| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение консервантов. Буферный раствор. >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение консервантов. Буферный раствор. | ||
|
vas20 Пользователь Ранг: 28 |
 24.10.2016 // 1:00:24
Добрый вечер уважаемые пользователи и специалисты по ВЭЖХ. Мы пытаемся разделить бензойную и сорбиновую кислоту на жидкостном хроматографе укомплектованный спектрофотометрическим детектором. Методически мы вроде все делали правильно, но у нас не происходит разделения. Одну из причин мы видим в "плохих" компонентах из которых приготовлен ацетатный буфер ( воды, ацетата натрия, уксусной кислоты). При использовании в качестве подвижной фазы ( ацетонитрил вода) сорбиновая кислота с сильно размытым пиком выходит при 260 нм, а бензойная при 245 нм ( при 280 она не выходит). Но когда мы в качестве элюента используем ацетатный буфер то появляется бог знает что (бугор с пиками). Есть ли у вас рекомендации, как проверить буфер на пригодность на ВЭЖХ , должен ли он быть спектрально чистый? Какая граница Уф поглощения? Что можно сделать с ацетатом натрия и уксусной кислотой? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
25.10.2016 // 0:30:01
1. pH элюента должно быть не больше 4. Ацетатный буфер приготовьте новый с контролем pH. 2. Детектировать можно на 230 нм. |
||
|
vas20 Пользователь Ранг: 28 |
25.10.2016 // 22:02:46
Редактировано 2 раз(а)
Мы готовим буфер по методике с pH=4,3 c контролем pH, пробывали детектировать при двух длинах волн одну из которых ставили 235, не помогло. Вы предлагаете понизить pH, и сделать его ниже 4? Теоретически при этом две кислоты точно перейдут в молекулярную форму, но я нигде в примерах не встречал, где используется такой pH для разделения этих кислот.... |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3126 |
25.10.2016 // 22:49:04
Как раз таки чаще используется фосфатный буфер с рН 2,4. ГОСТы искать лень, тем более что сейчас старые издаются под новыми номерами. А если вы используете обращенно-фазовую Вэжх то кислоты и должны быть в молекулярной форме. |
||
|
абр Пользователь Ранг: 904 |
26.10.2016 // 8:44:17
По ГОСТ 52052-2003 рН 4,2-4,3 ;( |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3126 |
26.10.2016 // 13:24:14
По ГОСТ Р 53595-2009 рН 2,4 )) |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
абр Пользователь Ранг: 904 |
26.10.2016 // 18:36:37
Редактировано 1 раз(а) . |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2134 |
27.10.2016 // 11:07:48
Да, и нормально приготовить буфер. В принципе, и 4.2 - 4.3 хватает, но впритык, поэтому, если у Вас кривой pH метр или он криво откалиброван, то можно улететь не туда. Проще загнать рH в диапазон 2 - 4 (по бумажке). Сто лет назад разрабатывал методику для этих консервантов и тоже использовал ацетатный буфер - проблем никаких не было, всё работало идеально. Да, и сэмпл обязательно нужно растворять в элюенте. |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3126 |
27.10.2016 // 11:32:09
Редактировано 1 раз(а) Когда-то давно сталкивался с такой проблемой гост 52052 не работал. Заменил буфер на фосфатный из майонезного госта и всё пошло как по маслу. И экстракцию делал элюентом на этом же буфере. Хотя для интереса пробовал экстрагировать и дист водой. Разницы не было, ибо консерванты используются в виде солей, а они хорошо растворимы в воде (в отличие от кислот). |
||
|
4ern Пользователь Ранг: 63 |
31.10.2016 // 16:21:09
Делаем по Люмексовской методе, там буфер вообще рн 4,9 и все прекрасно делится. Колонка 150*2,1 мм, ПФ буфер/ацетонитрил - 93/7. Буфер уксусная кислота и NaOH. Если надо могу скинуть фото методики, пишите на почту 4ern"собачка"inbox.ru. |
||
|
Garry VIP Member Ранг: 1076 |
01.11.2016 // 11:30:37
Добрый день, коллеги! Этот вопрос с сорбиновой и бензойной кислотой "больной" для многих лабораторий. И связан он по моему убеждению с некоей не очень ответственной универсализацией методики. Обычно кроме сорбиновой и бензойной в образцах имеются подсластители, кофеин и др. Вот и цель у приведенных методик ... и "птичку съесть и на х** сесть"  . Т.е. сделать в одном образце и кофеин и аспартам и "товарисчей"-консервантов. Меняя рН в сторону 2.4 можно отлично разделить кислоты, превратив их в молекулярную форму, но при этом сильно увеличив время анализа , а кофеин при этом вылетает почти на старте. Соответственно .... мы не разделим подсластители. Указанное рН , точно соблюдаемое в виде 4.2 - 4.3 призвано универсализовать методику. НО..... тут возникают бока. Во-первых, ВЫ должны быть уверены в показаниях рН-метра. Любой шаг влево-вправо уже нарушает "картину" разделения.... как показывает практика нарушается разделение групп сорбиновая/бензойная или аспартам/ацесульфам/сахарин. Когда разрабатывалась данная методика..... то авторы не учли момент различий в колонках с одинаковой, казалось бы насадкой С18. Т.е. в одних и тех же условиях разделение критичных пар в этой методике будет несколько отличаться. У меня был такой казус из фармацевтического прошлого с метаболитами тиамина гидрохлорида (или пиридоксина .... в общем не помню сейчас ...). Я разработал методику для имеющихся в моем распоряжении Ватерсовских колонок с NovaPack C18. На них все делилось отлично. В фармкомитете имелись иные колонки типа Нуклеосила С18. У них не делились эти метаболиты как надо, хоть тресни. Пришлось приезжать со своими колонками, показывать, что все Ок. В результате пришлось "допиливать напильником" под более доступные и расшаренные колонки. По идее, наверное необходимо выполнять тест пригодности хроматографической системы для выполнения методики определения консервантов, кофеина и подсластителей "в одной упаковке", как это делают в фармацевтике. Если не получается, и нет альтернативы в подборе колонки... то на мой взгляд для получения достоверных результатов лучше разбить задачу на две составляющие (1. для разделения подсластителей и кофеина, 2. для разделения сорбиновой и бензойной кислот.).... Либо рассмотреть возможность применения ион-парной методологии. В любом случае воспроизвести ГОСТ не представляется возможным из-за заложенных в нем "подводных камней". |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
