Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Проблема с ВЭЖХ колонкой после использования ТБАБ >>>

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Partos
Пользователь
Ранг: 37


26.08.2022 // 15:29:48     
Редактировано 2 раз(а)

На неделе пытался ставить эксперименты по моему вопросу, отчитываюсь) :

1. Заменил уплотнители насосов, проверил и подтянул фитинги, "передернул" колонку.
Разобрался с непонятным уменьшением давления на колонке. Тут моя глупость, даже стыдно признаваться, там просто были разные скорости потока, в последнее время всегда ставил 1,1 мл/мин, а в начале использования колонки было 1,2 мл/мин. Отсюда и разница в 2 МПа, даже не помню, когда я это изменил.
2. Изменение скорости потока на форму пиков не влияют от слова совсем, просто пропорционально изменяются времена удерживания.
3. Уменьшение pH проблему "хвостатости" не решает, становится даже хуже, как это ни странно. При pH 4,5 (по методике pH 6,8) уменьшается время удерживания обоих пиков (особенно "большого" пика дифосфорного эфира тиамина) и плюс оба пика размазываются до такой степени, что пик фосфотиамина начинает наползать на "большой" пик (скриншоты не делал, но по старым будет понятно, что имею в виду).
4. Уменьшение концентрации ТБАБ ниже рекомендованных 0,006 моль/л (2 г/л) тоже мимо. Чем меньше концентрация ТБАБ, тем хуже разделение и форма пика фосфотиамина, при концентрации 0,5 г/л там просто размытый холмик, плавно переходящий в "большой" пик.
5. Долго промывал ацетонитрилом с водой в разных пропорциях, бесполезно.
6. А вот от промывки метанолом с водой 60/40 эффект есть, грязь выходит уже на протяжении двух часов подряд. Буду мыть дальше. Еще нужно будет попробовать отмыть раствором метанола при pH 3,0.

В общем итог такой, если удастся промывкой метанолом хоть немного улучшить характеристики пиков, то хорошо, тогда отпишусь о результатах. Если нет, значит буду использовать эту колонку, пока будет воспроизводимость и линейность по площади фосфотиамина, а дальше менять колонку. Другого выхода пока не вижу.

Кстати, вопрос. При какой асимметрии пик считается неприемлемым вообще в методе ВЭЖХ, если специально не прописано в методике? Просто встречал у разных авторов разные значения, кто-то считает, что 1,5 это предел, кому-то и 3,0 нормально, если по другому не получается.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
voodensky
Пользователь
Ранг: 500


26.08.2022 // 15:46:15     
Спасибо за результаты.

По пунктам:
4. Интересно посмотреть хроматограммы в наложении.
6. Следите за давлением, чтобы не превысило максимального. Как отличаете грязь от ТБАБ? Почему думаете, что это не он смывается, а именно грязь?

В качестве варианта я бы еще рассмотрел сорбцию на капиллярах. Фосфотиамин не может на стальных капиллярах сорбироваться? И от сюда хвостатость.

Смотря в какой области работаете. Если в фарме, то в фармакопее указаны обычные значения ассиметрии. А в целом, если на вопросизводимость интегрирования сильно не влияет (СКО площади приемлимое), то я бы считал нормальным.
Partos
Пользователь
Ранг: 37


26.08.2022 // 16:25:38     

voodensky пишет:
Спасибо за результаты.

По пунктам:
4. Интересно посмотреть хроматограммы в наложении.
6. Следите за давлением, чтобы не превысило максимального. Как отличаете грязь от ТБАБ? Почему думаете, что это не он смывается, а именно грязь?

В качестве варианта я бы еще рассмотрел сорбцию на капиллярах. Фосфотиамин не может на стальных капиллярах сорбироваться? И от сюда хвостатость.

Смотря в какой области работаете. Если в фарме, то в фармакопее указаны обычные значения ассиметрии. А в целом, если на вопросизводимость интегрирования сильно не влияет (СКО площади приемлимое), то я бы считал нормальным.


4. Эти не сохранил за ненадобностью, зря... На будущей неделе постараюсь переделать эксперимент. Как раз нужно посмотреть, что с колонкой после метанола.
6. Просто так было бы логично, но это не точно. Как мне кажется, модификаторы должны выходить постепенно в течении длительного промежутка времени, то есть каким-то холмами или дрейфом базовой линии. А у меня что-то выходит отдельными симметричными пиками разной площади.

По поводу сорбции на капиллярах, посмотрю на поведение других методик на других колонках. Если там есть какой-то значимый эффект, обязательно что-то должно будет измениться.

По поводу стандартных значений, в фарме есть ОФС.1.2.1.2.0005.15 «Высокоэффективная жидкостная хроматография», там по крайней мере не указано. Обычно асимметрия есть в методиках в тестах "проверка пригодности системы", но конкретно в этой такого критерия нет, и видимо неспроста. Вообще, я в фарму с ГОСТов перешел, по сравнению с ГОСТами в фарме вообще никогда нигде ничего не указано, иногда даже бесит).
OldBrave
VIP Member
Ранг: 1254


29.08.2022 // 20:19:01     
Редактировано 1 раз(а)


Partos пишет:
...
3. Уменьшение pH проблему "хвостатости" не решает, становится даже хуже, как это ни странно. При pH 4,5 (по методике pH 6,8) уменьшается время удерживания обоих пиков (особенно "большого" пика дифосфорного эфира тиамина) и плюс оба пика размазываются до такой степени, что пик фосфотиамина начинает наползать на "большой" пик (скриншоты не делал, но по старым будет понятно, что имею в виду).
...
6. А вот от промывки метанолом с водой 60/40 эффект есть, грязь выходит уже на протяжении двух часов подряд...

Судя по результатам, мой совет снизить рН привел к закономерному ухудшению разделения, однако наметил перспективность обратного направления - повысить рН, на пример, до 7,5. Ваша колонка, судя по описанию производителя, вполне работает до рН 9 и даже 10.

  Ответов в этой теме: 14
  Страница: 1 2
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты