Российский химико-аналитический портал | химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
|
ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
SEC: какими способами избавляются от ассоциатов? >>>
|
Автор | Тема: SEC: какими способами избавляются от ассоциатов? | |||||
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
23.07.2020 // 11:53:43
Коллеги, в той же теме SEC возник вопрос: если целевое вещество способно к образованию ассоциатов, то полученное значение молекулярной массы будет, конечно, завышено. Как избавиться от ассоциатов? Заранее благодарю откликнувшихся. |
|||||
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
vmu Пользователь Ранг: 1308 |
23.07.2020 // 23:13:53
Редактировано 1 раз(а) Например, используя растворитель, предотвращающий образование ассоциатов или разрушающий их, если их образование обратимо. Если уточните вопрос, то, возможно, получите более подробный ответ. Если говорить о белках, то, например, в лек. средствах белковой природы ассоциаты (белковые агрегаты, димеры, олигомеры) являются нежелательными примесями, содержание которых нормируется и контролируется. Тут, естественно, речь не об определении мол. массы, а просто об определении примесей методом эксклюзионной хроматографии. |
|||||
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
24.07.2020 // 8:08:04
Редактировано 2 раз(а) Большое спасибо! Ассоциат четко прослеживается, так как м.масса вдвое выше ожидаемой. И еще: в одинаковых условиях анализа наблюдается существенное различие (примерно в 2 раза) в значениях получаемых ММ в зависимости от того, каким стандартом проводили калибровку (узким или широким). Причем получаемая ММ ближе к значению ММ из сертификата в том случае, если калибровку проводили по узкому стандарту.С чем может быть связано такое существенное различие по получаемым ММ в зависимости от стандартов? И еще вопрос: появляется большой отрицательный пик при инжекции подвижной фазы. с чем это может быть связано? Благодарю заранее |
|||||
Valerа1234 Пользователь Ранг: 2884 |
24.07.2020 // 10:20:13
есть возможность снять зависимость ММ от концентрации мономера? измерить другим методом? пока только вискозиметрия или ещё какие? |
|||||
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
24.07.2020 // 11:22:38
Это метод ВЭЖХ, методика утверждена |
|||||
Valerа1234 Пользователь Ранг: 2884 |
24.07.2020 // 12:44:56
укажите, пожалуйста, АСТМ |
|||||
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
24.07.2020 // 14:08:41
Знаю, что будете возмущаться, но укажите, что Вы имеете ввиду |
|||||
Valerа1234 Пользователь Ранг: 2884 |
25.07.2020 // 1:19:12
я сразу понял, что в работе ЖХ, но хотелось бы уточнить, по какому нормативному документу работаете - лень даже искать - какие применяются укажИте - скачаю, надеюсь |
|||||
Avet Пользователь Ранг: 1086 |
25.07.2020 // 18:53:27
К сожалению, не могу, это внутренний нормативный документ предприятия. Конфиденциальность, сами понимаете. |
|||||
Valerа1234 Пользователь Ранг: 2884 |
26.07.2020 // 1:33:25
тогда вопросы не на форум, а к разработчикам секретной методики, сами понимаете |
|||||
AA_Alex Пользователь Ранг: 372 |
26.07.2020 // 18:42:48
Мол массу белков не определяют из калибровочной кривой, прописанной в мануале к колонке. То есть это конечно можно сделать, но при этом можно очень сильно ошибиться. У вас ведь белок не денатурированный, а нативный. И времена удерживания у двух разных белков с одинаковой мол массой, но разными динамическими радиусами (которые определяются третичной-четвертичной структурой белка) могут сильно отличаться. В качестве примера из практики. Два разных МкАТ (мол масса практически одинаковая 150 кДа) - у одного белка время удерживания димера практически совпадает с таковым мономера другого. Если у вас контроль содержания примеси агрегатов чистого (фармацевтического?) конкретного белка (значит он охарактеризован и известна его точная мол масса), то зачем вам калибровка колонки по мол массам? Насколько я помню из ГФ, просто по относительным площадям пиков мономера и агрегатов делается расчет и смотрят, не превышено ли то, что прописано в НД. И проверьте систему, при вколе ПФ не должно быть никаких значительных пиков на вкол. У вас инжектор или автосамплер? Если инжектор, может где-то воздух попадает? |
|
||
Ответов в этой теме: 31
|
|
ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
Размещение рекламы / Контакты |