Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ВЭЖХ: проблема миграции пика одного из аналитов >>>

  Ответов в этой теме: 36
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Волгин
VIP Member
Ранг: 1303


03.02.2017 // 23:16:00     
Редактировано 1 раз(а)

2 Avet. Не знаю конкретных условий анализа, но подозреваю, что процент ацетонитрила весьма невелик. Не берусь утверждать, но предполагаю, что примесь, меняющая селективность колонки может быть нерастворимой в чистом ацетонитриле. Поэтому некоторое количество воды (30-50%) все же должно присутствовать. Сам я в качестве достаточно универсального отмывающего элюента как правило использую сначала изопропанол, после него 0.5% TFA в 60%-ном ACN, при этом отслеживаю нулевую линию при 254нм до горизонтальной. Иногда приходится это повторять. Правда, эту операцию я провожу с препаративными колонками, аналитическими сейчас не в этом плане не занимаюсь, раньше просто отмывал изопропанолом.
По поводу предколонки. Как Вы представляете себе процесс загрязнения колонки? "Загрязнитель" садится сначала на начальный слой колонки, насыщает его (при данных конкретных условиях) после чего начинает ползти по ней. С увеличением длины загрязненного слоя у вас все сильнее меняется селективность. Так вот, предколонка при условии, что в ней тот же сорбент, играет роль начального участка колонки, на который и садится "загрязнитель", и Ваша задача - найти момент, когда "загрязнитель" максимально насытит предколонку, но еще не "переползет" в основную колонку. И в этот момент предколонку заменить.
Кстати. Используя предколонку, Вы можете определить, откуда у вас "загрязнитель". Поставив её перед инжектором. Но предварительно надо понять, на сколько её должно хватить.
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Волгин
VIP Member
Ранг: 1303


03.02.2017 // 23:22:42     
Редактировано 1 раз(а)

2 SergeyK. Предполагаю, что именно так. Но если Вы найдете веские контраргументы, то спорить не буду. Я, видите ли, не теоретик.
Волгин
VIP Member
Ранг: 1303


03.02.2017 // 23:28:33     
2 абр. Я пишу, как правило, "ввод". Вы можете писать так, как Вам больше нравится, при условии, что уверены в том, что Вас поймут. Но "инъекция" - скорее из медицины.
virtu
VIP Member
Ранг: 2130


04.02.2017 // 0:23:23     
Редактировано 4 раз(а)

Проблема явно в элюенте, если, конечно, проблемный пик дрейфует при вколе стандартов (без матрицы). А "слабое звено" в нём - ТЭА.

Надо просто взять новый (свежий) ТЭА, как уже писал на первой странице. Плюс надо проверить все остальные компоненты элюента, а так же его приготовление (pH в особенности; проверить pH-метр).

Все колонки, юзанные с просроченным ТЭА, нужно вывести из оборота и пробовать регенерировать (рецепт Волгина, например, хотя я б заменил ИПС на метанол ).

Предколонка здесь не поможет. Совсем.



Если дрейф есть только на реальных пробах (т.е. присутствует матрица), то дело в компонентах матрицы, сорбирующихся на сорбенте колонки. Лекарством здесь является предколонка и подходящая методика регенерация колонки после итого количества инжекций проб образцов. Изократ тем и плох...
Avet
Пользователь
Ранг: 1045


04.02.2017 // 0:29:33     

SergeyK пишет:

Волгин пишет:

Avet пишет:
... около сотни инжекций - все в порядке, а потом пик первого аналита начинает двигаться ...
Так что ж Вы этого сразу не написали!!! У Вас какой-то компонент пробы садится на колонку и модифицирует ее, что приводит к изменению времени удерживания. Причем компонент анионного характера, поскольку время удерживания сульфометоксазола не меняется. То есть на обращенно-фазный механизм удерживания триметоприма у Вас накладывается ионообменный.
И поскольку "около сотни инжекций - все в порядке", то после, скажем, 50-го ввода отмывайте колонку - и будет Вам "щастье"
Чем отмывать - другой вопрос, начните просто с более сильного элюента, но может быть придется менять систему более кардинально.
Или предколонку поставьте и меняйте почаще.

Можно еще разок, для тех, кто в танке, как я:
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/sulfamethoxazole#section=Dissociation-Constants
pKa1 = 1,6; pKa2 = 5,7
Это сульфаметаксозол - и он стоит на месте.
А триметоприм с pKa=7,12 ползет при pH=5,9 в сторону увеличения времени удерживания? При этом в растворе болтается макроколичество триэтиламмоний катиона, некоторое количество ацетат аниона и уксусной кислоты
https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov/compound/trimethoprim#section=Dissociation-Constants
Всё верно?


Конечно, все понятно, большое спасибо!
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Водонепроницаемый ОВП метр UP-9821V Водонепроницаемый ОВП метр UP-9821V
Карманный тестер для измерения ОВП оптимален для полевых измерений, но также может использоваться в лаборатории. ОВП: ± 1999 mV Точность: ± 1mV
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
kvot
Пользователь
Ранг: 165


04.02.2017 // 1:03:34     

Avet пишет:

Изократика, компоненты смешиваются оператором в одной емкости, колонка x-Bridge 250x4.6, 5мкм, прибор Waters e2695.
При таких условиях проблема точно не в насосе, но с этим вы уже разобрались. У нас была на одном из приборов ситуация с постепенной миграцией пиков, но это проявлялась на градиентах, особенно с ПФ с ТЕА и связано это было с неисправностью камеры смешения в области низкого давления. Но с это не ваш случай.
Триэтиламин в при хранении "осмоляется", даже фармакопеии рекомендуют его использовать либо свежевскрытый, либо свежеперегнаный. Перегоняют обычно над щелочь и в кубовом остатке на щелочи очень хорошо видно желтый смолянистый налет. Но это будет влиять на общую работу системы, обычно этой "смолой" забиваются вкладыши клапанов насоса и они начинают "залипать", может забиваться колонка, это должно проявляться ростом обратного давления и также это будет влиять на общую хроматографичекую картину.
Что касается методики, она, по всей видимости, из USP. Методика действительно очень старая и крайне странная. SergeyK задал совершенно правильные вопросы. Кроме всего прочего, мне сам раствор ТЕА с уксусной кислотой не нравиться. Может вы уже писали, но измеряли ли вы рН ПФ через 100 инжекций? Следующее, USP рекомендует для этого анализа колонку MicroBondapak C18, древний сорбент от Waters, где использование TEA еще как-то обосновано, вы берете x-Bridge, которую ну никак нельзя назвать ее аналогом.

  Ответов в этой теме: 36
  Страница: 1 2 3 4
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты