Форумы ANCHEM.RU: базовая линия на жидкостнике ползет вверх

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

базовая линия на жидкостнике ползет вверх >>>

  Ответов в этой теме: 13
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: базовая линия на жидкостнике ползет вверх

pdon83
Пользователь
Ранг: 13

19.03.2009 // 8:14:42

Коллеги, посоветуйте пожалуйста...
Не могу добиться ровной базовой линии на ВЭЖХ Perkin Elmer series 200 при анализе пива на компонентный состав горечи. Элюирование градиентное. Все растворители - только gradient HPLC grade. Базовая при анализе постоянно ползет вверх, из-за этого получаются некорректные результаты при низких концентрациях.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Люся
Пользователь
Ранг: 5

19.03.2009 // 14:19:53

Дрейф нулевой линии связан чаше всего с нестабильностью оптической плотности того, что у вас выходит с колонки. Если нулевая ползет вверх, значит оптическое поглощение у вас всё время увеличивается. Если вы кололи большое количество проб до этого, то у вас с колонки выходят остатки от ваших проб. Отмойте хорошо колонку и всё будет хорошо.

Slawa
Пользователь
Ранг: 323

19.03.2009 // 15:01:00

А какой у Вас градиент?

Если разница в составе подвиной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет расти.

pdon83
Пользователь
Ранг: 13

20.03.2009 // 7:17:14

Люся пишет:
Дрейф нулевой линии связан чаше всего с нестабильностью оптической плотности того, что у вас выходит с колонки. Если нулевая ползет вверх, значит оптическое поглощение у вас всё время увеличивается. Если вы кололи большое количество проб до этого, то у вас с колонки выходят остатки от ваших проб. Отмойте хорошо колонку и всё будет хорошо.

Спасибо! А чем лучше отмывать? Сейчас в качетсве растворителей я использую А: цитраиный буфер (рН=7) + ацетонитрил; В: чистый метанол; С: чистый ацетонитрил и D: вода.

pdon83
Пользователь
Ранг: 13

20.03.2009 // 7:30:31

Slawa пишет:
А какой у Вас градиент?

Если разница в составе подвиной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет расти.

Хроматографирование идет 40 минут. Начальные условия: 80% смеси цитратного буфера (рН=7) и ацетонитрила; 10% метанола и 10% ацетонитрила. Затем до 30-й минуты идет возрастание доли метанола до 70% (как растворителя с самой большой элюирующей силой), при этом два остальных растворителя распределяются по 15%. И далее в течении 10 минут возврат к начальным условиям. Рост базовой наблюдается как раз в первые 30 минут. Я подозревал, что все дело в поглощении метанола (используется УФ детектор). Поменял метанол, теперь использую специальный для градиентной ВЭЖХ, но результата нет. Пробовал менять предколонку и колонку (Waters Symmetry C18), но и это не помогло.

OldBrave
VIP Member
Ранг: 1314

20.03.2009 // 10:02:48

Как уже указал Slawа, если разница в составе подвижной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет изменяться. Изменение базовой можно сильно уменьшить (а также уменьшить уровень шумов и кол-во ложных пиков), если совсем отказаться от MeOH, заменив его ацетонитрилом и подняв при этом температуру колонки, например до 50С.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Лаборатории Весслинг, ООО
ООО "Лаборатории Весслинг» – официальное представительство немецкого холдинга WESSLING в России, осуществляет контроль качества и безопасности пищевой продукции, продовольственного сырья, БАД, ароматизаторов, кормов, кормовых добавок и объектов окружающей среды таких как вода различных источников (централизованного и нецентрализованного водоснабжения, бутилированная, открытых водоемов, сточная), почва и грунты.

Люся
Пользователь
Ранг: 5

20.03.2009 // 11:05:04

pdon83 пишет:

Люся пишет:
Дрейф нулевой линии связан чаше всего с нестабильностью оптической плотности того, что у вас выходит с колонки. Если нулевая ползет вверх, значит оптическое поглощение у вас всё время увеличивается. Если вы кололи большое количество проб до этого, то у вас с колонки выходят остатки от ваших проб. Отмойте хорошо колонку и всё будет хорошо.
Спасибо! А чем лучше отмывать? Сейчас в качетсве растворителей я использую А: цитраиный буфер (рН=7) + ацетонитрил; В: чистый метанол; С: чистый ацетонитрил и D: вода.

Отмывают обычно остатки растворимые в воде водой, а остатки растворимые в органике органикой. Поставте в начале промывку водную, а затем смесью метанола и ацетонитрила. Мойте до стабильности нулевой. Цитратный буфер я лично не люблю, он сам может довать дрейф.

pdon83
Пользователь
Ранг: 13

21.03.2009 // 7:28:16

Спасибо, обязательно попробую.
А в конце каждой серии анализов (перед выключением прибора на ночь) промывать колонку нужно примерно по такой же программе?

pdon83
Пользователь
Ранг: 13

21.03.2009 // 7:30:30

OldBrave пишет:
Как уже указал Slawа, если разница в составе подвижной фазы вначале и в конце градиента значительна - то базовая будет изменяться. Изменение базовой можно сильно уменьшить (а также уменьшить уровень шумов и кол-во ложных пиков), если совсем отказаться от MeOH, заменив его ацетонитрилом и подняв при этом температуру колонки, например до 50С.

Увы, без метанола анализ очень сильно растягивается по времени, а термостата пока не приобрел.

Люся
Пользователь
Ранг: 5

23.03.2009 // 14:20:43

pdon83 пишет:
Отмывают обычно остатки растворимые в воде водой, а остатки растворимые в органике органикой. Поставте в начале промывку водную, а затем смесью метанола и ацетонитрила. Мойте до стабильности нулевой. Цитратный буфер я лично не люблю, он сам может довать дрейф.

Я не знаю как долго вы работали на приборе перед тем как возникла проблема. Если долго то анализ необходимо остановить и промыть колонку до стабильности. А если проб было не много увеличте время анализа и промывать колонку будете элюентом после каждого анализа. И ещё, у колонок есть ресурс, который вы уже могли выработать. И тогда проще поменять колонку.

Symon
Пользователь
Ранг: 90

23.03.2009 // 22:04:23

pdon83 пишет:
Коллеги, посоветуйте пожалуйста...
Не могу добиться ровной базовой линии на ВЭЖХ Perkin Elmer series 200 при анализе пива на компонентный состав горечи. Элюирование градиентное. Все растворители - только gradient HPLC grade. Базовая при анализе постоянно ползет вверх, из-за этого получаются некорректные результаты при низких концентрациях.

Что значит "постоянно ползет вверх"?
Обнулите её, масштаб смените, что Вас так уж картинка беспокоит, или результат? Тут, кстати, Вас должно беспокоить соотношение "сигнал/шум", а вовсе не ровность поверхности.
Ячейки промойте, что ли, руки у лаборанта.
Про "компонентный состав горечи" - отдельно и поподробнее для Отдельных любителей пива. Их есть тут.


Ответов в этой теме: 13 Страница: 1 2 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты