Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Методика определения аскорбиновой кислоты для ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Методика определения аскорбиновой кислоты для ВЭЖХ
Jktym
Пользователь
Ранг: 15

13.08.2009 // 10:39:28     
Нужна методика для анализа !!!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


13.08.2009 // 14:31:56     
Ну и ищи в интернете, в чем проблема-то? Бстрее найдешь. Тут пока появится, кто с этим знаком, море времени пройдет.
N-Виталий
Пользователь
Ранг: 630


14.08.2009 // 11:46:12     
аскорбинка очень хорошо делается, можно на перхлорате (кстати фармакопейная методика) при скорости 0,15 выходит на 3-4 минуте (миллихром А-02) на waters подольше (зависит от колонки), а в чем определять будете?
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


14.08.2009 // 15:51:57     
Я для "таблеток", например, использовал такую хром. систему:
Колонка: Диасфер-110-С16 150*4,6
Элюент: МеСN:0.05М Na2SO4 + H3PO4 (pH=2.5) 3:97 %об. (изократ.)
УФ: 260нм (при 220нм "видно" дегидроаскорбиновую кислоту)

С элюентом я тогда извратился, можно было взять просто 0.1-0.05М КН2PO4 pH=2.5-3

З.Ы.:
Вы хотя бы указали объект и т.д. Если будете экстрагировать откуда либо, то возьмите водный раствор щавелевой кислоты (0,1-0,02М)
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


14.08.2009 // 15:57:45     
Лучше вместо щавелевой кислоты добавить ЭДТА , аскорбиновая кислота легко окисляется кислородом воздуха, а ионы металлов типа железа или меди здорово катализируют данный процесс
Jktym
Пользователь
Ранг: 15


14.08.2009 // 18:14:29     
Объект исследования листья плодово-ягодных растений, пытаемся в качестве буфера использовать ТБАБ рН-6 колонка С-18 (сепарон) (коэффициент извлечения ТБАБ-ом???) поделитесь соображениями поэтому поводу
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Лаборатория стереохимии сорбционных процессов (ЛССП) ИНЭОС РАН Лаборатория стереохимии сорбционных процессов (ЛССП) ИНЭОС РАН
Анализы различных классов соединений (органический синтез, биотехнология, загрязнения почвы, воды, анализ энантиомерного состава) методами ВЭЖХ и ГХ.
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


14.08.2009 // 19:02:25     

Jktym пишет:
Объект исследования листья плодово-ягодных растений, пытаемся в качестве буфера использовать ТБАБ рН-6 колонка С-18 (сепарон) (коэффициент извлечения ТБАБ-ом???) поделитесь соображениями поэтому поводу

Имхо пулей вылетать должна, даже несмотря на модификацию колонки ТБАБ-ом . Начните с прокола чистой аскорбиновой кислоты.
Некоторые проблемы могут быть при извлечении , я бы использовал концентрирующий патрон с анионобменными свойствами.
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


14.08.2009 // 20:13:39     
DSP007 прав - ЭДТА не помешает.
ИМХО: Зря Вы сразу связались с ИПХ (ТБАБ), если опыта работы в этом режиме мало или нет, то можете долго провозиться, а если ТБАБ недостаточной чистоты... тем более.
Только вот удержать (более менее) и получить более менее симметричный пик АК в варианте ОФ ВЭЖХ можно не на любом сорбенте Sil C18 (пробуйте). Хорошо, если сорбент (С18) будет +AQ (с полярным эндкеппингом и т.д. ... ). Если есть под рукой Sil C30 - смело берите его.
Насчет экстракции - посмотрите литературу. Я бы навскидку сделал так: навеска X mg + 3*n ml 0.05M oxalic acid + 0.001M EDTA => US bath (5min.). Затем нужно смотреть - центрифугирование или концентрирование и очистка на ионообменнике (ТФЭ)
Jktym
Пользователь
Ранг: 15


17.08.2009 // 20:13:44     
Редактировано 2 раз(а)

Стандарт АК на С18 с использованием ТБАБ выходит на 3 минуте, в экстрактах листьев и плодов (тем же ТБАБ с ЭДТА и метафосфорной) после центрифугирования АК на том же месте, примеси практически не мешают. Но кажется не очень хорошо сорбенту, через 50-70 анализов не смогли избавиться от высокого давления, пробовали мыть ацетонитрил:вода, вода, ацетонитрил. Можно ли реанимировать колонку. Какие мнения будут о использовании цетил-триэтил-аммониия бромида. Так ли сложно работать с ИПХ? Поделитесь.
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


18.08.2009 // 10:26:11     
Редактировано 1 раз(а)


Jktym пишет:
Стандарт АК на С18 с использованием ТБАБ выходит на 3 минуте, в экстрактах листьев и плодов (тем же ТБАБ с ЭДТА и метафосфорной) после центрифугирования АК на том же месте, примеси практически не мешают. Но кажется не очень хорошо сорбенту, через 50-70 анализов не смогли избавиться от высокого давления, пробовали мыть ацетонитрил:вода, вода, ацетонитрил. Можно ли реанимировать колонку. Какие мнения будут о использовании цетил-триэтил-аммониия бромида. Так ли сложно работать с ИПХ? Поделитесь.
ТБАБ желательно перекристаллизовать из этилацетата. И предпочтительнее не бромид а гидросульфат или гидрофосфат . ЦТАБ увеличит время выхода целевого вещества, но концентрация его должна быть много меньше (на порядок) чем у ТБАБ. Ну и естественно, чем длиннее алифатическая цепь у ион-парного реагента, тем сложнее , а иногда просто невозможно вернуть колоночный сорбент в первоначальное состояние. Проблема с давлением может быть связана с плохонькой фильтрацией экстрактов из растительных объектов. Поэтому прежде чем делать грандиозные выводы о "смерти" сорбента я бы разобрал !!! аккуратно!!!! верхушку колонки и почистил бы входной фильтр в УЗ баньке, а заодно проверил бы подводы к колонке. Если стоит предколонка, то скорее забилась именно она или ее фильтр. Если же начал сорбент разрушаться, - и это стало причиной высокого давления, то восстановить колонку шансов нет.
А насчет других методологий ВЭЖХ аскорбинки, то вот-с есть у меня Н-ное количество:

Вещество : D-изоаскорбиновая кислота
Колонка : Radial Pak C18
Подвижная фаза : 0,04M ацетатный буфер с 0,001M гексилсульфонат натрия - метанол (85 : 15)
Литература : JCHR,1982,245,3,355

Вещество : Аскорбиновая кислота
Колонка : Supelcosil LC-8-DB
Подвижная фаза : Метанол - 4,3 mM гексилсульфонат натрия c 0,1%триэтиламин pH2,8 H3PO4 = 15-85

Вещество : Аскорбиновая кислота
Колонка : Supelcosil LC-18-DB
Подвижная фаза : 1% уксусная кислота с 1 mM тетрабутиламмония гидрофосфат pH 2,8 градиент 0мин-13% Ацетонитрил; 1,25мин - 20% Ацетонитрил; 5,0-5,5 мин-35% Ацетонитрил

Вещество : Аскорбиновая кислота
Колонка : LiChrosorb NH2
Подвижная фаза : 0,005M KH2PO4 pH 4,5 - Ацетонитрил = 25 - 75
Литература : JCHR,1980,196,1,163

Вещество : Аскорбиновая кислота (Витамин С)
Колонка : Nucleosil C18
Подвижная фаза : 0.05M KH2PO4 pH = 2.8

Вещество : Аскорбиновая кислота
Колонка : ProntoSil 120-3-C18 AQ
Подвижная фаза : A : 50mM H3PO4 : B : Ацетонитрил, градиент 0-30% B в 13мин
Литература : Bischoff Chromatography

Ну а детектирование от 230 до 262 нм, в разных методологиях.

В фармацевтике в основном использовал ИПХ, как самый приемлемый вид ВЭЖХ для наших объектов и особых проблем не имел. Не понимаю, почему, ею в основном пугают.
Serga
Пользователь
Ранг: 1806


18.08.2009 // 11:09:23     
Garry
ИМХО, испортит он колонку окончательно разборкой. Да и фиг с ней. Они так и так ее угробили уже "метафосфорной кислотой" (интересно, где взял? ). Да и пробу непонятно- фильтровали, али нет?

  Ответов в этой теме: 26
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты