Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение Эргокальциферола (витамина D2) >>>

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Balloon
Пользователь
Ранг: 6


17.03.2007 // 17:17:32     
Редактировано 1 раз(а)

Жизнь продолжается. Новые проблемы.

Дали мне другую лекарственную форму - эргокальциферол раствор в масле 0,0625%. На руках у меня ФСП на данный препарат. В ней предлагают для приготовления раствора испытуемого образца использовать ХлороворМ. Преподаватели сказали: "Пожелей хроматограф.... что-то с пластмассовыми деталями сделает этот хлороформ... и т.п." В общем использовать хлороформ запретили. Сначала попробовали на ацетонитриле. Ни чего не вышло. Попробовали измерить на фотоколориметре. Пика на нужной длине волны (264 нм) не было. Затем были варианты с изопропиловым спиртом, с метиловым спиртом, даже с хлороформом (на ФК). Все бестолку.
Высказали мнение что проблема в пробоподготовке: как то нужно отделить лекарственное вещество от масляной составляющей и повысить концентрацию. Все методики которые я нашел в различных химических журналах содержат пробоподготовку для твердых лекарственных форм (не содержащих масленного компонента), а для жидких масленных лекарственных форм методик у меня нет! Посоветуйте что-нибудь!
P.S.На кафедре хроматограф shimadzu CTO-10A
колонка обращенная С18 25см, 4,6 мм внут.диаметр,5 мкм
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


17.03.2007 // 19:31:39     
Вообще то растительные масла достаточно неплохо растворяются в 100 % изопропаноле. Но С18 колонке масло -это капец. 100 % ацетонитрилом или изопропанолом D2 удасться выгнать витамин запросто, но масло забьет фильтр и отмодифицирует неподвижную фазу так , что "мама не горюй".
Что можно сделать?
1) Использовать метод ТСХ. Как мне представляется ТСХ с спектрофотометрическим окончанием в данном случае самый что ни на есть метод выбора. Прям 100 мкл масла наносить полоской на ТСХ пластинку, разгонять в смеси например бензол/спирт 1:1 , опрыскивать специфичным реактивом и денситометрировать. Дешево и сердито, зато высший класс, сразу видна соображалка.
2) Поставить предколонку перед С-18 колонкой.
"Засрется" после 10 укола- выкинуть и новую поставить. Цена вопроса 30 баксов.
3) Использовать твердофазную экстракцию на картридже с фазой С-8 . Ну например картридж производства Биохиммак.
Вводить примерно 0.1 мл чистого масла, после чего промывать картридж 20 мл метанола, и метанол упаривать до 10 мкл. Правда 100 % экстракции не гарантирую.
Ну и последний- читай про рыбий жир!
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


18.03.2007 // 16:08:35     

Если Д3 в препарате гарантированно нет, то лучше всего разделение вести на нормальной фазе - обычная (любая) силикагельная колонка. Гексан сначала лучше посушить, и в качестве модификатора использовать не изопропанол (как делают обычно), а уксусную к-ту, то есть элюент гексан-укс. к-та примерно от 100-0.1 до 100-0.5. Соответственно, драже экстрагировать элюентом и просто фильтровать. При этом помнить, что Д2 и Д3 на силикагеле выходят одним пиком.

И только если есть Д3 - тогда фантазировать с обращенкой. Цианопропльная фаза, указанная в методике - это чуть ли не самый худший из всех вариантов. Какая-нибуть неполярная гадость обязательно будет портить колонку, да и за хорошую воспроизводимость не ручаюсь (ровно как и за разделение Д2 и Д3).

На разделение Д3 и Д2 проверены некоторые фазы, к примеру, такая есть у нас (СГЕ) и точно еще и Супелко. Элюент - чистый ацетонитрил с небольшой добавкой воды или метанола.

Balloon
Пользователь
Ранг: 6


18.03.2007 // 16:37:20     

DSP007 пишет:
Вообще то растительные масла достаточно неплохо растворяются в 100 % изопропаноле. Но С18 колонке масло -это капец. 100 % ацетонитрилом или изопропанолом D2 удасться выгнать витамин запросто, но масло забьет фильтр и отмодифицирует неподвижную фазу так , что "мама не горюй".
Что можно сделать?
1) Использовать метод ТСХ. Как мне представляется ТСХ с спектрофотометрическим окончанием в данном случае самый что ни на есть метод выбора. Прям 100 мкл масла наносить полоской на ТСХ пластинку, разгонять в смеси например бензол/спирт 1:1 , опрыскивать специфичным реактивом и денситометрировать. Дешево и сердито, зато высший класс, сразу видна соображалка.
2) Поставить предколонку перед С-18 колонкой.
"Засрется" после 10 укола- выкинуть и новую поставить. Цена вопроса 30 баксов.
3) Использовать твердофазную экстракцию на картридже с фазой С-8 . Ну например картридж производства Биохиммак.
Вводить примерно 0.1 мл чистого масла, после чего промывать картридж 20 мл метанола, и метанол упаривать до 10 мкл. Правда 100 % экстракции не гарантирую.
Ну и последний- читай про рыбий жир!


1) ТСХ нельзя, т.к. цель моей курсовой - освоить ВЭЖХ метод на примере эргокальциферола(масляный раствор) ;
2)Кто бы разрешил - кафедра и так еле-еле у ректората деньги на прибор выпросила, что случись с прибором - три шкуры снимут.
3) Использовать твердофазную экстракцию на картридже с фазой С-8 - так у нас неверное её нет - преподаватели ни слова о ней не говорили
4) Про рыбий жир - преподаватели сказали не годиться.
У меня есть только: маслянный раствор эргокальциферола(без витамина Д3); обращенка С-18 (25см, 4,6мм, 5 мкм); и огромное желание проделать эксперимент и написать по нему курсовую
Balloon
Пользователь
Ранг: 6


18.03.2007 // 16:40:53     

КонстантинС пишет:

Если Д3 в препарате гарантированно нет, то лучше всего разделение вести на нормальной фазе - обычная (любая) силикагельная колонка. Гексан сначала лучше посушить, и в качестве модификатора использовать не изопропанол (как делают обычно), а уксусную к-ту, то есть элюент гексан-укс. к-та примерно от 100-0.1 до 100-0.5. Соответственно, драже экстрагировать элюентом и просто фильтровать. При этом помнить, что Д2 и Д3 на силикагеле выходят одним пиком.

И только если есть Д3 - тогда фантазировать с обращенкой. Цианопропльная фаза, указанная в методике - это чуть ли не самый худший из всех вариантов. Какая-нибуть неполярная гадость обязательно будет портить колонку, да и за хорошую воспроизводимость не ручаюсь (ровно как и за разделение Д2 и Д3).

На разделение Д3 и Д2 проверены некоторые фазы, к примеру, такая есть у нас (СГЕ) и точно еще и Супелко. Элюент - чистый ацетонитрил с небольшой добавкой воды или метанола.


Витамина Д3 точно нет;
У меня не драже, а маслянный раствор эргокальциферола;
Нормальной фазы нет, только обращенка С18;
Хлороформ использовать нельзя;
Как жить? .....
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Varian B.V. Varian B.V.
Московское представительство Varian BV, Миддельбург, Нидерланды. Обеспечивает поддержку отдела научных приборов и оборудования Varian Inc. в России и СНГ.
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


18.03.2007 // 21:50:47     

Balloon пишет:
Как жить? .....

А никак. Прежде всего надо усвоить, что ВЭЖХ требует пробоподготовки, особенно в случае сложных матриц.
Вам уже накидали кучу идей, как ее провести. Учитывая, что колонок с голым силикагелем у Вас нет, самое разумное - использовать ТСХ для пробоподготовки, соскоблить пятно, поболтать с ацетонитрилом и заколоть.
Если ТСХ вообще нельзя, даже для пробоподготовки, то использовать стеклянную колонку с силикагелем для этой же цели.
Если же вообще ничего для пробоподготовки использовать нельзя, остается галавойапстену.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


18.03.2007 // 22:21:35     



А можно и на С18 работать как на силикагельной колонке, запросто. Только она потом всю жизнь будет нормально-фазовой, учтите...
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


18.03.2007 // 22:45:46     

КонстантинС пишет:



А можно и на С18 работать как на силикагельной колонке, запросто.

Не на всякой. Сильно заэндкаппенные могут не подойти из-за низкой емкости.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


19.03.2007 // 9:19:44     
Обеими руками поддерживаю Islandera.
Но не стоит сразу ориентироваться на ОФ. На силикагеле жирорастворимые витамины вполне сносно разделяются. Да и с пробоподготовкой полегче, особенно в жироподобных матрицах.
Можно, если нет силикагеля, использовать ОФ сорбент подревнее. Какой нибудь там сепарон С18 или нуклеосил С18.
В лекформе там же этих веществ лошадинные количества. Так что особых проблем не вижу.
В НФ режиме можно делать с минимальной пробоподготовкой. По крайней мере, в свое время напрямую колол гексановые экстракты плавленых сырков - и ничего, сливочное масло не мешало.
В НФ можно поделить и D2 от D3. Только состав элюента придется несколько посложней сделать. Типа гексан-ИПС-ТГФ или гексан-эфир-хлороформ.
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


19.03.2007 // 10:04:34     
Редактировано 2 раз(а)


Balloon пишет:
ТСХ нельзя, т.к. цель моей курсовой - освоить ВЭЖХ метод на примере эргокальциферола(масляный раствор) ;
У меня есть только: маслянный раствор эргокальциферола(без витамина Д3); обращенка С-18 (25см, 4,6мм, 5 мкм); и огромное желание проделать эксперимент и написать по нему курсовую

Аффтар жжот нипадецки! Нихрена себе постановка задачи!!! В Бабруйск преподов.
Если серьезно, то так задачи не ставятся, впрочем вина в этом не Ваша. Нормальные люди сначала думают что они хотят сделать и куда это потом деть. Потом смотрят ,что у них есть и из этого смотрят как и на чем они будут делать. А здесь все наоборот!

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты