| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Сигнал DAD уходит в минус. В чём проблема? >>>
|
 |
| Автор | Тема: Сигнал DAD уходит в минус. В чём проблема? | |||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
 03.07.2015 // 13:52:39
Добрый день! Разделяем пигменты микроводорослей на ВЭЖХ-DAD. Колонка С-18, 150х4,6, 5 мкм, ПФ: А -- ацетонитрил:вода 98/2, Б -- этилацетат, программа градиента: 0-5 мин: А 100% 5-8 мин: А к Б 8-25 мин: Б - 100% 25-28 мин: Б к А 28-40 мин: А 100% Регистририрую по 2 длинам волн: 450 и 655 нм. стабильно на 10-й минуте нулевая линия уходит в "минус" на несколько минут и в этой "яме" выходят хлорофиллы a и b, B-каротин. С чем это связано? Насколько это критично? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
 03.07.2015 // 16:43:41
Редактировано 1 раз(а) С грязным ацетонитрилом связано. (Точнее- с грязным элюентом А). ДАД автообнуляется на старте анализа, а далее оптическая плотность тупо падает. Все просто.  Странно только, что у тебя все это происходит на длине волны ажна 450 и 655 нм. На таких длинах чистота элюента как-то некритична. Получается, что этилацетат у вас чище ацетонитрила... о_О На какой помойке брали MeCN? Колись... |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
03.07.2015 // 16:57:04
Но яма длится всего 2,5 минуты.. потом нулевая линия возвращается. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
03.07.2015 // 17:01:29
Редактировано 1 раз(а) Ну тогда связано с образцом. В каком виде и сколько вводишь? (Раствор в чем сделан?) Скорость ПФ- какая? Интересно, что твои целевые соединения выходят прямо в этой яме... Потом, может, под "ямой" ты имеешь в виду момент, когда какой-то умник запрограммировал переключение на эти две волны (450 и 655 нм), а в остальном "пространстве анализа" ДАД тупо шарашит канал на 254 нм? Ты че-нить в программировании ДАДов понимаешь? Посмотри там- кто программу писал? (Так никто не делает, в здавом уме то, но в жизни и не такое увидишь). |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
03.07.2015 // 17:12:50
Этилацетат ACROS, Ацетонитрил - Scharlau, оба HPLC grade. Образец (20 мкл) вкалываем либо в ацетоне, либо в хлороформ-метанольной смеси (по Фолчу), либо в метаноле. Скорость 1 мл х мин-1, В этих длинах волн (450 и 655) пишет с первой минуты (190, 205 и 254 по умолчанию прописывает дополнительно и на хроматограмме во время анализа их не отображает). |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
03.07.2015 // 17:23:55
Я не знаю, "с какой минуты" он у тебя там пишет, с первой или десятой. Смотри программу ДАДа, и тисни сюда хроматограмму, пусть народ полюбуется. Заочно разбираться уже достало. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
03.07.2015 // 17:51:18
Редактировано 1 раз(а) Хроматограмма вот: https://cloud.mail.ru/public/3tmf/5vVYDyXYC Где смотреть программу ДАДа не знаю ещё. |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
03.07.2015 // 19:39:49
Фигня какая-то. Там нет никакого разделения. Пробовали вводить холостую пробу (просто растворитель пробы)? Пробовали делать холостой градиент? Градиент очень резкий- за 3 (!!) минуты полная смена с А на Б. И наоборот. Потом, непонятный растворитель в пробе. Кто изобрел подобную схему разделения? Скорее всего, тут наложилось несколько факторов. Но я считаю, что подобная схема совершенно непригодна. Ни для чего. Я бы убил на месте того, кто это придумал. |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
03.07.2015 // 20:55:33
Методику взяли у коллег из МГУ -- они уже много лет успешно делят (судя по публикациям), правда колонка 250 мм. Сколько минут достаточно для смены компонентов ПФ? (в ряде статей видел смену градиента и за 1 минуту) Пробы растворены в смеси хлороформ-метанол, в ацетоне или в метаноле (выбираем оптимальный метод экстракции пигментов для каждого штамма). Независимо от растворителя пробы наблюдается такая ситуация, в том числе, и при холостом градиенте. Мне кажется, "провал" начинается при переходе на этилацетат (с учётом мертвого объема (миксер на 4 мл, если мне не изменяет память). Возможна ли проблема в нём? |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
03.07.2015 // 21:17:11
Но миксер такого объема нельзя применять с колонками 4.0-4.6 мм, че смеяться? Это миксер от препаративного варианта. Ну а кажется правильно- возмущение на нулевой складывается на границах смешения А и Б, и плюс растворитель пробы. Нет, ну все равно. 45 минут гонять систему А-Б-Б-А ради такого мерзкого разделения? Оптимизируйте все это дерьмо. Прейдите на нормально-фазовый вариант, в конце концов. (Правда, надо учитывать происхождение и характер вашего образца). |
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
03.07.2015 // 22:22:39
На препаративной линии миксер на 14 мл. Оптимизировать разделение продолжу, тем более с недели на неделю прибудут нормально-фазные колонки (250 мм). Пока же попробую растянуть смешение во времени -- вдруг лучше станет. Стоит ли уменьшать общий поток? Поспособствует ли это разделению? |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 24
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
