| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Странности в ВЭЖХ, помогите разобратся >>>
|
 |
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
 18.01.2005 // 23:04:55
По-моему добавка ацетонитрила и метанола смещают рН в щелочную сторону. |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Костя Пользователь Ранг: 576 |
18.01.2005 // 23:15:04
не знаю у кого какие теории, программа ACDLabs LC simulator позволяет оперировать с этими параметрами, расчитывать ионные равновесия и прочее, она как раз этим принципом руководствуется. Насчет иона аммония скажу - из ионобменной колонки может сначала выйти пик аммония, а потом пойти аммиак, если колонку подсоединить к бутылке с 25% раствором и подать давление. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
19.01.2005 // 0:09:40
Редактировано 4 раз(а) Все верно. Но! К сожалению, у одного вещества могут быть и другие формы, кроме ионизированных. В органической химии это случается. В данном случае с диазепамом речь идет как раз об этом, о кето-енольной таутомерии. В кислой среде равновесие смещается к кетону, но повышение pH дает приличное содержание енола. Органические растворители тоже сильно влияют как на равновесие, так и на кинетику. Только вот скорость этих реакций мала по сравнению с временем анализа, вот и получается два пика, да еще с разным УФ спектром. Обычное кислотно-основное равновесие устаканивается куда как быстрее, поэтому и пик у обычных кислот и оснований всегда один. Я сам совсем недавно с подобным же случаем маялся - есть такое лекарство анагрелид, так там тоже таутомерия. Эналаприл тоже такой же. Способ борьбы один - смещать равновесие в одну из сторон с помощью pH. Иногда помогает и нагрев колонки. Ну и в чем закалываешь, тоже немаловажно. Shen K. Yang.....Base-Catalyzed Keto-Enol Tautomerism of.Diazepam. J. Chin. Chem. Soc. 44 (4),1997, p. 401. |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
19.01.2005 // 9:15:22
Редактировано 1 раз(а) Абсолютно согласен с Islander. Плюс еще один нюанс. Дело в том, что "кажущаяся" рН в водно-органических растворах всегда выше, чем в водных растворах единицы на полторы-две. Трудно однозначно указать причину. Может и подавление диссоциации, может и изменение процессов гидратации/сольватации. Но экспериментально было замечено, что буфер с рН 6,8 нормально вел себя с силикагелевым сорбентом, а при добавке 50% ацетонитрила силикагель стал растворяться с такой скоростью, будто рН элюента стал около 9. Соответственно, справедливо было бы ожидать, что и на другие рН-зависимые процессы добавка ацетонитрила будет воздействовать аналогично. Так что есть смысл существенно поварьировать рН исходного буфера и посмотреть, как будет проявляться этот нештатный пик. |
|||||
|
albert Пользователь Ранг: 440 |
19.01.2005 // 10:31:44
Согласен и с Islander, и с Леонидом. Существует целый комплекс явлений, в том числе сложных и неочевидных, приводящих к искажению формы пика, в том числе к его раздвоению (несколько раз наблюдал даже "растроение"). Например, как вам такая вот статья: C.B.Castells, R.C.Castells. Peak distortion in reversed-phase liquid chromatography as a consequence of viscosity difference between sample solvent and mobil phase. J.Chrom.A, 805 (1998) 55-61. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Al_chemist Пользователь Ранг: 70 |
19.01.2005 // 11:09:57
Согласен с Islander-ом и Леонидом, наличие таутомерных форм сильно осложняют количественный анализ методом HPLC, если не использовать элюент, который заведомо смещает равновесие в сторону одной из форм. Сам сталкивался с такой проблемой при анализе 2-меркаптобензотиазола и его производных. Для него существует тиольная - тионовая формы, в зависимости от протонирующей способности среды. Проблема легко разрешилась при анализе на С-18, элюент: МеОН – Н2О (10% - 90%), но вместо чистой воды использовался раствор 1% СН3СООН. В отсутствии уксусной кислоты наблюдались двойные пики, нарушение симметричности пиков, изменение времени удерживания и ширины, в зависимости от концентрации вещества. Так что Islander прав - решение вашей проблемы – правильный подбор рН. |
|||||
|
Valeriy Пользователь Ранг: 431 |
19.01.2005 // 13:39:12
Хотелось бы добавить к постеру Al_chemist. Я сталкивался с близкой ситуацией при анализе фунгицидов триазолового ряда на RP C18, подвижная фаза ацетонитрил-вода, прибор Милихром-1. При этом я подбирал состав ПФ и варьировал содержание ацетонитрила от 10 до 100% с шагом 10%. Отмечу что Милихром-1 не позволяет создать градиент и после изменения состава ПФ приходилось какое то время кондиционировать колонку. Общий вывод на мой взгляд такой: ацетонитрил оказывает существенное влияние на общую полярность ПФ, в неменьшей степени, что и добавка электролита. Более того, он еще и влияет на положение максимума погощения анализируемого в-ва (максимум может "уплыть" либо в короткую либо в длинную область на 2-6 nm). Поэтому будет не лишним после подбора ПФ снять спектр. Кстати, если озадачиться и снять УФ-спектры в ПФ, отличающеся по количественному соотношению растворителей, то вполне можно поймать отличия в спектрах.Насчет гидратированной и негидратированной форм не знаю, но, например, мои два вещества отличались на одну метильную группу в триазоловом ядре, различия в спектрах были. Это не новые максимумы, но заметные перегибы. |
|||||
|
Korvet Пользователь Ранг: 1114 |
19.01.2005 // 17:44:58
Спасибо всем ответившим, много полезного, я ксати про кето-енольные переходы забыл, хотя глядя на формулу сразу можно было догадаться. С рН буфера особо поиграть на могу, с лакмусовой бумажкой не очень наиграешься. Вот с растворителями это да. Сегодня попробовал ампульный раствор разбавить смесью метанола и буфера, тоже один пик, если просто водой, то опять два пика. Кстати может знает кто ампульный сибазон в чём растворён; вроде как само вещество в воде не растворимо, а на хлорид р-ция отрицательная, и у р-ра какой-то запах странный. А ещё можно по подробнее про то, почему вещество в ионизированной форме будет выходить одним пиком с неионизированным. Ведь по сути это два разных вещества, с разной полярностью, стало быть с разным отношениям и коэфициентами распределения между подвижной и неподвижной фазами. Про скорость установления равновесия, это понятно оно здесь быстрое. Но оно как бы уже устанавливается раз и навсегда при вводе пробы и соотношение обоих форм должно быть постноянным, если рН не меняется. |
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
19.01.2005 // 19:06:44
Совершенно верно, это два разных вещества, и на этом основаны многие методы разделения, ибо коэффициенты распределения действительно разные. Грубо говоря, одно равновесие заменяется четырьмя: между заряженной и нейтральной формой в подвижной фазе, между ними же в неподвижной фазе, и для каждой формы между двумя фазами. Грубо, потому что отбрасываются сольватация, ион-парные взаимодействия и прочие осложнения. Так вот, первые два равновесия обычно устанавливаются на порядки быстрее, чем межфазные. Поэтому обе формы движутся по колонке с одной скоростью. А среднее соотношение между ними может меняться и чаще всего иное, нежели в закалываемом растворе. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
19.01.2005 // 19:42:41
Да, господа, это я назвал тогда фокусами... Ведь в чем дело - для разделения двух пиков одной формы скорость их взаимопревращения должна быть очень мала - не менее СЕКУНД !Это в сторону - казнить.. В сторону - помиловать... я сам сталкивался с таким эффектом при анализе этих чертовых диазепинов, но с серой.. подумал, что глюки.. Мы все напоминаем сейчас очевидцев наблюдения НЛО. Просто надо выяснить - какое же характеристическое время может быть у кето-енольной таутомерии, и как на нее влияет состав среды. Кто у нас спец по литобзорам и по кинетике? 
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 146
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
