектор, а они весьма плохи на УФ - дают плохую базовую линию. Силикагельные колонки действительно фиговые для анализа, но иногда выбора нету никакого приходится мириться... Кстати, а у вас какой поток растворителя - через колонку-то? Если у вас на чистом гексане, при 1-1.2 мл в минуту ТАГи выходят на 4 минутах у вас уже что-то в гексане есть или колонка дезактивирована. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
28.06.2016 // 18:32:49
Редактировано 1 раз(а)
Гексан Scharlau взял свежий, HPLC GRADE, 1 мл/мин До работы с НАГами делили на этой колонке фосфолипиды с ПФ ацетонитрил:метанол:серная к-та 100:3:0,05 может дело в этом? Если серная "села" на сорбент, как можно реанимировать колонку? |
|||||
|
Lipids Пользователь Ранг: 459 |
28.06.2016 // 18:44:51
Редактировано 1 раз(а) Гексан Scharlau взял свежий, HPLC GRADE, 1 мл/мин До работы с НАГами делили на этой колонке фосфолипиды с ПФ ацетонитрил:метанол:серная к-та 100:3:0,05 может дело в этом? Если серная "села" на сорбент, как можно реанимировать колонку? Мы реанимировали силикагель промыванием IPA, водой, фосфорной кислотою 85% до полной бесцветности, потом водою, IPA, и гептаном. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
28.06.2016 // 21:43:30
Редактировано 1 раз(а) Как долго промывать iPrOH/водой и т.д.? Фосфорной нет, увы.. И цветность проконтролировать как-то непросто, по-моему у ВЭЖХ колонки  И когда в норме должны элюироваться ТАГи на такой колонке, если 4 минуты -- это слишком рано? |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 47
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
