Форумы ANCHEM.RU: Странности в ВЭЖХ, помогите разобратся

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Странности в ВЭЖХ, помогите разобратся >>>

  Ответов в этой теме: 146
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

11.02.2005 // 23:41:24

G.Baram пишет:

Andrew пишет:
Суть в том, что в градиенте АН-0,025 М р-р ТФУ наблюдается мощный пик.
Какие параметры у градиента и как регенируется колонка?

от 5% АН при любой крутизне градиента пик есть. В зависимости от крутизны меняется его положение. Регенерация 3 мин (600 мкл) 5% АН

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

11.02.2005 // 23:53:30

Получив, мне кажется, добро, отправлю письмо с хроматограммой по мэйлу на "info" на следующей неделе, как хроматограмму с работы принесу. Заранее спасибо. Почаще приходите на форум.

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

11.02.2005 // 23:55:15

Редактировано 1 раз(а)

Чтобы проверить природу пика надо сделать несколько хроматограмм без пробы.
1. Обычный градиент (например, 3000 мкл от 0 до 100% Б; регенерация 600 мкл 0% Б).
2. Перед запуском хроматограммы промыть колонку в ручном режиме 1000 мкл 0% Б.
Варианты:
а. Пик остался неизменным. Вывод - примесь в ACN.
б. Пик увеличился примерно в 2 раза. Вывод - примесь в элюенте А. В этом случае надо сделать градиент без ТФУ по п.1.
Варианты:
в. Пик остался. Вывод - грязная вода.
г. Пик исчез. Вывод - грязная ТФУ.
Не самый быстрый, но единственно однозначный способ!

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

11.02.2005 // 23:57:40

Andrew пишет:
...отправлю письмо с хроматограммой по мэйлу на "info"...

Надежнее послать файлы на gbaram@mail.ru.
А может быть мой "рецепт" Вам и так поможет.

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

12.02.2005 // 0:02:57

Спасибо, часть из описанного я делал, но пик имеет форму совершенно не характерную для хроматографируемого вещества. Поэтому, чтобы не рассказывать на пальцах, пошлю на мэйл минут через 10-15. Дома на винте нашлись хроматограммы.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

ФГУП Институт минералогии, геохимии и кристаллохимии редких элементов
Отдел научно-производственных аналитических работ ФГУП ИМГРЭ. Отдел выполняет анализ минерального сырья, грунтов, донных отложений, природной, питьевой и сточной воды, атмосферного воздуха, растений. В лабораториях определяются содержания более чем 50 химических элементов, выполняется силикатный анализ горных пород. Отдел аккредитован в соответствии со стандартом ГОСТ Р ИСО/МЭК 17025-2006

Korvet
Пользователь
Ранг: 1114

12.02.2005 // 14:08:22

И так, продолжение "сибазоновой" компании, а то Вы что-то господа куда-то от темы отдалилсь. Ну хроматограммы Григорию Иосифовичу я выслал на указанный адресс. Я думаю что от него объяснения будут более правдоподобны чем от меня. Однако я всё же рискну... дело господа в кинетике перехода форм (вероятно таутомерных). Дело в том, что при вкалывании раствора сразу после приготовления (да ещё и холодного) "левый" пик наблюдается только в случае с читыым буфером (без а-нитрила). Но когда раствор постоит часок-другой, тогда появляется второй пичок (по времени выхода первый), притом не появляется только в растворе с самой большой концентрацией а-нитрила. То есть грязь искючается, так как пик сперва отсутсвует, а потом в той же пробирке появляется. перегрузка тоже исключена, так как конц пробы 0,2мг/мл, ввод 2мкл, вполне рабочий диапазон откликов детектора. Пики находятся на расстоянии порядка 5 мин. понятно что разделение до нулевой линии, пики правильной формы, очень узкие (на мой взгляд).
Вот...

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

12.02.2005 // 18:40:36

Редактировано 1 раз(а)

Здравствуйте, Корвет!
Посмотрел хроматограммы и описания. Все, что я писал на форуме отношения к Вашему случаю совершенно не имеет. Такие симметричные и хорошо отделенные пики таутамерами быть не могут. Если бы на форуме можно было бы видеть хроматограммы, то проблемы решались бы быстрее.
Почти уверен - Вы наблюдаете распад вещества (гидролиз, фотолиз), степень которого зависит, конечно, от времени, рН, состава растворителя и интенсивности освещения. Предлагаю изучить кинетику в каких-нибудь зафиксированных условиях в течении 20-50 часов (хроматограммы через 2-10 часов - 6-8 точек на кривой в координатах ВРЕМЯ-ПЛОЩАДЬ ПИКА (ПИКОВ).
Это явление для диазепама уже изучалось. Последняя известная мне работа:
C.G.Cabrera, R.G. de Waisbaum, N.S.Nudelman.
Kinetic and mechanistic studies on the hydrolysis and photodegradation of diazepam and alprazolam.
Journal of Physical Organic Chemistry, 2004, V. 18, No. 2 , pp. 156–161.
Реферат есть, но статьи пока нет, хотя можно и достать.

Korvet
Пользователь
Ранг: 1114

12.02.2005 // 19:16:32

Спасибо, Григорий Иосифович, что пытаетесь разобраться в этом случае. Кинетику мы конечно посмотрим, но есть идея получше. А что если отделить эту фракцию непонятную и на МСД, и посмотреть что там... К тому же остаётся неясным вопрос о веществе на 5 минуте, и вообще говоря о том, что УФ-спектр обоих основных веществ не соотвествует базе ВЭЖХ-УФ. Больше вопросов с каждым днём. Ещё вопрос. я правла его уже раньше задавал. Кто-нибудь знает в чём и как растворён ампульный диазепам. Если не ошибаюсь, то согласно справочнику Машковского он нерастворим в воде, а на гидрохлорид р-ция отрицательная. Мож там какой-нить типа ПАВ, который всех за нос и водит.

G.Baram
VIP Member
Ранг: 211

12.02.2005 // 19:36:01

Korvet пишет:
Кто-нибудь знает в чём и как растворён ампульный диазепам. Если не ошибаюсь, то согласно справочнику Машковского он нерастворим в воде, а на гидрохлорид р-ция отрицательная. Мож там какой-нить типа ПАВ, который всех за нос и водит.

1:0 в Вашу пользу. Вот состав ампульного раствора: "Each ml contains 5 mg diazepam compounded with 40% propylene glycol, 10% ethyl alcohol, 5% sodium benzoate and benzoic acid as buffers, and 1.5% benzyl alcohol as preservative".
Информация из справочника Physicians GenRX-1997. Какая из 40 фирм-поставщиков, перечисленных в справочнике, этот компот поставляет, не написано. В Американской фармакопее в монографии "диазепам ампульный" указано:"подходящий растворитель". Судя по всему, каждая фирма вольна совать в раствор что-нибудь и свое. Если есть возможность посмотреть примеси на MSD, то это полезно. В пользу разложения диазепама говорит тот факт, что с течением времени пики "примеси" растут

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

12.02.2005 // 19:54:37

G.Baram пишет:
Такие симметричные и хорошо отделенные пики таутамерами быть не могут.

- Эй вы, херувимы и серафимы! - сказал Остап, вызывая врагов на диспут. -- Бога нет!
- Нет, есть, -- возразил ксендз Алоизий Морошек, заслоняя своим телом Козлевича.
Увы, Григорий Иосифович, у меня конечно нет Вашего авторитета, но литература и некоторый личный опыт позволяют утверждать, что таутомеры могут делиться до чистой базовой линии.
Правда, я не стану более настаивать, что в данном конкретном случае речь идет именно о них, не имея возможности проверить.

Почти уверен - Вы наблюдаете распад вещества (гидролиз, фотолиз), степень которого зависит, конечно, от времени, рН, состава растворителя и интенсивности освещения.

Ну что ж, с такими фокусами встречаться приходилось, и они легко выявляются масс-спектрометрическим детектором. Но так ли уж легко разваливается диазепам? И таутомерный переход тоже далеко не мгновенен. У вдруг все-таки масса окажется та же? Тогда без on-line ЯМР будет трудно что либо доказать!


Ответов в этой теме: 146 Страница: 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты