Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

концентрация белка >>>

  Ответов в этой теме: 5

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: концентрация белка
optima
Пользователь
Ранг: 322

12.01.2007 // 10:28:29     
Кто-нибудь работает с фосфомолибденовольфрамовым реагентом для определения концентрации белка? Это модификация метода Фолина? Какие вещества могут давать ложноположительные реакции?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


12.01.2007 // 13:39:20     
Да, это модификация метода Лоури, но "тараканы" у него такие же. На развитие окраски мешают :
1. Трис-глициновый буфер (0,2 мМ)
2. Цистеин, дитиотреитол (0,01-0,4 мМ).
3. Аскорбинка.
4. ЭДТА (0,5 мМ).
5. Детергенты (тритон Х-100).
6. Сернокислый аммоний (0,15 %)
7. Сахароза (10 %).
И др.
В связи с этим калибровочный график строят используя в качестве холостой пробы раствор предполагаемых примесей. В некоторых случаях предпочтительно осаждение белка ТХУ, а затем перерастворением его в щелочных растворах или диализ и гель-фильтрация.
Предпочтительнее , как на меня метод Бредфорда с Кумасси синим. Да и чувствительность выше (1-10 мкг/мл) и нет влияния на окраску всех вышеперечисленных веществ.
optima
Пользователь
Ранг: 322


12.01.2007 // 14:16:24     
Да, душевненько. Спасибо за подробный ответ, а с Бредфордом у нас проблемы из-за твина-20 в нашем образце. Тут просто неадекватное развитие окраски, так что холостой образец в виде буфера совершенно бессмысленный.
Garry
VIP Member
Ранг: 1076


12.01.2007 // 15:08:25     
Ну тогда попробуйте модификацию биуретового метода с реактивом Бенедикта (микрометод). В описаловке на него о мешающем действии разной бадяги - ни-ни. Простенько и со вкусом. Диапазон определения 0,1-2 мг белка. Либо вот такую заморочку с Лоури :
Реактивы :
1.Изоамиловый спирт.
2.Хлороформ.
3. Реактивы для определения белка по Лоури.
Ход определения :
0,5мл р-ра белка (10-100 мкг) с детергентом, смешивают с 0,5 мл 1 н NaOH и 3 мл рабочего раствора (р-в биуретовый). После 10-минутного выдерживания при комнатной температуре к полученной смеси добавляют 3 мл изоамилового спирта и тщательно перемешивают. Смесь центрифугируют 10 мин при 2000 g . Верхний слой изоамилового спирта осторожно удаляют с помощью шприца. Оставшийся раствор (4 мл) помещают в чистую пробирку, прибавляют 0,38 мл р-ва Фолина-Чокальтеу и после тщательного перемешивания к смеси добавляют 2 мл хлороформа. Все тщательно перемешивают. Все тщательно перемешивают, центрифугируют опять в тех же условиях. Удаляют слой хлороформа. Окраска развивается в течение 30 минут, после чего меряют оптическую плотность раствора при 750 нм. При построении калибровки вытворяют то же и добавляют те же реактивы.
Метод я не изобретал :
Mather J.H., Tamplin C.B. A method for the determination of protein in the presense of Triton X-100// Anal.Biochem. 1979. Vol. 93,N1. P.139
optima
Пользователь
Ранг: 322


15.01.2007 // 14:06:53     
[Спасибо, попробуем.
Капелька
Пользователь
Ранг: 4


21.10.2015 // 14:07:23     
Подскажите пожалуйста! Вот приготовила реактивы для метода Лоури, но в реактиве В спустя 15-20 минут после смешивания выпадает белая муть в осадок, что то не так делаю или причина в каких-то реактивах? Реактив В готовлю как 0,5% сульфат меди в 1% тартрате калия-натрия

  Ответов в этой теме: 5

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты