Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение Эргокальциферола (витамина D2) >>>

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение Эргокальциферола (витамина D2)
Balloon
Пользователь
Ранг: 6

28.02.2007 // 2:50:12     
Здравствуйте!
Я студент фармацевтического факультета медицинской академии. По фарм\химии дали задание - разработать фармакопейную статью и предложить методику определения эргокальциферола (витамина D2) в препарате (эргокальциферол драже) методом ВЭЖХ. Фармакопейную статью я разработал, а вот с методикой проблема т.к. знаний по ВЭЖХ не так много - занятий по этой теме было мало
Не могли бы вы подсказать мне какую-нибудь эффективную методику? Заранее спасибо!!!
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


28.02.2007 // 2:54:10     
Встречный и немаловажный вопрос. Надо ли делить от витамина D3 ? Сложность анализа будет в немалой степени зависеть от этого.
Balloon
Пользователь
Ранг: 6


28.02.2007 // 11:39:58     

Islander пишет:
Встречный и немаловажный вопрос. Надо ли делить от витамина D3 ? Сложность анализа будет в немалой степени зависеть от этого.
Нет, делить не надо. Обьект исследования - драже эргокальциферола. Действующее вещество только одно - эргокальциферол. Буду благодарен за любую информацию.
virtu
VIP Member
Ранг: 2130


28.02.2007 // 12:18:40     
Здравствуйте.А с чего Вы уверены, что действующее соединение только одно?Поэтому и вопрос адекватный Вам задали.Я хотел спросить,надо что-то новое предложить или можно "скопировать" и "скомпилировать".
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


28.02.2007 // 13:59:36     
Здравствуй будущий Коллега !
Вот Вам цитата из Британской Фармакопеи (Cod-Liver Oil)
tamin D3 Carry out the assay as rapidly as possible, avoiding exposure to actinic light and air.

Examine by liquid chromatography (2.2.29).

Internal standard solution. Dissolve 0.50 mg of ergocalciferol CRS in 100 ml of ethanol R.

Test solution (a). To 4.00 g in a round-bottomed flask, add 5 ml of a freshly prepared 100 g/l solution of ascorbic acid R, 10 ml of a freshly prepared 800 g/l solution of potassium hydroxide R and 100 ml of ethanol R. Boil under a reflux condenser on a water-bath for 30 min. Add 100 ml of a 10 g/l solution of sodium chloride R and cool the solution to room temperature. Transfer the solution to a 500 ml separating funnel rinsing the round-bottomed flask with about 75 ml of a 10 g/l solution of sodium chloride R and then with 150 ml of a mixture of equal volumes of light petroleum R3 and ether R. Shake for 1 min. When the layers have separated completely, discard the lower layer and wash the upper layer, first with 50 ml of a 30 g/l solution of potassium hydroxide R in a 10 per cent V/V solution of ethanol R, and then with three quantities, each of 50 ml, of a 10 g/l solution of sodium chloride R. Filter the upper layer through 5 g of anhydrous sodium sulphate R on a fast filter paper into a 250 ml flask suitable for a rotary evaporator. Wash the funnel with 10 ml of fresh extraction mixture, filter and combine the upper layers. Distil them at a temperature not exceeding 30°C under reduced pressure (water ejector) and fill with nitrogen R when evaporation is completed. Alternatively evaporate the solvent under a gentle current of nitrogen R at a temperature not exceeding 30°C. Dissolve the residue in 1.5 ml of the mobile phase described under Purification. Gentle heating in an ultrasonic bath may be required. ( A large fraction of the white residue is cholesterol, constituting approximately 50 per cent m/m of the unsaponifiable matter of cod- liver oil).

Test solution (b). To 4.00 g add 2.0 ml of the internal standard solution and proceed as described for test solution (a).

Reference solution (a). Dissolve 0.50 mg of cholecalciferol CRS in 100.0 ml of ethanol R.

Reference solution (b). In a round-bottomed flask, add 2.0 ml of reference solution (a) and 2.0 ml of the internal standard solution and proceed as described for test solution (a).

Purification

The chromatographic procedure may be carried out using:

— a stainless steel column 0.25 m long and 4.6 mm in internal diameter packed with cyanosilyl silica gel for chromatography R ( 10 µm),

— as mobile phase at a flow rate of 1.1 ml/min a mixture of 1.6 volumes of isoamyl alcohol R and 98.4 volumes of hexane R,

— as detector a spectrophotometer set at 265 nm.

Inject 350 µl of reference solution (b). Collect the eluate from 2 min before until 2 min after the retention time of cholecalciferol, in a ground-glass-stoppered tube containing 1 ml of a 1 g/l solution of butylhydroxytoluene R in hexane R. Repeat the procedure with test solutions (a) and (b). Evaporate the eluates obtained from reference solution (b) and from test solutions (a) and (b), separately, to dryness at a temperature not exceeding 30°C under a gentle current of nitrogen R. Dissolve each residue in 1.5 ml of acetonitrile R.

Determination

The chromatographic procedure may be carried out using:

— a stainless steel column 0.15 m long and 4.6 mm in internal diameter packed with octadecylsilyl silica gel for chromatography R (5 µm),

— as mobile phase at a flow rate of 1.0 ml/min a mixture of 0.2 volumes of phosphoric acid R and 99.8 volumes of a 96 per cent V/V solution of acetonitrile R,

— as detector a spectrophotometer set at 265 nm.

Inject two quantities not exceeding 200 µl of each of the three solutions obtained under Purification.

The assay is not valid unless:

— in the chromatogram obtained with reference solution (b), the resolution between the peaks corresponding to ergocalciferol and cholecalciferol is at least 1.4,

— when using the method of standard additions to test solution ( a) there is greater than 95 per cent recovery of the added cholecalciferol CRS when due consideration has been given to correction by the internal standard.

Calculate the content of vitamin D3 in I.U. per gram using the following expression, taking into account the assigned content of cholecalciferol CRS:



m1 = mass of the substance to be examined in test solution (b) in grams,

m2 = total mass of cholecalciferol CRS used for the preparation of reference solution (a) in micrograms (500 µg),
A1 = area (or height) of the peak corresponding to cholecalciferol in the chromatogram obtained with test solution (a),

A2 = area (or height) of the peak corresponding to cholecalciferol in the chromatogram obtained with test solution (b),

A3 = area (or height) of the peak corresponding to ergocalciferol in the chromatogram obtained with reference solution (b),

A4 = area (or height) of the peak corresponding to ergocalciferol in the chromatogram obtained with test solution (b),

A5 = area (or height) of the peak corresponding to a possible peak in the chromatogram obtained with test solution (a) with the same retention time as ergocalciferol co-eluting with ergocalciferol in test solution (b),

A6 = area (or height) of the peak corresponding to cholecalciferol in the chromatogram obtained with reference solution (b),

V1 = total volume of reference solution (a) (100 ml),

V2 = volume of reference solution (a) used for preparing reference solution (b) (2.0 ml),

Пробоподготовка конечно зверская , но это же всеми нелюбимый с детства рыбий жир.
А еще в библиотеке есть Ш Герег "Количественный анализ стероидов " М 1985 , Вас касаются страницы с 358 по 364. И не вертите носом что старье. Если нужно новое- смотрите по STN International, много но за денежку.
А если матрица попроще и Вы учитесь в Московской медицинской Академии им Сеченова- то Вам прямой путь на Ленинские горы. В Биохиммак СТ . В свое время тов. Волгин совместно с ИККЛС издал методичку " Применение ВЭЖХ в фармацевтическом анализе" М 2001.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1311


28.02.2007 // 19:45:19     
Редактировано 6 раз(а)

Ну что-ж Вы меня позорите, DSP! Ну не имею я никакого отношения к нашим методичкам!! Методики - дело Г.Г.Васиярова. Мое дело - паковать колонки!!! Как говорил когда-то Райкин: "К пуговицам претензии есть?"
И ваще, брошюра называется "ДИАСОРБ И ДИАСФЕР в фармацевтическом анализе", где приведено разделение модельной смеси витаминов. Кстати, я только что (1.03.07 13-39 ) с удивлением узнал, что она выложена на нашем сайте.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
БИОМЕР, НПП БИОМЕР, НПП
Разработка, производство и продажа анализаторов для пищевой промышленности. Ультразвуковые анализаторы для анализа молока, пива, вина, ликероводочных изделий. Оборудование для потенциометрии – модельный ряд рН-метров и иономеров. Комплексное оснащение лабораторий. На базе выпускаемого оборудования разработка методик выполнения измерений для конкретных прикладных задач.
Balloon
Пользователь
Ранг: 6


28.02.2007 // 23:51:46     
Редактировано 2 раз(а)


virtu пишет:
Здравствуйте.А с чего Вы уверены, что действующее соединение только одно?Поэтому и вопрос адекватный Вам задали.Я хотел спросить,надо что-то новое предложить или можно "скопировать" и "скомпилировать".

Можно "скопировать" и "скомпилировать". А на счет действующего соединения - оно одно, т.к. это изначальное условие. Обьект исследования - Эргокальциферол драже 0,0125 мг (500 ME) (ФСП 42- 0035004800).
Состав на одно драже:
Раствора эргокальциферола (витамина Д2) в масле 0,5% 0,0025 г (500 ME) ;
Сахара - 0,441 г ;
Вспомогательных веществ (мука пшеничная, патока крахмальная,масло подсолнечное, масло мятное,тальк,воск) - до получения драже массой 0,5 г;

DSP007, Вам отдельное спасибо!НО у меня к вам вопрос: то что вы мне дали - статья о определении витамина Д3 в рыбьем жире; можно ли её использовать для определения Д2 в драже эргокальциферола?
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


01.03.2007 // 0:48:04     
Редактировано 1 раз(а)


Balloon пишет:
статья о определении витамина Д3 в рыбьем жире; можно ли её использовать для определения Д2 в драже эргокальциферола?

Можно. Причем пробоподготовку можно существенно упростить. Но если по серьезному, то нужно проверять, что нужно, а что лишнее.

Для Ваших учебных целей вполне подойдет примитивный вариант - взять 20 драже, определить среднюю массу, растолочь в ступе, отобрать навеску, поболтать на шейкере в подвижной фазе аналитической части методики, отфильтровать и заколоть.
На практике возможны проблемы с окислением и неполным извлечением (если растительного масла много).
Кстати, хотя Вам это и не нужно, приведенная аналитическая хроматография подразумевает разделение пиков Д2 и Д3, однако мне точно известно, что не всякая С18 колонка их поделит. Как это часто бывает с фармакопейными методиками, оставим это на совести авторов...
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


01.03.2007 // 9:48:27     
О , простите великодушно!
Тем более позора никакого нет. Все хроматограммы отлично воспроизводятся, в отличие от большинства г*****х ФСП и НД, утвержденных бывш Фармакопейным комитетом в 1996-2003 годах.
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


02.03.2007 // 2:17:21     

DSP007 пишет:
О , простите великодушно!
Не думал Вас задеть. Неужели Вы автор статьи в BP? А мое обобщение связано с тем, что мне действительно неоднократно приходилось сталкиваться с весьма уродливыми методиками из USP (к счастью, таких там все-таки немного). К Российской Фармакопее претензий не имею, так как с ней мне работать не приходилось. Верю Вам на слово, что в ней все безупречно.
DSP007
VIP Member
Ранг: 2228


02.03.2007 // 10:20:56     

Islander пишет:

DSP007 пишет:
О , простите великодушно!
Не думал Вас задеть. Неужели Вы автор статьи в BP? А мое обобщение связано с тем, что мне действительно неоднократно приходилось сталкиваться с весьма уродливыми методиками из USP (к счастью, таких там все-таки немного). К Российской Фармакопее претензий не имею, так как с ней мне работать не приходилось. Верю Вам на слово, что в ней все безупречно.

Нет, я извинялся перед глубоко уважаемым Волгиным.
Насчет USP согласен, некоторые методики там "дикие" и не всегда воспроизводятся в отличие от BP. Про утвержденные в 1993-2003 г в РФ НД зарубежных фирм вообще молчу.

  Ответов в этой теме: 20
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты