Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение примесей в субстанции (ТСХ) >>>

  Ответов в этой теме: 4

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение примесей в субстанции (ТСХ)
Виктория Ан
Пользователь
Ранг: 70

31.05.2016 // 12:15:10     
Доброго времени суток!
Уважаемые коллеги! Пытаемся воспроизвести методику определения примесей в Фенибуте, любезно предоставленную производителем. Метод ТСХ. Если "кратко":
Испытуемый р-р: 0,5 г фенибута в 10 мл этанола.
Р-р сравнения: 0,1 г СО фенибута в 10 мл этанола, потом разбавление (0,5 мл р-ра доводят до 50 мл этанолом)
Подвижная фаза: хлороформ - н-бутанол - раствор аммиака концентрированный (40: 60: 5).
Приготовление раствора о-толидина:
0,16 г о-толидина растворяют в 30,0 мл уксусной кислоты ледяной, добавляют 1,0 г калия йодида и доводят водой до объема 500,0 мл.
 Подготовка хроматографической камеры (1)
Стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой. Подвижную фазу наливают в камеру в количестве, достаточном для того, чтобы после смачивания фильтровальной бумаги покрыть дно камеры слоем жидкости, необходимым для хроматографирования. Для насыщения хроматографическую камеру с подвижной фазой закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 ч при тем-пературы от 20 ᴼС до 25 ᴼС.
 Подготовка хроматографической камеры (2)
На дно камеры помещают бюкс со смесью 1 г калия перманганата и 10 мл соляной кислоты разведенной и насыщают камеру в течение 15 мин.
 Подготовка ТСХ пластинок со слоем силикагеля.
Перед использованием пластинки активируют с помощью нагрева в тер-мостате при температуре 120 ᴼС в течение 20 мин.

На линию старта предварительно подготовленной хроматографической пластинки Кизельгель 60 F254, размером (5х15) см с толщиной слоя 0,2 мм отдельно наносят 5 мкл испытуемого раствора и 2,5 мкл раствора сравнения.
После испарения растворителей из нанесенных проб пластинку помещают в подготовленную хроматографическую камеру (1) как можно более вертикально, наблюдая за тем, чтобы пятна или полосы находились выше поверхности подвижной фазы. Камеру закрывают, оставляют ее при температуре от 20 ᴼС до 25 ᴼС в защищенном от прямых солнечных лучей месте. Пластинку вынимают после того, как подвижная фаза пройдет 10 см от линии старта. Пластинку высушивают на воздухе до исчезновения запаха аммиака, помещают в хроматографическую камеру (2), которая насыщена хлором, и выдерживают в течение 5 мин, после чего выдерживают в сушильном шкафу в течение 3 мин при температуре от 100 ° С до 105 ° С до выветривания избытка хлора. Высушенную пластинку опрыскивают раствором о-толидина.
На хроматограмме испытуемого раствора, кроме пятна желтого цвета на линии старта (фенибут), может оказаться пятно с Rf около 0,75, что соответствует примеси 4-фенилпирролидона-2, площадь которого не должна превышать площадь пятна на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%).
Проверка пригодности хроматографической системы:
хроматографическая система считается пригодной, если хроматограмме раствора сравнения четко видн0 пятно.

ПРОБЛЕМА: пятно стандарта и субстанции не видно!
Может кто сталкивался с проблемой? Что делаем не так?
П.С. Производитель не ответил...

Если кто-то сможет поделиться нормальной рабочей методикой определения примесей в субстанции (фенибут) буду очень признательна!
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
svetlana1985
Пользователь
Ранг: 9


31.05.2016 // 12:50:00     

Виктория Ан пишет:
Доброго времени суток!
Уважаемые коллеги! Пытаемся воспроизвести методику определения примесей в Фенибуте, любезно предоставленную производителем. Метод ТСХ. Если "кратко":
Испытуемый р-р: 0,5 г фенибута в 10 мл этанола.
Р-р сравнения: 0,1 г СО фенибута в 10 мл этанола, потом разбавление (0,5 мл р-ра доводят до 50 мл этанолом)
Подвижная фаза: хлороформ - н-бутанол - раствор аммиака концентрированный (40: 60: 5).
Приготовление раствора о-толидина:
0,16 г о-толидина растворяют в 30,0 мл уксусной кислоты ледяной, добавляют 1,0 г калия йодида и доводят водой до объема 500,0 мл.
 Подготовка хроматографической камеры (1)
Стенки хроматографической камеры выстилают фильтровальной бумагой. Подвижную фазу наливают в камеру в количестве, достаточном для того, чтобы после смачивания фильтровальной бумаги покрыть дно камеры слоем жидкости, необходимым для хроматографирования. Для насыщения хроматографическую камеру с подвижной фазой закрывают крышкой и выдерживают в течение 1 ч при тем-пературы от 20 ᴼС до 25 ᴼС.
 Подготовка хроматографической камеры (2)
На дно камеры помещают бюкс со смесью 1 г калия перманганата и 10 мл соляной кислоты разведенной и насыщают камеру в течение 15 мин.
 Подготовка ТСХ пластинок со слоем силикагеля.
Перед использованием пластинки активируют с помощью нагрева в тер-мостате при температуре 120 ᴼС в течение 20 мин.

На линию старта предварительно подготовленной хроматографической пластинки Кизельгель 60 F254, размером (5х15) см с толщиной слоя 0,2 мм отдельно наносят 5 мкл испытуемого раствора и 2,5 мкл раствора сравнения.
После испарения растворителей из нанесенных проб пластинку помещают в подготовленную хроматографическую камеру (1) как можно более вертикально, наблюдая за тем, чтобы пятна или полосы находились выше поверхности подвижной фазы. Камеру закрывают, оставляют ее при температуре от 20 ᴼС до 25 ᴼС в защищенном от прямых солнечных лучей месте. Пластинку вынимают после того, как подвижная фаза пройдет 10 см от линии старта. Пластинку высушивают на воздухе до исчезновения запаха аммиака, помещают в хроматографическую камеру (2), которая насыщена хлором, и выдерживают в течение 5 мин, после чего выдерживают в сушильном шкафу в течение 3 мин при температуре от 100 ° С до 105 ° С до выветривания избытка хлора. Высушенную пластинку опрыскивают раствором о-толидина.
На хроматограмме испытуемого раствора, кроме пятна желтого цвета на линии старта (фенибут), может оказаться пятно с Rf около 0,75, что соответствует примеси 4-фенилпирролидона-2, площадь которого не должна превышать площадь пятна на хроматограмме раствора сравнения (не более 0,1%).
Проверка пригодности хроматографической системы:
хроматографическая система считается пригодной, если хроматограмме раствора сравнения четко видн0 пятно.

ПРОБЛЕМА: пятно стандарта и субстанции не видно!
Может кто сталкивался с проблемой? Что делаем не так?
П.С. Производитель не ответил...

Если кто-то сможет поделиться нормальной рабочей методикой определения примесей в субстанции (фенибут) буду очень признательна!

Здравствуйте! У нас фенибут (субстанцию) анализируют таким же способом. Может дело в пластинке или с элюентом что-то не так? В этой методике много зависит от элюента.
Виктория Ан
Пользователь
Ранг: 70


31.05.2016 // 13:15:14     
Редактировано 1 раз(а)

Здравствуйте! У нас фенибут (субстанцию) анализируют таким же способом. Может дело в пластинке или с элюентом что-то не так? В этой методике много зависит от элюента.

А можно поподробнее? Как именно Вы готовите подвижную фазу? У Вас пятно субстанции на линии старта проявляется?
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


31.05.2016 // 13:50:56     
Редактировано 2 раз(а)

Такая методология выполнения ТСХ - это "танцы с бубном". Во-первых, не нужно выстилать камеру фильтровалкой. Достаточно просто насытить камеру парами подвижной фазы в течение 1 часа. Состав ПФ тут не причем. Сложность выполнения заключается в процедуре визуализации пятен. Это связано с тем, что данные соединения не поглощают УФ (поэтому нецелесообразно использовать пластинки с УФ254 индикатором)... и нет специфических проявителей для визуализации. Поэтому в методологии задействован один из методов неспецифического проявления. В частности выполняется хлорирование для введения в структуру анализируемых соединений атомов хлора. Для визуализации хлорированных веществ используют циклические замещенные амины типа о-толидина или бензидина. НО!!! В чистом виде растворы этих соединений малоэффективны, поскольку требуются еще дополнительные "мансы" с жестким УФ облучением обработанных ТСХ. Поэтому для проявления о-толидином используют его раствор в виде ацетата с добавлением 1-2 % йодида калия. Тогда этот раствор визуализирует хлорсодержащие соединения в широкой цветовой гамме от желтого до темно-фиолетового. При выполнении процедуры хлорирования тоже имеется много ньюансов :
1. ТСХ пластинка должна быть либо на стекле или фольге. Лавсановая основа не годится!
2. Байндер (связующее) сорбента должен быть минерального происхождения. Т.е. крахмал или полиакрилаты не пригодны. Об этом мало кто задумывается, но... многолетний опыт подобного вида визуализации пятен на ТСХ говорит, что..... как это не парадоксально лучше всего для этих целей подходит обыкновенный Сорбфил с его кремниевой кислотой (силиказолем) в качестве байндера. Увы...
3. Хлорирующая смесь должна находиться в камере не более 15 минут. Т.е. свежеприготовленная, ну и соответственно она не наливается как ПФ, а содержится в маленькой фарфоровой чашке. Поэтому из опыта хлорировать лучше в эксикаторе, на дно которого помещают фарфоровую чашку со смесью 10% солянки и 1,5 % перманганата калия , затем перфорированную керамическую пластину, а уж на пластину лучше под углом к чашке с хлорирующим раствором сорбентом вниз. Ну на какую-нибудь опору, типа стеклянной пробки, упирают верхний край ТСХ пластинки, но "лицом" вниз.
4. Выдерживать в камере долго НЕЛЬЗЯ! Не более 5-8 минут. Иначе тоже рискуете не обнаружить ничего на ТСХ.
5. После вытаскивания из хлорной камеры ТСХ она должна "пахнуть" хлором примерно с минуту. Перед опрыскиванием пластинки о-толидином пластинку проветривают до полного удаления запаха хлора. Можно феном, только не горячим!
6. Обратите внимание чем Вы обрабатываете пластинку ! о-толидин - это не одно и то же что о-толуидин! Просто у меня была знакомая.... которой все эти названия один Х.р. Обратите на этот факт внимание!
7. Проявлять можно как опрыскиванием так и окунанием в проявитель. Если знаете, есть растворы для ТСХ for spraying (для опрыскивания) и for dipping (для смачивания). За неимением мелкодисперсного пульверизатора я применял второй метод, наливая проявитель в поликарбонатную кювету (типа емкости для завтраков), придерживая пластинку пинцетом окунал подобно проявлению в фотографии. Если предпочитаете опрыскивание, то улучшить показатели размера капель из стандартного стеклянного пульверизатора, то лучше всего вместо груши использовать сжатый воздух из лабораторного компрессора типа УК-25 (или другого). Но это так просто пожелание.
Удачи!

Да, чуть не забыл. о-толидин один из сильнейших канцерогенов! Поэтому будьте внимательны и аккуратны при его применении.

Да, кстати, данная ТСХ мне напоминает анализ Пирацетама. При ВЭЖХ он как амид, очень плохо удерживается... тоже ноотроп, плохо поглощает УФ. В ВЭЖХ его-то научились детектировать при 210-220 нм и практически водном элюенте. Если мне не изменяет память, то примеси, в пирацетаме могут "пересекаться" с основной примесью в фенибуте. Самая легко детектируемая - это оксопирролидинилуксусная кислота. Но это уже, скажем так продукт разложения пирацетама, а вот полупродукты его синтеза очень могут соответствовать искомому в фенибуте. Посмотрите пирацетам в ВР или ЕР. Методика для пирацетама вполне подойдет и для фенибута.
Виктория Ан
Пользователь
Ранг: 70


31.05.2016 // 17:57:06     
Редактировано 1 раз(а)


Garry пишет:
Такая методология выполнения ТСХ - это "танцы с бубном"...
Удачи!


Даже не знаю, как Вас благодарить!
Вы меня выручаете в который раз! СПАСИБО ОГРОМНОЕ ЧЕЛОВЕЧЕСКОЕ!

  Ответов в этой теме: 4

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты