Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 



ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Денситометрический метод измерения каротиноидов по ТСХ >>>

  Ответов в этой теме: 23
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Денситометрический метод измерения каротиноидов по ТСХ
Александра
Пользователь
Ранг: 1

27.12.2015 // 10:47:09     
Кто знает, как работает программа «СОРБФИЛ», считающая количество каротиноидов по ТСХ? Каким образом считывается интенсивность окраски полосы? Если расчет ведется по калибровочной кривой, то какие значения коэффициента экстинкции?

Вообще, кто знаком с этим методом в количественном измерении каротиноидов по ТСХ?
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Botrytis
Пользователь
Ранг: 181


27.12.2015 // 13:51:35     
Вообще, каротиноиды разные есть: собственно каротин и ксантофиллы(больше всего лютеин встречается). У вас чего? И вещество стандарт с известной концентрацией есть? Если есть, то можно денситометром сорбфиловским работать, там есть такая функция. Если нет, то как минимум КФК-3 нужен и затем по формулам расчет вести.
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


27.12.2015 // 17:21:46     

Александра пишет:
Кто знает, как работает программа «СОРБФИЛ», считающая количество каротиноидов по ТСХ? Каким образом считывается интенсивность окраски полосы? Если расчет ведется по калибровочной кривой, то какие значения коэффициента экстинкции?

Вообще, кто знаком с этим методом в количественном измерении каротиноидов по ТСХ?

Принцип оценки содержания вещества в пятне методом КТСХ (количественной ТСХ) в различных программах может отличаться. Ну... т.е. алгоритмы могут быть разные. Но наиболее часто используемый - это алгоритм криволинейного интегрирования яркости пятна в пределах заданного трека относительно фонового значения. Это детали программистов, решающих задачу количественной оценки. А вот что касается использования подобного ПО конечным пользователем, т.е. Вами, то все выглядит гораздо проще. Рядом с пятном пробы наносят одну-две-три концентрации анализируемых веществ, на основании анализа которых ПО строит некую градуировочную зависимость. Используя эту зависимость программа оценивает содержание вещества в исследуемой пробе. Т.е. фактически оценка осуществляется согласно градуировки. Единственно, нужно помнить, что в проявительной ТСХ (без флуоресценции) линейный диапазон анализируемых концентраций весьма мал (в пределах 0,5-9 мкг в пятне). Этот диапазон зависит от веществ и методов визуализации, но как правило от закона Кубелки-Мунка никуда не уйти. Т.е. если Вы хотите анализировать растворы с большим содержанием, которые при нанесении на ТСХ будут давать пятна с нанесенным количеством вещества больше 10 мкг, то Вы не увидите особой разницы в оценке содержания исследуемого вещества, ибо .... см. закон Кубелки... и его сотоварища. .
Когда говорят о ТСХ, то ни о какой экстинции речь не идет, ибо понятие оптической плотности имеет значение только при измерении на пропускание, а не на отражение. Фактически в ТСХ может идти речь о измерении коэффициента отражения.
Alex75
Пользователь
Ранг: 452


28.12.2015 // 8:09:10     
Есть получше продукт - ТСХ-менеджер; многоуважаемый Garry является автором и в свое время всех желающих им обеспечил; ключевая позиция в Вашем случае - добиться эффективного разделения, понять в какой зоне какие вещества (бета-каротин, зеаксантин, лютеолин и т.д.) и раздобыть СО вышеуказанных соединений (или хотя бы их "самоделкинский" вариант).
Мы успешно решаем задачи полколичественного определения (ошибка +\- 16%) опиатов, барбитуратов, димедрола и др. в моче, крови; в начале 2000-х не менее успешно определяли бета-каротин в биомассе спирулины и ряде объектов из числа лекарственного растительного сырья.
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


28.12.2015 // 17:12:00     

Alex75 пишет:
Есть получше продукт - ТСХ-менеджер; многоуважаемый Garry является автором и в свое время всех желающих им обеспечил;
Мы успешно решаем задачи полколичественного определения (ошибка +\- 16%) опиатов, барбитуратов, димедрола и др. в моче, крови; в начале 2000-х не менее успешно определяли бета-каротин в биомассе спирулины и ряде объектов из числа лекарственного растительного сырья.

Коллега,... Вы мне льстите
Lipids
Пользователь
Ранг: 430


28.12.2015 // 21:22:53     

Александра пишет: Вообще, кто знаком с этим методом в количественном измерении каротиноидов по ТСХ?

По моим наблюдениям у ТСХ очень узкий динамический диапазон - обычно 10-40. Мы делали сканы обычным фотосканером, а потом обрабатывали полученные файлы программою для гелей - ImageJ. При определенной ловкости и использовании пластинок с каналами получались вполне себе полуколичественные результаты. Только много времени уходило на обработку хроматограмм.
Реклама на ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Размещение рекламы
Пипетка серологическая Пипетка серологическая
Пластиковые серологические пипетки для лабораторных работ, связанных с дозированием жидкостей.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
AlexandraBorodina
Пользователь
Ранг: 4


01.01.2016 // 12:23:02     

Botrytis пишет:
Вообще, каротиноиды разные есть: собственно каротин и ксантофиллы(больше всего лютеин встречается). У вас чего? И вещество стандарт с известной концентрацией есть? Если есть, то можно денситометром сорбфиловским работать, там есть такая функция. Если нет, то как минимум КФК-3 нужен и затем по формулам расчет вести.
Мы расчитывали по программе "Sorbfil TLC", результаты получились сомнительные, но это возмножно потому, что мы не знаем как правильно пользоваться этой программой (программа взломанная).
Спасибо за ваш ответ Botrytis.
AlexandraBorodina
Пользователь
Ранг: 4


01.01.2016 // 12:28:02     
Редактировано 1 раз(а)


Принцип оценки содержания вещества в пятне методом КТСХ (количественной ТСХ) в различных программах может отличаться. Ну... т.е. алгоритмы могут быть разные. Но наиболее часто используемый - это алгоритм криволинейного интегрирования яркости пятна в пределах заданного трека относительно фонового значения. Это детали программистов, решающих задачу количественной оценки. А вот что касается использования подобного ПО конечным пользователем, т.е. Вами, то все выглядит гораздо проще. Рядом с пятном пробы наносят одну-две-три концентрации анализируемых веществ, на основании анализа которых ПО строит некую градуировочную зависимость. Используя эту зависимость программа оценивает содержание вещества в исследуемой пробе. Т.е. фактически оценка осуществляется согласно градуировки. Единственно, нужно помнить, что в проявительной ТСХ (без флуоресценции) линейный диапазон анализируемых концентраций весьма мал (в пределах 0,5-9 мкг в пятне). Этот диапазон зависит от веществ и методов визуализации, но как правило от закона Кубелки-Мунка никуда не уйти. Т.е. если Вы хотите анализировать растворы с большим содержанием, которые при нанесении на ТСХ будут давать пятна с нанесенным количеством вещества больше 10 мкг, то Вы не увидите особой разницы в оценке содержания исследуемого вещества, ибо .... см. закон Кубелки... и его сотоварища. .
Когда говорят о ТСХ, то ни о какой экстинции речь не идет, ибо понятие оптической плотности имеет значение только при измерении на пропускание, а не на отражение. Фактически в ТСХ может идти речь о измерении коэффициента отражения.
Спасибо за подробный ответ. Честно говоря, подробности для программистов не помешали бы . Но в общих чертах поняла. Есть ли другие альтернативные программы для расчета каротиноидов по ТСХ? И где можно о них почитать?
AlexandraBorodina
Пользователь
Ранг: 4


01.01.2016 // 12:31:31     
Редактировано 4 раз(а)


Alex75 пишет:
Есть получше продукт - ТСХ-менеджер; многоуважаемый Garry является автором и в свое время всех желающих им обеспечил; ключевая позиция в Вашем случае - добиться эффективного разделения, понять в какой зоне какие вещества (бета-каротин, зеаксантин, лютеолин и т.д.) и раздобыть СО вышеуказанных соединений (или хотя бы их "самоделкинский" вариант).
Мы успешно решаем задачи полколичественного определения (ошибка +\- 16%) опиатов, барбитуратов, димедрола и др. в моче, крови; в начале 2000-х не менее успешно определяли бета-каротин в биомассе спирулины и ряде объектов из числа лекарственного растительного сырья.

Спасибо большое за ваш совет. Что за программа ТСХ-менеджер, где ее можно скачать? в остальном, мы так и делали. Конечно разделение всех каротиноидов методом ТСХ это проблема (я имею ввиду извлечение каротиноидов из животной ткани, которая может содержать промежуточные метаболиты, мало изученные или вообще ранее неизвестные). Работа касается более-менее изученных объектов, где мы точно знаем какие каротиноиды, как и где располагаются на ТСХ. Мы сравнние 2-х методом расчета, т.е с одной стороны, мы все пластины сканировали планшетным сканером и обрабатывали в программе Sorbfil, с другой, с этих же пластин мы выделяли те самые каротиноиды и промеряли их на СФ используя стандартные формулы с коэф. экстинкции 2500. Потом сопоставили результаты. Сделали вывод, что мы где-то ошибаемся в правильном использовании программы Sorbfil.
AlexandraBorodina
Пользователь
Ранг: 4


01.01.2016 // 12:40:12     

Lipids пишет:

Александра пишет: Вообще, кто знаком с этим методом в количественном измерении каротиноидов по ТСХ?

По моим наблюдениям у ТСХ очень узкий динамический диапазон - обычно 10-40. Мы делали сканы обычным фотосканером, а потом обрабатывали полученные файлы программою для гелей - ImageJ. При определенной ловкости и использовании пластинок с каналами получались вполне себе полуколичественные результаты. Только много времени уходило на обработку хроматограмм.
Спасибо большое, но мне не знаком метод с гелями, с пластинками ТСХ как-то привычнее. А что это за программа и где можно о ней узнать?
Garry
VIP Member
Ранг: 1075


02.01.2016 // 19:13:36     

AlexandraBorodina пишет:

Спасибо большое за ваш совет. Что за программа ТСХ-менеджер, где ее можно скачать? Сделали вывод, что мы где-то ошибаемся в правильном использовании программы Sorbfil.


ТСХ-Менеджер 4.01 - это моя программа . Но имеются и другие.... например от CAMAG - WinCats, Денскан от ВНИИГИНТОКС, и еще пару знаю менее распространенных , Phoretix2D. И вот хотя бы модуль для ТСХ расчетов от Амперсенда, интегрированный в МультиХром.
Что касается линейного диапазона в 10-40 мкг.... упоминаемого коллегой.... это чересчур. Матчасть нужно иногда читать внимательнее, хотя бы того же Гейсса.

  Ответов в этой теме: 23
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему



ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]

ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2009
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты