Форумы ANCHEM.RU: Колонка после недельного простоя

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Колонка после недельного простоя - что с ней происходит? >>>

  Ответов в этой теме: 69
  Страница: 1 2 3 4 5 6 7
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

18.10.2019 // 19:39:52

Редактировано 2 раз(а)

Ясно-понятно, при 15% ацетонитрила 0,2 мл/мин и 30С на этой колонке должно быть 82 бара. Плюс предколонка, плюс капилляры самой системы.

ispso.unige.ch/labs/fanal/hplc_calculator:en

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

18.10.2019 // 19:41:00

Редактировано 4 раз(а)

voodensky пишет:
предколонка С-18

Это не ответ.
Ответ выглядел бы как держатель 820999-901 + картриджи 821125-926 (12,5 мм, 2,1 мм, 5 мкм). И это картриджи С8.
Или у вас 820555-901 + 975700-932 (15 мм, 2,1 мм, 3,5 мкм)? Они С18. 115 мм такой составной колонки дадут противодавление в 95 бар.

ukvukv
Пользователь
Ранг: 134

18.10.2019 // 23:15:35

SergeyK пишет:
ispso.unige.ch/labs/fanal/hplc_calculator en

Простите за вульгарность, но офигеть!!! Как всё просто о сложном, без лишних слов и обосновано. Премного благодарен!

ukvukv
Пользователь
Ранг: 134

18.10.2019 // 23:18:50

SergeyK пишет:
предколонка С-18 Это не ответ.

Чуть позже разберу и уточню.

SergeyK
Пользователь
Ранг: 2168

18.10.2019 // 23:52:48

Редактировано 1 раз(а)

Пока пики не двоятся, абсолютное значение противодавления не важно. В рамках разумного для вашего насоса и колонки. Важна динамика в том же режиме при проведении анализов. Если оно растёт, это плохой знак. Если растёт без проведения анализов на чистой ПФ - это очень плохой знак.
У меня на 1290 с капиллярами 0.12 мм 45 бар без колонки на 0.5 мл/мин воды. Сама эта цифра ни о чём не говорит.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Журнал Санитарно-эпидемиологический собеседник
На страницах журнала публикуются новые нормативные документы, специалисты отвечают на актуальные вопросы, с которыми так или иначе связана ваша деятельность, рассказывают обо всех изменениях в законодательстве, дают комментарии к новым документам (СанПиН, СП, МУК, МР).

vmu
Пользователь
Ранг: 1235

19.10.2019 // 1:32:02

По файлам.
По скриншотам имеем четырехканальный насос (градиент низкого давления). Для Agilent 1200 Quaternary Pump, например, объем задержки градиента по мануалу составляет около 1 мл, т.е. около 5 мин от точки смешения до выхода из насоса на 0.2 мл/мин. Через автосамплер до колонки в зависимости от объема капилляров самплера ПФ может идти еще несколько минут. На картинке с промывкой начальной ПФ базовая линия продолжает дрейфовать до самого конца картинки.
На первой хроматограмме (ацетонитрил) в начале базовая линия тоже ползет вниз.
На хроматограмме стандартного раствора пик имеется (около 10 мин). Разметьте его, удостоверьтесь по площади, что это CBZ.
На хроматограммме первого ввода контрольного раствора, по-видимому, CBZ тоже пристуствует (горбатый пик на 10 мин). Разметьте его, проверьте, близка ли его площадь к правильной для CBZ.

Короче, на насыщение колонки CBZ не похоже. Вероятно, не хватает времени для нормального уравновешивания. Можно и при запуске дольше качать, и в конце хроматограммы переуравновешивать подольше. Вы пользуетесь функцией PostTime для переуравновешивания, поэтому эти 10 мин не прописаны на хроматограммах, и толком не видно, как ведет себя базовая линия в эти 10 мин. Можно убрать PostTime, а стадию перемывки на начальный состав ПФ прописать в конце градиента. Это лишь слегка увеличит размер файла хроматограммы. Мне так удобнее.

Смысла качать ацетонитрил до ровной базовой линии в начале работы никакого. Лучше откройте промывочный кран насоса, промойте его 5 мин на 5 мл/мин начальной ПФ (15 % ACN), закройте кран, включите на 0.2 мл/мин, да уравновешивайте колонку сразу этой начальной ПФ до стабильной базовой линии.

Несмотря на неполное уравновешивание, через несколько циклов (хроматограмм), вероятно, ваша система выходит на некий стационарный режим, который позволяет получать воспроизводимые хроматограммы. Но если, например, заколоть 5 раз подряд контрольный раствор как обычно, получая одинаковые хроматограммы, а после 6 вкола поставить PostTime не 10 мин, а 20 мин, то на 7-м заколе хроматограмма, возможно, "уедет"...

В общем работать можно, просто зная, что системе нужно несколько циклов для выхода на стабильную работу. Но при некоторых изменениях в последовательности заколов (вроде увеличенного PostTime) или при переносе методики на соседний прибор могут возникнуть проблемы.

Порекомендую еще скорректировать параметры автоматической разметки пика на хроматограмме, уменьшив значение Peak width и/или увеличив значение Slope sensitivity. Сейчас на хроматограмме контрольного раствора пик CBZ из-за неправильных настроек размечен примерно от 11.5 мин, хотя начинается пик на 12.0 мин.

ukvukv
Пользователь
Ранг: 134

20.10.2019 // 23:35:52

vmu пишет:
...Смысла качать ацетонитрил до ровной базовой линии в начале работы никакого. Лучше откройте промывочный кран насоса, промойте его 5 мин на 5 мл/мин начальной ПФ (15 % ACN), закройте кран, включите на 0.2 мл/мин, да уравновешивайте колонку сразу этой начальной ПФ до стабильной базовой линии.

Премного благодарен, что находите время для моего вопроса. Работаю над рекомендациями. Открыть промывочный кран не всегда получается, работаю через удалёнку. Но обязательно попробую.

ukvukv
Пользователь
Ранг: 134

22.10.2019 // 18:20:11

vmu пишет:
По файлам.
На хроматограммме первого ввода контрольного раствора...

VMU, доброго Вам!
Если у Вас ещё будет возможность (время) взглянуть на хроматограммы сывороточного контроля, это третий и четвёртый заколы, то хотел бы обратить Ваше внимание на первый большой пик. Пик на двух хроматограммах примерно одинаковой интенсивности, а вот следующий за ним CBZ уже ведёт себя по разному в двух заколах. Кстати, этого пика нет на стандартном растворе CBZ в МеОН, т.е. это нечто идёт из сыворотки. И этот начальный пик прослеживается во всех сывороточных пробах разной интенсивности. Обратил внимание, что у фамилий заканчивающих на -аян, -баев и подобные (южане) этот пик гораздо больше.
Что это может быть? Что-то стандартное для всех сывороток (креатинин, мочевина, глюкоза, холестерин, триглицериды и т.д., а может остатки белка)? Мне сдаётся, что это нечто и является моим вопросом.

vmu
Пользователь
Ранг: 1235

22.10.2019 // 20:02:02

ukvukv, запустите прибор, начните серию вводов проб с вводов стандартного раствора. Заколите его несколько раз, пока не получите хотя бы 2 (а лучше 3-5) одинаковые последовательные хроматограммы, т.е. хроматограммы с RSD времени удерживания и площади пика CBZ не более, скажем, 2 %. После этого несколько раз введите контрольный раствор. Если все хроматограммы контрольного раствора, начиная с первой, будут одинаковыми по параметрам пика CBZ, то "нечто" - не является вопросом.

Ясное дело, что в таком сложном образце, как раствор, полученный из сыворотки с минимальной пробоподготовкой, содержится куча органики, в т.ч. довольно полярной низкомолекулярной (и, возможно, какое-то количество высокомолекулярной), которая будет плохо удерживаться на колонке C18 и будет поглощать излучение при 230 нм (глюкоза, если что, не поглощает на 230 нм), давая пик(и) в начале хроматограммы.


Ответов в этой теме: 69 Страница: 1 2 3 4 5 6 7 «« назад \|\| далее »»	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты