| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Изменение времени удерживания на разных ВЭЖХ колонках одной марки >>>
|
 |
|
Волгин VIP Member Ранг: 1335 |
 25.11.2011 // 15:13:27
На 22 минуте - это вряд ли мертвый объем. "Огласите пжлста весь список!" (С)  А именно: геометрические размеры колонки и объемную подачу подвижной фазы. А также: не гуляет ли у Вас давление в процессе разделения?
|
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
25.11.2011 // 15:34:38
Редактировано 1 раз(а) Ох, уже и спрашивать совестно... Ну вот: Колонка 9.4 мм внут. диам. на 250 мм. При скорости 0.6 мл/мин глицин выходит на 22 минуте. Давление, если верить Chemstation, стабильное. К колонке прилагается Column Pefomance Report. В нем хроматограмма азида натрия Скорость 2 мл/мин Азид выходит на 7 минуте. |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1335 |
25.11.2011 // 16:53:23
Редактировано 2 раз(а) Итак, предполагаем. что азид выходит в ПОЛНОМ объеме. Полный объем - это объем, занимаемый растворителем в колонке, или объем, в последней части которого выходит из колонки вещество, которое свободно проникает в поры (азид). Не путать с МЕРТВЫМ или нулевым объемом, которым является межчастичный объем, или объем, после выхода которого из колонки появляется вершина пика вещества, которое из за своего размера абсолютно не может войти в поры сорбента (который, как я ранее писал, в данных условиях сорбентом не является, ибо сорбции происходить не должно). 2 мл/мин х 7 мин = 14 мл Теперь глицин. 0,6 мл/мин х 22 мин = 13,2 мл. Похоже?  ЗЫ Знатоки, не клеймите за нестрогость формулировок. Старался объяснить доходчивее. |
||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
25.11.2011 // 17:55:56
Редактировано 1 раз(а) Да!!! ))))))Дошло до меня, кажется.)))))) У предыдущей колонки время выхода азида было немного больше, соответственно и глицин у меня выходил в другое время - немного позже. Из-за чего я пребывала в ложной уверенности, что все в порядке. Так? И, очевидно, Константин тоже прав - колонка подобрана неправильно.((((( |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1335 |
25.11.2011 // 18:06:56
Ну конечно так!.. если Вы занимаетесь хроматографированием глицина и азида. В противоположном случае читайте все, написанное выше. 
|
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
25.11.2011 // 18:08:38
Стоп, стоп. Это отдельный вопрос. Давайте сюда картинку. Дальнейшее обсуждение проблемы - только с ней. Из фигни, которая видна сейчас - у Вас слишком низкая скорость - это элементарно неудобно. Колонка же силикагельная. Посмотрите на приложенную хроматограмму. Если азид там на 7 минутах, это значит, что скорость в три раза выше, то есть, скорее всего, 2 мл/мин. Ну и поставьте 2 мл/мин! Дальше, в руководстве разрешается ее греть до 40С. Ну и поставьте 40С! все-таки, без болтологии - хотя бы точно перечислите ряд цифр - времен выхода - гилцина (22 мин), мономера, димера, и т.д. Ну почему надо все тащить клещами! Требовалось же назвать всего лишь основные условия разделения и параметры хроматограммы. Уже четвертый день кусками их узнаем! |
||
|
optima Пользователь Ранг: 322 |
25.11.2011 // 19:21:04
Редактировано 1 раз(а) Уважаемые КонстантинС, Волгин и virtu. Огромное спасибо за ликбез. И терпение.  Картинку скинуть сложно. Это немного проблемно чисто технически (на хроматографе старый комп без инета, без свободного USB порта, с дисководом. Дискет нету))))) Времена выхода белка и димеров даже не знаю какие перечислять, так как за эти дни перепробовала разные молярности, скорости и соотношения буфера:растворителя. Главное - колонка нормальная, с остальным буду разбираться. Еще раз - спасибо. |
||
|
Kalambet Пользователь Ранг: 484 |
25.11.2011 // 19:26:43
Низкая скорость в ГПХ - не фигня, а средство достижения диффузионного равновесия. Молекулки уж больно большие. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2136 |
26.11.2011 // 0:37:23
1. Словосочетание "мертвый объем" явл., по сути, жаргонизмом, соотв. вне контекста не имеет значения. Соотв. "плавающих" значений этого словосочетания много, но в данном контексте это объем удерживания/пребывания несорбируемого компонента. 2. "Полный", "нулевой", и "действительно мертвый" объем - это тоже от лукавого . 3. Из пунктов 1, 2, и, особенно, 4 следует, что запутываете, как раз Вы...
|
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2136 |
26.11.2011 // 1:04:10
Редактировано 4 раз(а)
1. Достаточно времени выхода пика и ширины пика. 2. Вообще, если мне не изменяет память, то в фармстатье должен быть прописан сорбент с 300А, а у Вас 150А (по утв. Волгина), поэтому, может быть, КонстантинС и прав насчет неверно подобранного сорбента (колонки). 3. Проверьте все как следует. Переготовьте элюенты, не поленитесь проверить рН и т.д. Как следует все уравновесьте и т.д., хроматография не терпит спешки. Не паникуйте, все будет ОК. 4. Попробуйте уменьшить объем вводимой пробы и концентрации аналита и глицина, уберите (совсем) глицин и посмотрите, есть ли системный пик после пика белка (то же можно проделать и на 280нм). Попробуйте (если нельзя убрать совсем) заменить глицин на что-либо другое, например ацетон (3%v ИПС в элюенте оставьте). Не забудьте о температуре колонки и ионной силе элюента. 5. Да, и насчет 2мл/мин - КонстантинС погорячился. З.Ы.: "В буфере 0.025 белок делится одинаково и в старой (пока жива была) и новой". |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 33
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
