Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Пробоподготовка плазмы и гомогенатов для анализа методом ВЭЖХ. >>>

  Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Пробоподготовка плазмы и гомогенатов для анализа методом ВЭЖХ.
york
Пользователь
Ранг: 2

26.07.2006 // 14:14:02     
Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается! Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


26.07.2006 // 14:25:20     

Что у Вас за система ВЭЖХ? Здесь капиллярка нужна по идее с МС-ом... если есть ВЭЖХ-МС, то капиллярка на него ставится.
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


26.07.2006 // 23:06:26     

york пишет:
Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается! Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?
А чем ищете, если не секрет? Может, просто чувствительности не хватает, чтобы его увидеть на уровне порядка 100 фемтомолей на грамм (100 пг/г)? Или Вы крысячьи мозги килограммами перерабатываете?
В принципе, помимо ВЭЖХ-МС подойдет и детектор с лазерно-индуцированной флуоресценцией (LIF), а также сочетание ВЭЖХ с радиоиммунным детектированием. У кого-то опыт несомненно есть, и он отражен в статьях:
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=3024045&query_hl=8&itool=pubmed_docsum
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=8428778&query_hl=8&itool=pubmed_docsum
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=9129312&query_hl=8&itool=pubmed_docsum
york
Пользователь
Ранг: 2


27.07.2006 // 8:48:41     
Работаем на Shimadzu с ультрафиолетовым детектором, длина волны 215 нм. Колонка С-8. Элюент ацетонитрил 80%/Фосфорная кислота 0,1 % 20%. МС-детектор только на следующий год будет, не хотелось бы ждать... Крысячие мозги берём милиграммами (не килограммами ), выпариваем под током азота... Также как и плазму. В общем, видимо не хватает чувствительности прибора?
Islander
VIP Member
Ранг: 1065


27.07.2006 // 13:46:20     

york пишет:
В общем, видимо не хватает чувствительности прибора?

Вы правильно догадались.
Леонид
VIP Member
Ранг: 5266


28.07.2006 // 9:41:23     
При таких малых концентрациях можно посоветовать концентрировать + очищать пробы методом ТФЭ.
А потом проводить дериватизацию аналитов в флюоресцирующие производные. И соответственно использовать флюориметр, в качестве детектора. Иногда удается получить выигрыш в чувствительности до 2-х порядков по сравнению с УФ.
Но и тут для надежного определения обрабатывать нужно несколько граммов биоматериала, а не милиграммы.
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Водяная баня глубокая UT-4312 Водяная баня глубокая UT-4312
Обеспечивает поддержание заданой температуры водяной среды. Применяется для нагрева и термостатирования колб, пробирок, стаканов и другой лабораторной посуды. Используются в различных областях медицины, научной и производственной сферах. Объем 12 л. Температурный диапазон: от +5 до +99°C.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Farma
Пользователь
Ранг: 382


31.07.2006 // 15:11:46     

york пишет:
Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается! Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?

Есть такая замечательная вещь у Мерка - наборы ProteoExtract (что-то вроде аффинной ТФЭ), позволяющие выделять, концентрировать, очищать и даже гидролизовать белки и пептиды в твёрдой фазе перед анализом. Используются во всём мире для протеомных исследований. Думаю, вещица как раз для Вас.
КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306


01.08.2006 // 20:04:54     

Ну, МС + надо ставить капиллярную колонку + больше брать исходного материала и разрабатывать методику пробоподготовки.

То есть что-то выйдет, если объеденить все данные советы

  Ответов в этой теме: 7

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты