Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ стероидов: какие колонки выбрать? >>>

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ВЭЖХ стероидов: какие колонки выбрать?
zinj
Пользователь
Ранг: 19

27.12.2006 // 16:26:15     
подойдут ли эти: Column Phenomenex Synergi Max-RP
4 µm 15mm x 2.0mm ?
www.phenomenex.com/Phen/Doc/zhsyng.pdf
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
DSP
Пользователь
Ранг: 352


27.12.2006 // 16:44:45     
Уважаемый Zinj
Зависит от Вашей матрицы и способа пробоподготовки.
В принципе стероиды можно разделить на обращенной фазе методом ВЭЖХ при большом количестве органической фазы ( 80-90%) , или в градиентном режиме.Однако этот вариант не оптимален.

Замечу , что с этим вопросом я знаком только для лекарственных форм.
По моему мнению для определения стероидов в биологических матрицах более подходит ГХ-МС, с предварительной дериватизацией, так как пробу все равно приходится концентрировать. Разделяющая способность ГХ с каппилярной колонкой типа SE-52 (НP-5) в режиме градиента температуры превышает таковую в ВЭЖХ, вдобавок в ГХ-МС можно варьировать ионизацией и соответственно характером дефрагментации молекулы, что в ВЭЖХ-МС затруднено.
zinj
Пользователь
Ранг: 19


27.12.2006 // 17:12:18     
Редактировано 1 раз(а)

Да, меня интересует количественное определение стероидов в сыворотке крови.
Во многих статьях по этой теме описывается именно ВЭЖХ-МС, например:
Simultaneous determination of 12 steroids by isotope dilution liquid chromatography-photospray ionization tandem mass spectrometry.
Guo T, Taylor RL, Singh RJ, Soldin SJ.
PMID: 16707118
или
Measurement of Total Serum Testosterone in Adult Men:Comparison of Current Laboratory Methods Versus Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
CHRISTINA WANG, DON H. CATLIN, LAURENCE M. DEMERS, BORISLAV STARCEVIC, AND
RONALD S. SWERDLOFF
или
Liquid Chromatography–Tandem Mass
Spectrometry Assay for Simultaneous
Measurement of Estradiol and Estrone in
Human Plasma
Robert E. Nelson, Stefan K. Grebe, Dennis J. O’Kane, and Ravinder J. Singh

и еще зачем нужна эта штука: Photodiodearray Detector with thermostated flow cell?
Farma
Пользователь
Ранг: 382


27.12.2006 // 17:30:17     

zinj пишет:
Да, меня интересует количественное определение стероидов в сыворотке крови.
Во многих статьях по этой теме описывается именно ВЭЖХ-МС, например:
Simultaneous determination of 12 steroids by isotope dilution liquid chromatography-photospray ionization tandem mass spectrometry.
Guo T, Taylor RL, Singh RJ, Soldin SJ.
PMID: 16707118
или
Measurement of Total Serum Testosterone in Adult Men:Comparison of Current Laboratory Methods Versus Liquid Chromatography-Tandem Mass Spectrometry
CHRISTINA WANG, DON H. CATLIN, LAURENCE M. DEMERS, BORISLAV STARCEVIC, AND
RONALD S. SWERDLOFF
или
Liquid Chromatography–Tandem Mass
Spectrometry Assay for Simultaneous
Measurement of Estradiol and Estrone in
Human Plasma
Robert E. Nelson, Stefan K. Grebe, Dennis J. O’Kane, and Ravinder J. Singh

и еще зачем нужна эта штука: Photodiodearray Detector with thermostated flow cell?


Лично я для подобных целей использовал in-line твердофазное концентрирование пробы на сорбенте с ограничением дуступа матрицы (RAM) и последующее разделение методом ОФ-ВЭЖХ. Ваша проба наверняка содержит массу нежелательных примесей (тех же белков), количество которых во много раз превышает содержание целевых компонентов. Я бы не стал грузить это всё на колонку. Опишите подробнее, какие конкретно вещества Вы хотите определять или скиньте эту информацию на моё мыло: farmerino(sobaka)rambler.ru. Могу описать схему установки и разделительную систему. Но я работал лишь с несколькими препаратами стероидного типа.

Что касается колонки, то Вы выбрали какую-то экзотику (и фаза и геометрия). Если я не ошибаюсь, это С20 с хитрым эндкеппингом. Зачем? Мы использовали обычные С8 и С18 фазы (Purospher).
Farma
Пользователь
Ранг: 382


27.12.2006 // 17:35:14     
и еще зачем нужна эта штука: Photodiodearray Detector with thermostated flow cell?

Эта штука - Спектрофотометрический детектор на диодной матрице с термостатируемой ячейкой - нужен как раз для детектирования Ваших стероидов. Он позволяет получить спектр разделённых пиков и тем самым подтвердить их подлинность. Зачем его использовали вместе с Масс-детектором? Честно говоря, не знаю. Наверное, для пущей достоверности результатов. Мы обходились обычным спектрофотометром. А один раз даже использовали детектор по светорассеянию.
DSP
Пользователь
Ранг: 352


27.12.2006 // 17:55:56     
Редактировано 1 раз(а)

Открыл я тут довольно древние книжки ( типа Ш Герег "Количественный анализ стероидов" (М Мир 1985 г) и "хроматография, практическое приложение метода" Хефтман Э 1986 г.
Есть там по ВЭЖХ половых гормонов небольшие куски, равно как и по ГЖХ с дериватизацией.
Да вполне нормальное разделение методом ВЭЖХ на обращеннофазных колонках, если судить по приведенным рисункам. И системы на обращенных фазах не зверские- ацетонитрил/вода , то есть любой сорбент будет работать долго (год, не меньше), если конечно не колоть напрямую биологические жидкости.
Так что для Ваших целей ВЭЖХ вполне сойдет, особенно если надо смотреть метаболиты (глюкураниды)стероидных гормонов.
Щас посмотрю Аквилоновский каталог, что это за колонка такая. Длина больно странная - 15 мм , наверно все-таки 150 мм.
Селективность тандемной МС-МС вполне достаточна.Чувствительность сказать сложно.
В общем метод отличный , только дорого.
Да, и еще совет, стоимость колонки по сравнению с LC-MS-MS ничтожна (300 $ против 300 000$), поэтому сразу закажите кучку одинаковых колонок из одной партии, чтобы когда первая загадится не простаивать.
Боюсь что предколонка будет ухудшать разделение , так как ее объем сравним с объемом колонки. Правда в градиентном режиме она будет выступать как концентрирующая колонка и повысит чувствительность.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Лаборатории Весслинг, ООО Лаборатории Весслинг, ООО
ООО "Лаборатории Весслинг» – официальное представительство немецкого холдинга WESSLING в России, осуществляет контроль качества и безопасности пищевой продукции, продовольственного сырья, БАД, ароматизаторов, кормов, кормовых добавок и объектов окружающей среды таких как вода различных источников (централизованного и нецентрализованного водоснабжения, бутилированная, открытых водоемов, сточная), почва и грунты.
DSP
Пользователь
Ранг: 352


27.12.2006 // 18:06:24     
Редактировано 2 раз(а)


Farma пишет:
и еще зачем нужна эта штука: Photodiodearray Detector with thermostated flow cell?
Эта штука - Спектрофотометрический детектор на диодной матрице с термостатируемой ячейкой - нужен как раз для детектирования Ваших стероидов. Он позволяет получить спектр разделённых пиков и тем самым подтвердить их подлинность. Зачем его использовали вместе с Масс-детектором? Честно говоря, не знаю. Наверное, для пущей достоверности результатов. Мы обходились обычным спектрофотометром. А один раз даже использовали детектор по светорассеянию.
Так понятно! Косоглазые за счет USA идентифицировали на масс-спектрометре гормоны разделяемые по данной методике, а поскольку в систему включен УФ детектор, то в дальнейшем в 100000 больниц КНР смогут использовать не систему ценой в 300 000 $ , а ценой в 30000$. Вполне разумно. Не гонять дорогой прибор ради единичного определения, а отработать на нем методику анализа и переключить на другую задачу.
А насчет колонки- достаточно С18 (ODS).
DSP
Пользователь
Ранг: 352


27.12.2006 // 18:10:48     
А вообще , вопрос ради интереса, Вы с этой задачей /гормоны/ уже работали, или это так, пока первые прикидки "во что обойдется вся система".
А может вообще Вам для дипломной, хотя с учетом первого вопроса (цена Shimadsu LC-MS-MS) мне в это не очень вериться.
Farma
Пользователь
Ранг: 382


27.12.2006 // 18:17:14     
Боюсь что предколонка будет ухудшать разделение , так как ее объем сравним с объемом колонки. Правда в градиентном режиме она будет выступать как концентрирующая колонка и повысит чувствительность.

Уважаемый DSP,
простите, не понял последнюю фразу. Вы предлагаете колоть сыворотку крови без подготовки пробы и концентрировать её на предколонке? Если мне не изменяет память, то Synergi - это обычный 100 ангстремовый силикагель. Мне кажется, на предколонке просто образуется "пробка" за несколько вколов.
Farma
Пользователь
Ранг: 382


27.12.2006 // 18:24:43     
[Так понятно! Косоглазые за счет USA идентифицировали на масс-спектрометре гормоны разделяемые по данной методике, а поскольку в систему включен УФ детектор, то в дальнейшем в 100000 больниц КНР смогут использовать не систему ценой в 300 000 $ , а ценой в 30000$. Вполне разумно. Не гонять дорогой прибор ради единичного определения, а отработать на нем методику анализа и переключить на другую задачу.

В принципе, логично. Только, я думаю, на диодной матрице всё равно будет небольшой риск появления на хроматограмме какого-нибудь схожего по структуре вещества из крови
Farma
Пользователь
Ранг: 382


27.12.2006 // 18:26:22     

DSP пишет:
А вообще , вопрос ради интереса, Вы с этой задачей /гормоны/ уже работали, или это так, пока первые прикидки "во что обойдется вся система".
А может вообще Вам для дипломной, хотя с учетом первого вопроса (цена Shimadsu LC-MS-MS) мне в это не очень вериться.


Да, для диплома это мощно
Может, обычным градиентником с УФ проще обойтись?

  Ответов в этой теме: 22
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты