Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017 >>>

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»
[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Лизин вэжх ГОСТ 34230-2017
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12

 		28.07.2020 // 11:48:37     
Здравствуйте. Прошу помощи.
Стоит задача внедрения методики определения лизина вэжх.
За основу взяла ГОСТ 34230-2017
Хроматограф Agilent, колонка zorbax sb c18.
Градиентного элюирования нет. Приготовила две фазы: фаза А ацетатный буфер ph7,2, фаза Б буфер-ацетонитрил-метанол. Для элюирования смешала фазы А/Б (30/70).
Дериватизация ОРА как в ГОСТе
Детектирование 266/305нм.
Я не вижу пиков лизина.
Подскажите, в чем может быть ошибка, пожалуйста.
ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
vmu
Пользователь
Ранг: 1394
28.07.2020 // 13:07:55     
Определения лизина в чем?
Внедрения методики или разработки методики? Если "за основу взяла", то, видимо, разработки.
Дериватизация ОФА вручную, как в ГОСТ, а не в автосамплере хроматографа, воспроизводится очень плохо. ОФА-производные нестабильны, площади пиков будут плавать плюс-минус километр. Нужен точный контроль всех стадий дериватизации, что вручную сделать нереально. При плохом раскладе лизин может давать порядка пяти пиков ОФА-производных.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12
28.07.2020 // 13:39:58     
К сожалению, у меня нет автосемплера.
Воспроизвести не получается даже на чистом стандарте лизина.
Подскажите, пожалуйста, как при ручном проведении дериватизации, получить стабильную производную. И увидеть пик.???
vmu
Пользователь
Ранг: 1394
28.07.2020 // 14:10:04     
Редактировано 1 раз(а)

Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов. Но по своему опыту скажу, что ручная дериватизация с ОФА - это не самая удачная затея.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12
28.07.2020 // 14:19:12     
vmu пишет:
Вы не сделаете ОФА-производные стабильными. Можно только постараться добиться более-менее воспроизводимых площадей пиков при четком контроле процедуры дериватизации. То, что вы не видите пиков производных лизина, может быть элементарно связано, например, с тем, что элюирующей силы ПФ недостаточно. Попробуйте 100 % ПФ Б. Не забудьте сделать холостой раствор с дериватизацией, чтобы идентифицировать пики от реагентов.
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?
vmu
Пользователь
Ранг: 1394
28.07.2020 // 14:22:16     
Редактировано 1 раз(а)

Ссссвта пишет:
Я считала что увеличиваю элюирующую силу ПФ, добавляя большее количество буфера. Это неверно?
Нет, чем больше органики (т.е. Б), тем больше элюирующая сила. Но со 100 % Б я перестарался. 70 % Б должно хватать. Вопрос только во времени удерживания: 5 мин? 10 мин? 15 мин?
А может, на 70 % Б он выходит в мертвом времени, и надо наоборот снизить элюирующую силу.
Каталог ANCHEM.RU
 Администрация
Ранг: 246
Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» Испытательный центр ФГУ «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море»
Федеральное государственное учреждение «Балтийская дирекция по техническому обеспечению надзора на море» создано в соответствии с распоряжением Правительства Российской Федерации и осуществляет свою деятельность на территории Российской Федерации, во внутренних морских водах, территориальном море, в исключительной экономической зоне и на континентальном шельфе Российской Федерации.
vmu
Пользователь
Ранг: 1394
28.07.2020 // 14:30:36     
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12
28.07.2020 // 14:40:48     
vmu пишет:
В табл. 2 (программа градиента) в ГОСТ перепутали ПФ А и Б местами.
Ничего себе!
Спасибо огромное!
Я ещё раз попробую и если не получиться, можно вам написать?
AlteredCarbon
Пользователь
Ранг: 70
28.07.2020 // 20:48:38     
по длинам волн странный выбор, вот например материал по производным:
https://www.glsciences.com/technique/app/detail.php?data_number=LB088
vmu
Пользователь
Ранг: 1394
28.07.2020 // 21:19:15     
Редактировано 2 раз(а)

Да, длины волн из первого сообщения не под ОФА-производные, а под FMOC-производные (для пролина). В ГОСТ 34230-2017 и это перепутали.
Вообще нужен ли топикстартеру флуориметрический детектор, неясно. Про объект анализа и определяемые концентрации лизина ТС ничего не сказала. Может ей и УФ-детектора на 338 нм хватит.
Ссссвта
Пользователь
Ранг: 12
29.07.2020 // 8:32:56     
По поводу объекта, у меня будет культуральная жидкость синтеза лизина. Ожидаемые концентрации 10г/л. Необходимо определять количественно.
Пока у меня не получается со стандартом.
Сегодня попробую на 338нм.
И заменю длины волн на ФМД.
Спасибо огромное, что откликнулись, впервые ставлю метод на ВЭЖХ, прибор новый. До этого только ГЖХ. Туплю...

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему

ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»
Размещение рекламы / Контакты