Форумы ANCHEM.RU: Пробоподготовка плазмы и гомогенатов для анализа методом ВЭЖХ.

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Пробоподготовка плазмы и гомогенатов для анализа методом ВЭЖХ. >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Пробоподготовка плазмы и гомогенатов для анализа методом ВЭЖХ.

york
Пользователь
Ранг: 2

26.07.2006 // 14:14:02

Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается!

Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

26.07.2006 // 14:25:20

Что у Вас за система ВЭЖХ? Здесь капиллярка нужна по идее с МС-ом... если есть ВЭЖХ-МС, то капиллярка на него ставится.

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

26.07.2006 // 23:06:26

york пишет:
Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается! Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?

А чем ищете, если не секрет? Может, просто чувствительности не хватает, чтобы его увидеть на уровне порядка 100 фемтомолей на грамм (100 пг/г)? Или Вы крысячьи мозги килограммами перерабатываете?
В принципе, помимо ВЭЖХ-МС подойдет и детектор с лазерно-индуцированной флуоресценцией (LIF), а также сочетание ВЭЖХ с радиоиммунным детектированием. У кого-то опыт несомненно есть, и он отражен в статьях:
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=3024045&query_hl=8&itool=pubmed_docsum
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=8428778&query_hl=8&itool=pubmed_docsum
www.ncbi.nlm.nih.gov/entrez/query.fcgi?db=pubmed&cmd=Retrieve&dopt=AbstractPlus&list_uids=9129312&query_hl=8&itool=pubmed_docsum

york
Пользователь
Ранг: 2

27.07.2006 // 8:48:41

Работаем на Shimadzu с ультрафиолетовым детектором, длина волны 215 нм. Колонка С-8. Элюент ацетонитрил 80%/Фосфорная кислота 0,1 % 20%. МС-детектор только на следующий год будет, не хотелось бы ждать...

Крысячие мозги берём милиграммами (не килограммами

), выпариваем под током азота... Также как и плазму. В общем, видимо не хватает чувствительности прибора?

Islander
VIP Member
Ранг: 1065

27.07.2006 // 13:46:20

york пишет:
В общем, видимо не хватает чувствительности прибора?

Вы правильно догадались.

Леонид
VIP Member
Ранг: 5266

28.07.2006 // 9:41:23

При таких малых концентрациях можно посоветовать концентрировать + очищать пробы методом ТФЭ.
А потом проводить дериватизацию аналитов в флюоресцирующие производные. И соответственно использовать флюориметр, в качестве детектора. Иногда удается получить выигрыш в чувствительности до 2-х порядков по сравнению с УФ.
Но и тут для надежного определения обрабатывать нужно несколько граммов биоматериала, а не милиграммы.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море»
Федеральное государственное учреждение «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» создано в соответствии с распоряжением Правительства Российской Федерации и осуществляет свою деятельность на территории Российской Федерации, во внутренних морских водах, территориальном море, в исключительной экономической зоне и на континентальном шельфе Российской Федерации.

Farma
Пользователь
Ранг: 382

31.07.2006 // 15:11:46

york пишет:
Ищём свободный брадикинин в плазме и в коре головного мозга крыс. Пока что мало получается! Используем ингибиторы протеолиза, (в т.ч. фенантролин - ингибитор кининазы) для того, чтобы брадикинин не разрушался. Может у кого-нибудь есть опыт прободготовки биологических сред для определения в них быстро-разрушающихся полипептидов?

Есть такая замечательная вещь у Мерка - наборы ProteoExtract (что-то вроде аффинной ТФЭ), позволяющие выделять, концентрировать, очищать и даже гидролизовать белки и пептиды в твёрдой фазе перед анализом. Используются во всём мире для протеомных исследований. Думаю, вещица как раз для Вас.

КонстантинС
VIP Member
Ранг: 2306

01.08.2006 // 20:04:54

Ну, МС + надо ставить капиллярную колонку + больше брать исходного материала и разрабатывать методику пробоподготовки.

То есть что-то выйдет, если объеденить все данные советы


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты