| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Колонки для эксклюзионной хроматографии (кондиционирование, состыковка нескольких) >>>
|
 |
| Автор | Тема: Колонки для эксклюзионной хроматографии (кондиционирование, состыковка нескольких) | |||||
|
татьяна) Пользователь Ранг: 2 |
 14.08.2011 // 21:04:37
Добрый день! Подскажите, пожалуйста, если кто знает. Нужно провести определение молекулярно-массового распределения одного ЛС (подвижная фаза - водный буфер), а одна из колонок новая (точное ее именование сейчас сказать не могу...), чем и сколько ее нужно в первый раз уравновешивать? Спасибо заранее за ответ! |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
татьяна_ Пользователь Ранг: 5 |
15.08.2011 // 9:44:58
Точное название колонки: TSK Gel G4000 PW 300x7,5 17mkm. И еще вопрос: нужно поставить две колонки, вторая - Separon Hema-Bio 1000 250x8 10mkm. Какую из этих колонок ставить первой, какую второй?? Если кто знает, помогите, пожалуйста, найти ответ. Заранее спасибо! |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
15.08.2011 // 10:43:41
Здравствуйте! Зная принцип (в Вашем случае гель-проникающей хроматографии), то должны знать, что приведенные Вами колонки имеют определенный диапазон эксклюзии, который должен в случае бимодальных систем, типа Вашей, перекрываться от одной колонки к другой. Исходя из этого первой (выход после самплера или инжектора) я бы поставил Separon -Hema-Bio 1000 (у которой диапазон эксклюзии сдвинут в зону более малых масс), ну а потом соответственно TSK-Gel 4000. Полимер с высокими молекулярными массами будет попадать в зону эксклюзии первой колонки и подвергаться фракционированию на второй колонке, в то время как более низкомолекулярные полимерные субъединицы будут разделяться на первой колонке. Вы, я так понимаю, будете анализировать что-то типа гепаринов или эноксипаринов ? |
|||||
|
татьяна_ Пользователь Ранг: 5 |
15.08.2011 // 11:47:54
Garry, спасибо Вам огромное за ответ! Я в этом деле новичок и мало что пока знаю в эксклюзионной хроматографии. Нам нужно определить молекулярно-массовое распределение в одном препарате, содержащем гидроксиэтилкрахмал. Не могли бы вы еще подсказать, чем и как долго нужно стабилизировать новую колонку TSK Gel G4000 PW? Спасибо за помощь! |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
15.08.2011 // 12:06:13
Вы можете "наломать дров" без понимания сути происходящего. Во-первых, какой метод определения ММР, вернее детектирования, заложен в Ваш НД ( MALLS-детектор или рефрактометрический детектор). Обычно для ГЭКов и для декстранов я использовал 0,1 М NaNO3 с 0,05 % азида натрия (это рекомендации Тойо-Соды). Можно работать и на 0,9 % хлориде натрия, преценденты имеются, хотя я в свой НД закладывал нитрат натрия. Если у Вас в НД - используется MALLS, то очень тщательно нужно подходить к подготовке образцов и подвижной фазы - очень тщательная фильтрация и дегазация(продувка гелием). Стабилизация ГП-колонки процесс достаточно тривиальный, НО!!! на расходах элюента не более 0,5 мл/мин. Процесс стабилизации можно считать завершенным, если не наблюдается видимого дрейфа базовой линии. Обычно 4-5 часов достаточно, хотя некоторые уделяют этому процессу ночь. Но, я считаю это извращением. И то это необходимо в случае использования новых, не работавших еще колонок. Если работаете постоянно, то процесс уравновешивания колонок значительно сокращается. |
|||||
|
татьяна_ Пользователь Ранг: 5 |
15.08.2011 // 14:06:37
Спасибо за ответ! У нас рефрактометрическое определение ММР. Промываем новую колонку раствором хлорида и азида натрия (ПФ по статье). |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
IvanStyskin Пользователь Ранг: 149 |
15.08.2011 // 14:58:30
А полностью условия определения там описаны? Азид натрия это обычно то в чем хранят (препятствует зарастанию). Странное сочетание колонок описано если имеется ввиду последовательное соединение... В статье что указано по подсоединению колонок? |
|||||
|
татьяна_ Пользователь Ранг: 5 |
15.08.2011 // 15:47:57
Здравствуйте, Иван! Спасибо за участие в обсуждении) В методике определения написаны условия определения (к сожалению, нет подробного описания, как потом проводить расчеты... с этим тоже потом придется повозиться...). Используемая подвижная фаза - 9г натрия хлорида и 50 мг натрия азида на 1л воды. Вот что там написано про колонки:"колонки для ВЭЖХ биополимеров 1) длиной 100 мм и внутренним диаметром 7,6 мм; сорбент - TSK Gel PW 4000, 10мкм; 2) длиной 500 мм и внутренним диаметром 4,0 мм; сорбент - Сепарон НЕМА 1000 Bio, 10 мкм; или две колонки длиной 250 мм и внутренним диаметром 4,0 мм; сорбент - Сепарон НЕМА 1000 Bio, 10 мкм; или другая колонка или колонки с подходящим сорбентом для биополимеров с М.м. от 10000 до 1500000Да." Т.е. по сравнению с нашими колонками фазы те же, но размеры, в том числе частиц, другие (влияет ли это на последовательность колонок?). Про последовательность соединения в методике ни слова (или это цифры 1 и 2?). |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
15.08.2011 // 15:58:19
Редактировано 1 раз(а) Дело в том, что "ноги" данного АНД ростут неизвестно откуда я бы выбрал совершенно другую комбинацию колонок. Но.... говоря по-украински "шо маємо, те маємо". У Вашего отца - царство ему небесное, я в свое время покупал несколько иной набор колонок. Но... зачастую коллеги поставлены в такие рамки, что... касаемо ГЭКов, ... пути Господни неисповедимы.... Ведь диапазон эксклюзии Separon HEMA-Bio1000 - 800-2000 kDa (неизвестно по чем) а TSK -GEL PW4000 - 2000-300.000 кДа (по ПЕГам), 1.000-700.000 кДа по декстранам. В принципе, можно считать, что перекрываются диапазоны эксклюзии по декстрану, ГЭКи для инфузии имеют ММ в пределах 15.000 кДа до 500.000 кДа, поэтому будет некоторая ошибка в определении 10% высокомолекулярной фракции. Но... все зависит от ММ применяемого в лек.форме ГЭКа. |
|||||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
15.08.2011 // 16:04:15
Редактировано 1 раз(а) Оооо.... расчет, это особая графа в НД. Дело в том, что в Российских НД указан MALLS детектор, который позволяет определять абсолютную молекулярную массу и не требует калибровки.Но.... есть определенные сложности.... Я на КрасФарме предлагагал использовать методику ВР или ЕР для декстранов за неимением MALLS, благо стандарты ГЭК можно купить. Вот, конечно, дочитался о размере частиц..... в колонках. Эффективность колонок с 17 мкм сорбента будет существенно хуже чем с 10 мкм. Но.... |
|||||
|
татьяна_ Пользователь Ранг: 5 |
15.08.2011 // 16:23:10
Оооо.... расчет, это особая графа в НД. Дело в том, что в Российских НД указан MALLS детектор, который позволяет определять абсолютную молекулярную массу и не требует калибровки.Но.... есть определенные сложности.... Я на КрасФарме предлагагал использовать методику ВР или ЕР для декстранов за неимением MALLS, благо стандарты ГЭК можно купить. Стандарт ГЭК у нас есть.... В программу тоже включен расчет ММР.... Так что надеемся, что с этим разберемся......) |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 35
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]