Форумы ANCHEM.RU: Разделение методом ВЭЖХ аминокислот и аминов

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Разделение методом ВЭЖХ аминокислот и аминов >>>

Ответов в этой теме: 8

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Разделение методом ВЭЖХ аминокислот и аминов

irina
Пользователь
Ранг: 3

11.03.2004 // 18:24:25

Буду очень признательна за советы по разделению методом ВЭЖХ тирозина и тирамина. Колонка С-18, подвижная фаза - метанол/вода. Проблема - аминокислота и амин выходят одновременно.

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

11.03.2004 // 20:17:04

irina пишет:
Буду очень признательна за советы по разделению методом ВЭЖХ тирозина и тирамина. Колонка С-18, подвижная фаза - метанол/вода. Проблема - аминокислота и амин выходят одновременно.

Попробуйте вместо воды буфер с разным рН, поскольку гидрофильность аминов зависит от рН удерживание тоже будет существенно меняться и вероятно несинхронно у амина и аминокислоты. Второй вариант - ион-парная хроматография. Применив, к примеру, додецилсульфат натрия Вы увеличите удерживание аминокислоты.

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

12.03.2004 // 9:49:18

Редактировано 1 раз(а)

Андрей все правильно написал. Только не спешите переходить в ион-парный режим, а то компоненты наверняка разбегутся на километр друг от друга.
Думаю, будет достаточно поварьировать рН (3 - 8) и концентрацию фосфатного буфера (обычно в диапазоне 0,01 - 0,1М), чтобы гарантировано растянуть компоненты.

Garry
VIP Member
Ранг: 1076

17.03.2004 // 10:13:03

Почему же для ион-парной хроматографии использовать сразу додецилсульфат натрия? Я этого делать не советую по той причине, что потом восстановить свойства колонки будет весьма и весьма сложно. А вот использование коротких ионов типа пентансульфонат, гексил-, гептил- сульфонатов в буферном растворе с рН <= 5 оч-чень даже замечательно разделит аминокислоту от его амина и с колонкой будет все замечательно.
Игорь.

vd
Пользователь
Ранг: 15

17.03.2004 // 15:20:58

Не знаю свойства сорбента. Но если он достаточно полярный и устойчив в щелочной среде, то элюирование можно провести в два этапа: сначала в слабощелочном аммиачном буфере (чтобы выгнать тирамин), а затем - в нейтральном или даже слабокислом (чтобы тирозин надолго не зависал). Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).

Andrew
VIP Member
Ранг: 1370

17.03.2004 // 22:46:00

vd пишет:
Не знаю свойства сорбента. Но если он достаточно полярный и устойчив в щелочной среде, то
Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).

Упомянутый С18 как раз неполярный и неустойчивый в щелочной среде и притом уже химически модифицированный, увы...

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море»
Федеральное государственное учреждение «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» создано в соответствии с распоряжением Правительства Российской Федерации и осуществляет свою деятельность на территории Российской Федерации, во внутренних морских водах, территориальном море, в исключительной экономической зоне и на континентальном шельфе Российской Федерации.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

20.03.2004 // 14:50:57

Да, Леонид и Со. все сказали верно, а способ...
Лучше возьмите вместо воды буфер с 1% три- или ди - этиламином, подкисленным фосфорной к-той (возможно - уксусной) - если позволяет длина волны.
Вообще, буфер на основе ацетата триэтиламмония очень дружественнен любому силикагелю, он очень в нем устойчив, в отлисие от неорганических буферов. Максимум буферной емкости рН 4-5, в отличие от фосфата ТЭА - рН 3.5-4. Кроме того - в этих буферах гораздо легче варьировать рН.

vd
Пользователь
Ранг: 15

20.03.2004 // 18:44:37

Редактировано 1 раз(а)

Andrew пишет:

vd пишет:
Если имеется в виду не препаративное, а лишь аналитическое использование, может оказаться полезной предварительная химическая модификация с целью понижения полярности и pH-чувствительности (ацилирование, этерифицирование, дезаминирование).
Упомянутый С18 как раз неполярный и неустойчивый в щелочной среде и притом уже химически модифицированный, увы...

Не "увы", а тем более. Нужна химическая модификация аналита.

irina
Пользователь
Ранг: 3

23.04.2004 // 21:46:55

Огромное спасибо всем за полезные советы. Тирозин и тирамин удалось разделить в аммиачном буфере рН8,0 (50% MeOH).


Ответов в этой теме: 8	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты