| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение органических кислот на ВЭЖХ >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение органических кислот на ВЭЖХ | ||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
 16.11.2014 // 18:22:18
Уважаемые коллеги, у кого есть опыт в данной теме, прошу вашего совета. Ситуация такая - требуется определить пропионовую кислоту в хлебе. Я работаю на колонке С18 Синерджи Гидро 4 микрона ОФ-80 ангстрем (Феноменекс). Подвижная фаза - фосфатный буфер 20 миллимоль, рН 2.9 (95%)+ ацетонитрил (5%). Детектор УФ 220 нм. Страндартные р-ры готовила на воде из чистого пропионата кальция (50-1000 мг/л в пересчете на пропионовую к-ту). Получила замечательные симметричные пики со временем удерживания около 10 мин. и очень красивую линейную калибровочную (0.9999). Подготовка проб - экстракция в воде полчаса при 60 град., осаждение белков с добавлением ацетата цинка и феррицианата калия, доведение до метки, фильтрование через складчатый бум. фильтр и затем через шприц с фильтром 0.45 микрон. Закалываю 20 микролитров. Проблема в том, что пики пропионовой кислоты в пробах выходят с раздвоенной вершиной, в отличие от пиков стандартов. Насколько мне известно, в хлеб добавлен тот же пропионат кальция. По количеству я близка к тому, что добавлено, если считать пиком то, что я получаю. Буду благодарна всем, кто ответит. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
kump Пользователь Ранг: 3273 |
16.11.2014 // 19:33:21
У Вас выходит анион пропионовой кислоты и сама кислота из-за недостаточно кислой среды. Такое часто бывает при определении слабых кислот. Здесь неоднократно это обсуждалось в различных вариантах. Подкислите экстракт после осаждения белков и фильтрования фосфорной кислотой до рН~2, равновесие сдвинется в сторону обр. пропионовой кислоты и раздвоенность исчезнет. Но в этом случае Вы определяете кислоту в молекулярном виде, а калибровка у Вас по аниону. Лучше перекалибровать, подкислив также образцовые растворы. Но там могут быть осложнения - фосфат кальция. |
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
18.11.2014 // 10:46:25
Редактировано 1 раз(а) Большое Вам спасибо, у меня тоже была такая идея понизить рн, попробую. Хотя в этом случае я буду работать на нижнем пределе рн этой колонны. Или оставить рн подвижной фазы 2.9 и понизить только рн ст. растворов и образцов... Фирма Феноменекс советует чистить пробы на их колонках твердофаз. экстракции СТРАТА... Они считают, что это поможет избежать раздвоения пиков. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2136 |
18.11.2014 // 15:54:05
Сэмпл и стандарты нужно растворять в элюенте и не будет никаких проблем. Ну, или доводить рН до нужного значения (pH элюента). Выходит аналит в молекулярногй форме (соотв. и калибровка). Дискриминация хроматографической полосы происходит в самом начале хроматографического процесса, тогда как раз одна часть еще в ионной форме, а другая уже в молекулярной. |
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
18.11.2014 // 16:34:39
Большое спасибо за ответы, уже поняла, что собака зарыта в рн, пробую с буфером рн=2, выходит лучше. |
||
|
абр Пользователь Ранг: 913 |
18.11.2014 // 17:50:25
Неужели скорость установления равновесия так мала? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
kump Пользователь Ранг: 3273 |
18.11.2014 // 19:51:15
А при чём тут скорость установления равновесия? Оно установилось ещё в процессе побоподготовки и вкалывается раствор, уже содержащий какие-то равновесные концентрации аниона и молеклярной формы, что и видно на хроматограмме. Старттопику; Попробуйте сделать рН фосфатного буфера 2,4 Пропионовую не определял, а вот сорбинка с бензойкой получаются хорошо. Можно конечно поколдовать с константами, но, честно говоря, лень  лучше и быстрее - практически 
|
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
19.11.2014 // 9:58:10
Вы советовали раньше рн 2, так что лучше 2 или 2.4? |
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
19.11.2014 // 9:58:12
Редактировано 2 раз(а) Из моего опыта - сорбиновая и бензойная выходят отлично и при рн=4, пробоподготовка вода/метанол, это у меня уже рутина, а вот с пропионовой пока не получается... Пользователь удалил свое сообщение |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3273 |
19.11.2014 // 11:12:36
Редактировано 1 раз(а) Попробуйте 2,4, если получится - хорошо. Если нет - снижайте дальше, сколько позволяет колонка. Можете сделать рН элюента 2,4 а пробу подкислить сильнее. Объём вводимой пробы не скажется на колонке. Готовых рецептов нет. Пробуйте. |
||
|
chemistan Пользователь Ранг: 25 |
19.11.2014 // 11:27:50
Да, так я и делаю. Спасибо |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 21
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
