| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
УФ-прозрачные элюенты для ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: УФ-прозрачные элюенты для ВЭЖХ | |||||
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
 11.12.2003 // 15:07:22
Привет, народ! Кто о чем, а вшивый о бане. Я в очередной раз пытаюсь создать методику на триглицериды. И вот в чем загвоздка: в обычных УФ-прозрачных растворителях (ацетонитрил, метанол) липиды необратимо садятся на колонку, точнее на обращенную фазу  . А те растворители в которых липиды ведут себя должным образом, то есть хорошо растворяются и делятся(ТГФ, ДХМ, ДХЭ) – поглощают аккурат в той области спектра, что и липиды, а именно на 220 нм . А хочется сделать методику именно на спектрофотометре… Ни кто не может по этому поводу ничего посоветовать? Ну, может растворитель какой, или премудрость какая есть? |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Рудаков Пользователь Ранг: 20 |
16.12.2003 // 22:37:24
У ацетона есть минимум в области 210 нм, если его еще слегка разбавить водой, то можно попробовать |
|||||
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
17.12.2003 // 9:03:21
Редактировано 1 раз(а) Большое спасибо за ответ. Но я слышал, что ацетон по каким-то причинам считается не очень хорошим элюентом, более того, он считается вредной примесью плхо очищенного ацетонитрила, и по моему это связано как раз с его оптическими особенностями. Что вы по этому поводу можете посоветовать? |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
23.12.2003 // 9:09:50
Я бы попробовал применить динамическое модифицирование длинноцепочными катионогенными ПАВ. Если взять 80% ацетонитрил и добавить в него 0,001 - 0,01 моля (подбирается экспериментально)цетримида, то я не могу себе представить вещество, которое бы не смылось с обращенки этим элюентом. Оптимальное количество модификатора зависит от марки сорбента, в частности, от плотности пришивки фазы. Если есть возможность сменить колонку, то попробуйте вместо С18 взять нитрил. На обращеннофазных элюентах он ведет себя как короткоцепочная обращенка (С3). Тогда и модификация не потребуется. Водные растворы ацетона использовать не советую - он склонен к конденсации в кислой среде и таутомерии. При детектировании практически всегда дает парочку ложных пиков (артефактов). Метанол, для липидов также хуже, чем ацетонитрил. |
|||||
|
Dionisii Пользователь Ранг: 377 |
23.12.2003 // 10:50:21
Редактировано 2 раз(а) Спасибо за ответ. Сразу же есть несколько вопросов.Насколько дорогостоящий реактив этот цетримид, можно ли приобрести его в России, не вреден ли он для привиитой фазы(Не нарушает ли он сшивку между ОДС и силикагелем?). |
|||||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
23.12.2003 // 11:40:10
Цетримид - цетилтриметиламмоний бромид, недорогой и недефицитный реактив. Можно купить в России в любой фирме по торговле реактивами. Что касается "вредности" для привитой фазы, то это довольно жесткий модификатор, который кардинально меняет свойства сорбента. Вымыть его с колонки практически нереально. Хроматографические свойства сорбента изменятся очень сильно, особенно по отношению к полярным и ионогенным веществам. Поэтому, если у Вас единственная колонка на все случаи жизни, для начала попробуйте более мягкий модификатор, например соли тетрабутиламмония. От них отмыться потом легче, но и то, что Вам это удастся сделать полностью - гарантировать нельзя. То есть колонка то не испортится, в смысле, что на ней можно и дальше довольно долго работать, но строго говоря это будет уже не С18, а нечто другое. Но, как говорится, на елку влезть и задницу не ободрать - получается не всегда.  Заранее извиняюсь перед дамами за солдафонский юмор. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Рудаков Пользователь Ранг: 20 |
06.01.2004 // 21:15:54
Вся хитрость как раз и заключается в том, что в водно-ацетонитрильных смесях есть глубокое окно при 210 нм, а в дальней УФ до 250 нм полный абзац! |
|||||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
06.01.2004 // 22:36:06
Наверное, водно-ацетоновых? |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
08.01.2004 // 5:09:38
А как на спектрофотометре можно сделать методику анализа триглицеридов? Они же имеют разное поглощение в УФ. Количественной эта методика никогда не будет в принципе. Да и рефрактометр не подойдет. Имеет смысл попробовать детектор по светорассеянию, который Кристи рекламирует уже лет 15-ть. Да еще вопрос, а каков глубинный смысл триглицеридного профиля? |
|||||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
08.01.2004 // 15:56:21
Я вообще не вижу смысла анализа триглицеридов в ВЭЖХ. Это практически нереально. Полный профиль все равно не увидишь (нет поглощения-нет чувствительности), и самое неподходящее- это обращенная фаза. Никто меня не убедит в том, что какой бы "золотой" ни была колонка, она не сумеет разделить даже триолеат от тристеарата. А там этих комбинаций много больше. Не говоря уже о проблемах с растворителем. В воде триглицериды не растворяются, а в органической фазе не будет деления. Детектор светорассеяния- это та выделка, которой не стоит овчинка триглицеридов. Почитав посты, складывается впечатление, что у нас в университетах еще очень плохо преподают курс ЖХ. |
|||||
|
RudakovO Пользователь Ранг: 92 |
08.01.2004 // 18:57:35
Именно так! |
| |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
