Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Количественный анализ липидов >>>

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Количественный анализ липидов
LVD
Пользователь
Ранг: 219

14.10.2009 // 6:36:23     
Уважаемые коллеги!
Перед нами поставлена задача количественного анализа липидов из растительного материала (листья) Причем речь идет и о фосфо-, глико-, и т.д. липидах, а также о три-,ди- и моноглицеридах.
1. Экстракция, разделение и очистка: - экстрагировать умеем, делить собираемся на патронах (пожелание заказчика, хотя мы предпочли бы колонки с силикагелем), тоже кое-какой опыт есть.
2. Количественный анализ. Понятно, что при наличии LC-MS и стандартов было бы проще. Стандарты купить собираемся.
фосфолипиды - по фосфору, гликолипиды по галактозе, по соответствующим методикам. А вот с три- ди- и так далее меня гложут сомнения. Заказчик мечтает, что после хорошей очистки ТАГ и других глицеридов можно спектрофотометрически померить количество, даже длину волны притащил - 205 нм. А я думаю, что ничего там специфически не поглощает и нужно красить и гидролизовать, т.е. наоборот? И сигма торгует киты куда входит липаза, реагент для окарашивания и собственно стандарт.
Может кто-нибудь занимался подобными задачами, будем благодарны очень за совет.
П.С. Что в целом задача очень объемная понимаем...
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
sinthetic
Пользователь
Ранг: 3568


14.10.2009 // 6:39:21     
При 205 нм не поглощает только ну очень ленивое соединение.
LVD
Пользователь
Ранг: 219


14.10.2009 // 7:06:23     
+100
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


14.10.2009 // 11:54:30     
Редактировано 2 раз(а)

ELSD ... Вы делить собираетесь методом ВЭЖХ?
УФ можно, только пробоподготовка усложняется, особенно если при 205нм. Я про ВЭЖХ-УФ
Но если Вы собираетесь сумму мерить просто СФ после очистки, то, на мой взгляд, замучаетесь чистить, вероятность "кривого" результата возрастает относительно ВЭЖХ-УФ, получиться, скорее всего... Вот с липазой и окрашиванием другое дело, остановитесь на нем, не тратьте время на СФ.

Можно проще (на мой взгляд) - ВЭТСХ + "красить" (если денситометр есть, хотя можно фото или сканер приладить)
Публикаций тьма - у меня даже где-то монография валялась, более менее свежая, если надо...
Вообще, почему бы Вам не взять ТСХ за основу и материала куча наработана, тут Вам и полу- или количественный анализ. Правда, если заказчик рогом на патронах уперся - увы...
На патронах фракционировать... Времязатратнее будет.
LVD
Пользователь
Ранг: 219


14.10.2009 // 13:06:20     
Спасибо за ответ. Монографию хорошо бы, если есть в электронном виде и подъемного объема, то мой мэйл laser{coбaчkа}sifibr.irk.ru.
Заранее благодарны.
Lipids
Пользователь
Ранг: 459


14.10.2009 // 18:23:26     

LVD пишет:
Уважаемые коллеги!
Перед нами поставлена задача количественного анализа липидов из растительного материала (листья) Причем речь идет и о фосфо-, глико-, и т.д. липидах, а также о три-,ди- и моноглицеридах.
1. Экстракция, разделение и очистка: - экстрагировать умеем, делить собираемся на патронах (пожелание заказчика, хотя мы предпочли бы колонки с силикагелем), тоже кое-какой опыт есть.
2. Количественный анализ. Понятно, что при наличии LC-MS и стандартов было бы проще. Стандарты купить собираемся.
фосфолипиды - по фосфору, гликолипиды по галактозе, по соответствующим методикам. А вот с три- ди- и так далее меня гложут сомнения. Заказчик мечтает, что после хорошей очистки ТАГ и других глицеридов можно спектрофотометрически померить количество, даже длину волны притащил - 205 нм. А я думаю, что ничего там специфически не поглощает и нужно красить и гидролизовать, т.е. наоборот? И сигма торгует киты куда входит липаза, реагент для окарашивания и собственно стандарт.
Может кто-нибудь занимался подобными задачами, будем благодарны очень за совет.
П.С. Что в целом задача очень объемная понимаем...

Вообще говоря, у вас достаточно простая задача комплексного анализа липидов в растении. С точки зрения липидного анализа - ваш объект - простейший. Однако, подход все таки лучше избрать классический, по моему. Основными методами лучше избрать ТСХ для качественного анализа и ВЭЖХ-ELSD и спектрометрию для количественного (фосфор в фосфолипидах). Возможно, патроны не лучший вариант в количественном анализе, однако, если бы вы сказали подробнее про объект - было бы проще вам что-то посоветовать. В листьях будет много полярных и совсем неполярных (воска и т.п. неомыляемое) липидов.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
CCS Services CCS Services
Партнер фирмы Varian Analytical Instruments в России, поставляет и обеспечивает полный цикл поддержки аналитического оборудования фирмы. Поставка комплексных решений для лабораторий элементного анализа на базе Атомно-абсорбционных спектрометров (либо ИСП) и систем микроволновой пробоподготовки. Эксклюзивный партнер ведущего европейского производителя систем микроволновой химии - Milestone.
LVD
Пользователь
Ранг: 219


15.10.2009 // 11:23:17     
Спасибо за ответ.
Детектора по светорассеянию у нас к сожалению нет. ВЭЖХ у нас Шимадзу с УФ-детектором. Спектрофотометр, конечно, есть.
Объект - листья яблони сибирской, 2х разных экологических форм, собраны в процессе вегетации.
virtu
VIP Member
Ранг: 2133


15.10.2009 // 15:09:35     

LVD пишет:
Спасибо за ответ. Монографию хорошо бы, если есть в электронном виде и подъемного объема, то мой мэйл laser{coбaчkа}sifibr.irk.ru.
Заранее благодарны.

Пишет, что такого адреса не существует.
Напишите мне на utriv(собака)mail.ru
gingerino
Пользователь
Ранг: 207


15.10.2009 // 16:24:51     

LVD пишет:

Классически количественно измерить содержание всех перечисленных классов липидов можно методом ГЖХ по содержанию жирных кислот. Для этого после разделения липидов на отдельные классы (любым способом - ТСХ, жидкостной колоночной хроматографией, ТФЭ) их нужно гидролизовать ну и прометилировать, конечно. К тому же и информативность для вашего случая будет выше, потому что при разных экологических условиях молекулярные формы, например, фосфолипидов должны быть разными.
LVD
Пользователь
Ранг: 219


16.10.2009 // 6:28:08     
Спасибо за совет. Для нас это было бы наилучшим вариантом, поскольку ЖК-анализ мы делаем некий опыт есть. Попробую поговорить с заказчиком.
Lipids
Пользователь
Ранг: 459


16.10.2009 // 6:54:00     

gingerino пишет:

LVD пишет:

Классически количественно измерить содержание всех перечисленных классов липидов можно методом ГЖХ по содержанию жирных кислот.

В данном конкретном случае - нельзя измерить таким образом все липиды. В липидах листьев значительно содержание восков и т.п. неомыляемых липидов, где через жирные кислоты соотношение не померить. Я посмотрю - какую-нибудь простенькую методику определения общих липидов высших растений, может таже в листьях что-нибудь найдется. В принципе, такие работы интенсивно делались годах в 50-х - 60-х, думаю что и инструментарий будет доступным и результаты получатся ближе к классическим.

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты