| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 >>>
|
 |
| Автор | Тема: Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 | ||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
 28.07.2020 // 11:48:37
Здравствуйте. Прошу помощи. Стоит задача внедрения методики определения лизина вэжх. За основу взяла ГОСТ 34230-2017 Хроматограф Agilent, колонка zorbax sb c18. Градиентного элюирования нет. Приготовила две фазы: фаза А ацетатный буфер ph7,2, фаза Б буфер-ацетонитрил-метанол. Для элюирования смешала фазы А/Б (30/70). Дериватизация ОРА как в ГОСТе Детектирование 266/305нм. Я не вижу пиков лизина. Подскажите, в чем может быть ошибка, пожалуйста. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
vmu Пользователь Ранг: 1383 |
28.07.2020 // 13:07:55
Определения лизина в чем? Внедрения методики или разработки методики? Если "за основу взяла", то, видимо, разработки. Дериватизация ОФА вручную, как в ГОСТ, а не в автосамплере хроматографа, воспроизводится очень плохо. ОФА-производные нестабильны, площади пиков будут плавать плюс-минус километр. Нужен точный контроль всех стадий дериватизации, что вручную сделать нереально. При плохом раскладе лизин может давать порядка пяти пиков ОФА-производных. |
||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
28.07.2020 // 13:39:58
К сожалению, у меня нет автосемплера. Воспроизвести не получается даже на чистом стандарте лизина. Подскажите, пожалуйста, как при ручном проведении дериватизации, получить стабильную производную. И увидеть пик.??? |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1383 |
28.07.2020 // 14:10:04
Редактировано 1 раз(а) Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов. Но по своему опыту скажу, что ручная дериватизация с ОФА - это не самая удачная затея. |
||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
28.07.2020 // 14:19:12
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно? |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1383 |
28.07.2020 // 14:22:16
Редактировано 1 раз(а) Нет, чем больше органики (т.е. Б), тем больше элюирующая сила. Но со 100 % Б я перестарался. 70 % Б должно хватать. Вопрос только во времени удерживания: 5 мин? 10 мин? 15 мин? А может, на 70 % Б он выходит в мертвом времени, и надо наоборот снизить элюирующую силу. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1383 |
28.07.2020 // 14:30:36
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами. |
||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
28.07.2020 // 14:40:48
Ничего себе! Спасибо огромное! Я ещё раз попробую и если не получиться, можно вам написать? |
||
|
AlteredCarbon Пользователь Ранг: 67 |
28.07.2020 // 20:48:38
по длинам волн странный выбор, вот например материал по производным: https:// |
||
|
vmu Пользователь Ранг: 1383 |
28.07.2020 // 21:19:15
Редактировано 2 раз(а) Да, длины волн из первого сообщения не под ОФА-производные, а под FMOC-производные (для пролина). В ГОСТ 34230-2017 и это перепутали. Вообще нужен ли топикстартеру флуориметрический детектор, неясно. Про объект анализа и определяемые концентрации лизина ТС ничего не сказала. Может ей и УФ-детектора на 338 нм хватит. |
||
|
Ссссвта Пользователь Ранг: 12 |
29.07.2020 // 8:32:56
По поводу объекта, у меня будет культуральная жидкость синтеза лизина. Ожидаемые концентрации 10г/л. Необходимо определять количественно. Пока у меня не получается со стандартом. Сегодня попробую на 338нм. И заменю длины волн на ФМД. Спасибо огромное, что откликнулись, впервые ставлю метод на ВЭЖХ, прибор новый. До этого только ГЖХ. Туплю... |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 25
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
