Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Разделение методом ВЭЖХ аминокислот и аминов >>>

  Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Разделение методом ВЭЖХ аминокислот и аминов
irina
Пользователь
Ранг: 3

11.03.2004 // 18:24:25     
Буду очень признательна за советы по разделению методом ВЭЖХ тирозина и тирамина. Колонка С-18, подвижная фаза - метанол/вода. Проблема - аминокислота и амин выходят одновременно.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Andrew
VIP Member
Ранг: 1306


11.03.2004 // 20:17:04     

irina пишет:
Буду очень признательна за советы по разделению методом ВЭЖХ тирозина и тирамина. Колонка С-18, подвижная фаза - метанол/вода. Проблема - аминокислота и амин выходят одновременно.
Попробуйте вместо воды буфер с разным рН, поскольку гидрофильность аминов зависит от рН удерживание тоже будет существенно меняться и вероятно несинхронно у амина и аминокислоты. Второй вариант - ион-парная хроматография. Применив, к примеру, додецилсульфат натрия Вы увеличите удерживание аминокислоты.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


12.03.2004 // 9:49:18     
Редактировано 1 раз(а)

Андрей все правильно написал. Только не спешите переходить в ион-парный режим, а то компоненты наверняка разбегутся на километр друг от друга.
Думаю, будет достаточно поварьировать рН (3 - 8) и концентрацию фосфатного буфера (обычно в диапазоне 0,01 - 0,1М), чтобы гарантировано растянуть компоненты.
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


17.03.2004 // 10:13:03     
Почему же для ион-парной хроматографии использовать сразу додецилсульфат натрия? Я этого делать не советую по той причине, что потом восстановить свойства колонки будет весьма и весьма сложно. А вот использование коротких ионов типа пентансульфонат, гексил-, гептил- сульфонатов в буферном растворе с рН <= 5 оч-чень даже замечательно разделит аминокислоту от его амина и с колонкой будет все замечательно.
Игорь.
vd
Пользователь
Ранг: 15


17.03.2004 // 15:20:58     
Не знаю свойства сорбента. Но если он достаточно полярный и устойчив в щелочной среде, то элюирование можно провести в два этапа: сначала в слабощелочном аммиачном буфере (чтобы выгнать тирамин), а затем - в нейтральном или даже слабокислом (чтобы тирозин надолго не зависал). Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).
Andrew
VIP Member
Ранг: 1306


17.03.2004 // 22:46:00     

vd пишет:
Не знаю свойства сорбента. Но если он достаточно полярный и устойчив в щелочной среде, то
Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).


Упомянутый С18 как раз неполярный и неустойчивый в щелочной среде и притом уже химически модифицированный, увы...
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Всероссийское масс-спектрометрическое общество (ВМСО) Всероссийское масс-спектрометрическое общество (ВМСО)
Общественная организация, объединяющая на добровольных началах ученых и специалистов, занятых научно-исследовательской, производственной и преподавательской работой в области масс-спектрометрии и ее приложений, а также всех людей интересующихся этим методом.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


20.03.2004 // 14:50:57     
Да, Леонид и Со. все сказали верно, а способ...
Лучше возьмите вместо воды буфер с 1% три- или ди - этиламином, подкисленным фосфорной к-той (возможно - уксусной) - если позволяет длина волны.
Вообще, буфер на основе ацетата триэтиламмония очень дружественнен любому силикагелю, он очень в нем устойчив, в отлисие от неорганических буферов. Максимум буферной емкости рН 4-5, в отличие от фосфата ТЭА - рН 3.5-4. Кроме того - в этих буферах гораздо легче варьировать рН.
vd
Пользователь
Ранг: 15


20.03.2004 // 18:44:37     
Редактировано 1 раз(а)


Andrew пишет:

vd пишет:
Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).
Упомянутый С18 как раз неполярный и неустойчивый в щелочной среде и притом уже химически модифицированный, увы...

Не "увы", а тем более. Нужна химическая модификация аналита.
irina
Пользователь
Ранг: 3


23.04.2004 // 21:46:55     
Огромное спасибо всем за полезные советы. Тирозин и тирамин удалось разделить в аммиачном буфере рН8,0 (50% MeOH).

  Ответов в этой теме: 8

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты