| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Проблема recovery при Обращенно фазовой ВЭЖХ >>>
|
 |
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
 22.03.2005 // 17:30:52
Пробовали на всех, кроме diol - в принципе, обращеннка лучше всего. Что самое интересное, при работе с жидкость-жидкостным хроматографом рекавери больше 96% - тут действительно проблемы с обработкой фракций и пиков. А вот обращенка, работающая принципиально по такому же механизму (в идеале конечно, без силанольных групп)- дает многократно худший "урожай". Поэтому и возникла мысль, что может быть это остаточные силанолы творят свое черное дело? Диссоциацию мы давим кислотами и буферами. Дело в том, что и в сливах вещества практически нет ( в смысле инидивидуального). С выделением после хроматографии проблем нет. Т.е. что-то происходит именно на колонке.Сначала грешили на фриты, но поменяв их на PEEK проблему не решили, поменяли железные трубки на PEEK тоже улучшений никаких. Теперь вот думаем перейти с силикагелевой матрицы на полимерную, вот почему я спросил про Shodex - может у нас в стране ребята делали обращеннофазовые сорбенты на основе полимеров - и есть какие нибудь мысли и результаты?  |
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
22.03.2005 // 18:03:00
Редактировано 1 раз(а) При препаративных нагрузках, ясное дело, ни фриты, ни трубки 80% вещества никак удержать намертво не смогут. Да и насчет колонки у меня большие сомнения. Полимерную фазу попробовать, конечно, можно. Сам я работал с Hamilton PRP-1, эффективность и форма пиков значительно хуже, чем на привитой C18, но для препаративных целей это обычно не главное. Пробовал также полимерную фазу RPsep ACT-1 C18 (Transgenomic), эта будет получше. С Shodex не работал. Но у меня нет уверенности, что дело в колонке, а не в выделении после, особенно если у Вас буфера. |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
22.03.2005 // 18:34:01
В некоторых случаях, при прохождении через металлические фриты у нас проходила изомеризация, причем вполне препаративная. Все-таки поверхность там большая. Выделение после что на жидкость-жидкостном, что на ВЭЖХ - одинаково делается. Однако в первом случае рекавери - стабильно больше 95%, а во втором - совсем неудовлетворительный. Интересно, что если жидкость-жидкостный работает в режиме необращенной фазы, то рековери хоть и выше, но не драматически отличается от силикагеля. А вот в режиме обращенной фазы разница многократная. 
|
|||||
|
knoxchem Пользователь Ранг: 515 |
22.03.2005 // 18:56:31
а что такое ЖЖ-хроматограф. Это колоночная хроматография низкого давления? Или вы действительно на нанесённой жидкой фазе делите? По поводу остаточной силанольной активности. Попробуйте подобрать колонку с более плотным покрытием. Может быть Зорбакс. Можно попробовать эндкапированную, но это "эндеапирование" отваливается как правило в слабокислых, да и в слабощелочных элюентах. |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
22.03.2005 // 19:58:46
ЖЖ - это когда две несмешивающиеся жидкости идут в противотоке. Например, стационарная фаза - гексан, а мобильная 80% ацетонитрил, 20% воды, 0.3% уксусной кислоты. Насос прокачивает мобильную фазу через неподвижную - гексан. Получаем реально обращеннофазовую колонку дикой емкости - на 200 мл гексана в обращеннофазовом режиме разделяем до 5 ГРАММ веществ с 98% чистотой. Вот именно поэтому я и решил попробовать не силикагельную матрицу. На это сподвиг тот факт, что форма пиков у Shodex и ЖЖ хроматографа - очень похожи и не похожи на форму пиков у Luna, Zorbax, Kromasil, Hypersil и т.п. Т.е. у Shodex и ЖЖ - как бы хвосты пиков повернуты задом наперед - медленный подъем, и резкий спуск, а вот у других фаз я этого не замечал. |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
23.03.2005 // 19:07:51
У Вас, небось, просто элюент плохо закислен. А полимерную фазу-то купить можно, обычную у Аквилона (Гамильтон подороже, Феноменекс - дешевле), сверхсшитую - у меня (Пуролайт). Жаль хороших не осталось, есть 15 см с эффективностью тыщщи три - как у обычных 25 см, наверное. Но емкость у сверхсшитой большая, это точно. Раза в три выше, чем у силикагеля, или обычной сшитой. |
|||||
|
КонстантинС VIP Member Ранг: 2306 |
23.03.2005 // 19:10:33
Я удивляюсь как Вы работаете с такими вещ-вами на силикагеле - это же невозможно!  Помню, я миндалевую (один гидроксил) еле-еле чуток хитрым способом растворил в элюенте - а элюент был не больше не меньше гексан-изопропанол-вода-укс. к-та-триэтиламин 70-30-2-3-0.2! А у Вас - и два, и три!)) |
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
23.03.2005 // 19:52:04
Достаточно. Форма пиков вполне хороша, а для препаратива делаем соответствующий перерасчет. А что это за фазы? У Феноменекса Polymer-X, я их колонку купил, собираюсь сравнить с Shodex. А что у вас за фаза? У Shodex эффективность больше 17 тысяч, у PolymerX около 10 тысяч, у ЖЖ хроматографа около 3000, так что в этом районе у него конкурентов в препаративе просто нет.
|
|||||
|
Дима Пользователь Ранг: 192 |
23.03.2005 // 19:57:02
А это вообще общая глобальная проблема! Удивительно, что даже на этом форуме проблема рекавери с ВЭЖХ колонки, насколько я понял мало кому известна. А эта тема Ого-го! какой важности особенно в свете применяемости этого метода для производства лекарств и тому подобного.
|
|||||
|
Islander VIP Member Ранг: 1065 |
23.03.2005 // 21:02:36
Ничего удивительного, форум аналитический, препаративной хроматографией мало кто занимается. Я сам последний раз этим делом баловался пять лет назад, кстати, тоже оксикислоты, причем изомеры (правастатин и его изомер). Использовал CN в НФ, обращенку даже не стал пробовать. Проблем с выходом не было. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 22
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
