Форумы ANCHEM.RU: Глютамат натрия методом ВЭЖХ

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Глютамат натрия методом ВЭЖХ >>>

  Ответов в этой теме: 24
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Глютамат натрия методом ВЭЖХ

galex
Пользователь
Ранг: 36

22.02.2007 // 16:28:33

Редактировано 1 раз(а)

Пожалуйста, отзовитесь кто имеет опыт определения Глютамат натрия в пищевых продуктах методом ВЭЖХ.
Нужна информация о пробоподготовке, колонке, элюенте.
Нашли описание рабочей методики (колонка Nova Pak C18 5 мкм 3,9x150мм, элюент 0,05М фосфатно-ацетатный буфер pH7,0 - метанол - тетрагидрофуран (94:4:2)) , в которой к колонке подключают реактор в виде спирали из стальной трубки (внутренний диаметр трубки не более 0,1 мм, диаметр спирали - 10-20 мм, длина трубки не указана), который подключают перед колонкой и помещают вместе с колонкой в термостате с температурой 35С.
Какой его физико-химический смысл?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

22.02.2007 // 18:43:35

Все в шоке

Глютамат можно определять ионообменной, но мне кажется - лучше на аминофазе на той же примерно системе, что и сахара.

galex
Пользователь
Ранг: 36

23.02.2007 // 11:37:10

Метод, согласно методики, состоит в том, что глютамат натрия модифицируют по альфа-аминогруппе реагентом с ортофталевым диандигридом.

Это, вроде как, дает возможность определить его после разделения спектрофотометрическим и флюорисцентным детекторами.

Используется доколоночная модификация глютамата.

Кстати только сейчас обратили внимание, длина реактора 1000-1500 мм.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

23.02.2007 // 12:35:03

Редактировано 1 раз(а)

Глютамат натрия - натриевая соль аминокислоты -глютаминовой. В структуре этой кислоты УФ свету сложно за что-нибудь зацепиться более-менее. Поэтому без модифицирования глютаминки "увидеть" ее весьма проблематично. Поэтому обычно используют дериватизацию либо соединениями, которые повышают УФ "поглощаемость", либо заставляют флуоресциировать искомое соединение. То, что Вы описали - обычно это постколоночная дериватизация (а не предколоночная, странно но факт ) с использованием о-фталевого ангидрида. Но Константин прав в этом случае, - использовать лучше ионообменку, чем обращенку. Удерживание глютаминки на обращенке будет неважное.Если у Вас ионообменных колонок нет, то предпочтительнее была бы предколоночная дериватизация по аминогруппе например фенилизотиоцианатом, дансилхлоридом, ДАБСил-хлоридом, ну а потом использовать условия для разделения ФТГ-аминокислот или дансил-аминокислот. Методик благо до фига и больше.

galex
Пользователь
Ранг: 36

23.02.2007 // 13:56:21

Редактировано 3 раз(а)

Поздравляю всех защитников Отечества.

Garry пишет:
То, что Вы описали - обычно это постколоночная дериватизация (а не предколоночная, странно но факт ) с использованием о-фталевого ангидрида.

Я писал "Используется доколоночная модификация глютамата."

Удерживание глютаминки на обращенке будет неважное.

Что именно имеется ввиду? Площадь пика? Время удерживания?
Чуствительность методики не указана, измерение массовой концентрации глютамата выполняется с относительной погрешностью +/- 10%.
Градуировка - 0,2; 0,5; 1,0 мг/мл.

Если у Вас ионообменных колонок нет, то предпочтительнее была бы предколоночная дериватизация по аминогруппе например фенилизотиоцианатом, дансилхлоридом, ДАБСил-хлоридом, ну а потом использовать условия для разделения ФТГ-аминокислот или дансил-аминокислот. Методик благо до фига и больше.

Модификация выполняется раствором из
- ортофталевый диангидрид
- метанол
- боратный буфер pH10
- 2-меркаптоэтанол.

Насколько приемлемый такой способ модификации?

virtu
VIP Member
Ранг: 2136

23.02.2007 // 16:08:53

galex пишет:
Пожалуйста, отзовитесь кто имеет опыт определения Глютамат натрия в пищевых продуктах методом ВЭЖХ.
Нужна информация о пробоподготовке, колонке, элюенте.
Нашли описание рабочей методики (колонка Nova Pak C18 5 мкм 3,9x150мм, элюент 0,05М фосфатно-ацетатный буфер pH7,0 - метанол - тетрагидрофуран (94:4:2)) , в которой к колонке подключают реактор в виде спирали из стальной трубки (внутренний диаметр трубки не более 0,1 мм, диаметр спирали - 10-20 мм, длина трубки не указана), который подключают перед колонкой и помещают вместе с колонкой в термостате с температурой 35С.
Какой его физико-химический смысл?

Ну, это легкий изврат.
Можно проще.
Смотря, что у Вас есть под рукой: какие колонки, реактивы и т.д.Можно решить и на силикагеле, и на обращенке и т.д.
Какие концентрации глутамата натрия(я, к сожаленю, уже не помню сколько его добавляют в продукты питания) и какая матрица, а то можно и без дериватизации в УФ на 200-210нм решить.
Если дериватизация: надо решить с реактивами, а то некоторые не так просто и быстро будет достать.
Если по "аминогруппе": дериватизация с орто-фталевым альдегидом, то(из LC&GC):
An OPA derivatization reagent was prepared by mixing 1% OPA methanol solution, 0.4M borate acid buffer solution (pH = 9.0), and 2-mercaptoethanol in the ratio 0.5:1:0.01.
Amino acids in the standard mixture were derivatized with OPA by adding 100 mL of the
reagent to 500 mL of the standard mixture and mixing with a laboratory mixer for approximately 30 s.
В общем вариантов куча.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море»
Федеральное государственное учреждение «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» создано в соответствии с распоряжением Правительства Российской Федерации и осуществляет свою деятельность на территории Российской Федерации, во внутренних морских водах, территориальном море, в исключительной экономической зоне и на континентальном шельфе Российской Федерации.

galex
Пользователь
Ранг: 36

23.02.2007 // 17:07:54

virtu пишет:

Смотря, что у Вас есть под рукой: какие колонки, реактивы и т.д.Можно решить и на силикагеле, и на обращенке и т.д.

У нас в наличии есть Hypersil и Nucleosil C18 5 мкм

Какие концентрации глутамата натрия(я, к сожаленю, уже не помню сколько его добавляют в продукты питания) и какая матрица, а то можно и без дериватизации в УФ на 200-210нм решить.

ПДК - 10000 мг/кг.

Матрица разная - супы, соусы, паштеты, мясные продукты и т.д.

Кстати, в методике пробоподготовка приводится для сухих проб и жидких не конкретизируя матрицу.

Было бы интересно узнать вариант без дериватизации! А то от прибора не отойти

virtu
VIP Member
Ранг: 2136

24.02.2007 // 21:50:06

Методику пробоподготовки можете использовать ту, которую нашли(если там не используется нагревание).
Можно сделать и так, конечно, это только "первый мазок", в общем:
образец->измельчение->экстракция:1г + 10 мл дист.воды(температура комнатная)MIX 10-15мин->декантация+фильтрация(сначала через бумажный, затем через мембранный 0.5-0.2мкм)->очистка(если стоит предколонка и матрица спсобствует, в принципе, можно опустить) методом ТФЭ:сорбент с С16(18),активация этанолом,кондиционирование водой,прогоняете 2мл фильтрата со скоростью 2-3кап/с,затем прогоняете 2-4мл элюента(все собирате),получившийся элюат разбавляете из расчета коэфф. разбавл. = 5-10(чтобы в итоге, концентрация аналита не превышала 1000 мг/л),регенерация:вода-этанол-вода;при необходимости,можно ЖЖЭ почистить;при необходимости осадить белки трихлоруксусной кислотой и т.д. + центрифугирование->хроматографический анализ,сорбент силикагель с С18,элюент:0.05-0.025м КН2РО4 + Н3РО4(водный р-р) до рН=3.2-3.5(буфер,лучше профильтровать через мембранный фильтр 0.5 мкм,если стоит надежный входной фильтр и фильтр в предколонке или предколоночный фильтр,то можно не фильтровать,но потом аукнится,да и лучше каждый раз готовьте новый,если на хранение, то в холодильник, не более 2-3 дней), 4-5%v МеСN или МеОН(смотрите сами),Детектор:УФ 210нм.К'=0.8-1(по моим прикидкам для этой х. системы, относительно КNO2).Сложности:1)матрица(т.к. 210нм),2)неудовлитворительная ассиметрия пика глутамата, здесь основной регулятор рН элюента, ионная сила, добавки модификаторов в элюент, типа NH(Et)2, N(Et)3, соль типа NH4X(должна быть устойчива,и не вызывать промотирование коррозионных процессов в хроматографическом тракте). Вот, вроде и все.
p.s.: В Вашей методике спираль нужна вот для чего: уже при комнатной температуре в водном растворе происходит внутримолекулярная циклизация глутамата натрия/глутаминовой кислоты (с отщеплением молекулы воды) с образованием гетероциклического соединения 5-оксопирролидин-2-карбоновая кислота, хроматографическое поведение и длины волн, при которых наблюдается макимальный молярный коэф. экстинкции (и его величина), будут другими, поэтому и выбирается такой элюент. Скорость циклизации зависит от температуры среды, параметров состояния среды, времени, состава среды, рН и т.д. Но надо быть уверенным, что циклизация проходит до конца, или знать относительную степень циклизации, чтобы судить о реальном содержании глутамата натрия в образце. Такой подход дает преимущества:1)увеличение "поглощения" в уф-диапазоне - увеличение чувствительности методики 2)"улучшение" хроматографического поведения сорбата(относительно глутамата натрия).

galex
Пользователь
Ранг: 36

26.02.2007 // 18:15:35

Огромная благодарность всем, кто откликнулся на запрос.
Отдельное спасибо VIRTU, за обстоятельный и подробный ответ.
Мы сейчас тщательно анализируем Ваши рекомендации.
Еще раз огромное спасибо.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

27.02.2007 // 11:43:08

Ну да, грубо говоря, поболтать в горячей воде, профильтровать, почистить через патрончик с гидрофобным адсорбентом.

Дальше как кто горазд. Я бы разбавил ацетонитрилом, и на 210 нм смотрел в той же системе, что и на сахара (на аминофазе).

muaddib
Пользователь
Ранг: 5

09.04.2009 // 16:37:40

где можно достать срочно немного дабсилхлорида?


Ответов в этой теме: 24 Страница: 1 2 3 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты