| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Хорошие ли характеристики ВЭЖХ сенсора >>>
|
 |
| Автор | Тема: Хорошие ли характеристики ВЭЖХ сенсора | ||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
 23.12.2015 // 20:48:18
Редактировано 1 раз(а) Добрый день, собрал поиграться ВЭЖХ сенсор, который имеет чувствительность на азот - то есть если в молекуле разделяемых веществ имеется азот, а в ПФ его нет (привет ацетонитрилу), то он эти молекулы видит. Озвучу характеристики, которые смог достичь, пожалуйста, посоветуйте, разумны ли такие, стоит ли думать о публикациях, или - результат - чушь собачья. Объем кюветы сенсора 3.5мкл, не деструктивный, проводится 70 семплов в секунду, предел чувствительности при потоке 0.3мл/мин и идеально ровных пиках около 0.03нмоль аминокислоты на пик, но для маленьких и узких пиков надобно существенно больше. Во всем диапазоне от минимальной чувствительности до 5% раствора наблюдается хорошая линейность, то есть можно конечно хвалиться 70дБ динамическим диапазоном. Кюветы могу меньше и больше, но на 3.5мкл получалось наиболее хорошо. Тестировалось на градиентах вода-метанол при разделении аминокислот. Скажите, пожалуйста, на сколько получаемые результаты далеки от современного переднего края науки чтобы принять решение в какую сторону дальше двигаться? Спасибо! |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
cholesterol Пользователь Ранг: 109 |
23.12.2015 // 23:52:52
Давно уже придуман хемолюминесцентный азотный детектор (CLND). В отличие от Вашего он разрушающий. Сигнал пропорционален количеству азота в образце. Предел обнаружения для аминокислот 0,3-0,5 мкг/мл для RCD=6%. Более подробно попробуйте поискать: Model 8060 Nitrogen Specific HPLC Detector, brochure A-8060-99-25M, Antek Instruments, Houston, TX, 1999. K. Petritis, C. Elfakir, and M. Dreux, LCGC Europe, 14 (2001) 389. |
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
24.12.2015 // 0:19:02
про хемолюминесцентный, спасибо большое за ссылку, интересно! У меня получается, что предел чувствительности от скорости зависит, если пик медленно ползет, то есть градиент изменения концентрации азота по времени очень не большой, то вроде как я получаю 10нг/мл, а если градиент большой, то чувствительность существенно хуже. А какие значения чувствительности распространены у топовых сенсоров? То есть мои 10нг/мл при медленной экспозиции - это таки хорошо, или так себе? |
||
|
horizon Пользователь Ранг: 46 |
24.12.2015 // 11:49:17
Ув. igorchem, 10нг/мл - это высочайшая величина для современных ВЭЖХ детекторов, но может быть стоит ею немного пренебречь, чтобы получить универсальность? Кому нужен детектор, пусть и очень чувствительный без привычных характеристик разделения? Кстати, кювета объемом 3,5 мкл для колонок какого диаметра? Если 4,6, то статью с подобным детектором никуда не примут. |
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
24.12.2015 // 14:28:48
Редактировано 3 раз(а) спасибо за обнадеживающие слова! Кювета 3.5мкл имеет форму капилляра ID=0.7мм и длинной 9мм, то есть на колонки до 1мм, а может и 0.5мм по идее ее можно пользовать, правда я получил эти результаты на колонках 2.1 и 4.6мм. У меня есть еще один сенсор с более тонким капилляром, где внутренний диаметр кюветы составляет 0.28мм, но на нем чувствительность получается пока хуже... Сенсор вроде не избирательный, но я пока его только на азот успел настроить. На фтор, серу, фосфор, некоторые металлы и редкие земли этот сенсор тоже хорошо настраивается - ожидаемо со схожей чувствительностью в молях и возможностью одновременно по всем атомам работать, но, ИМХО, как я понимаю, это не очень интересно. Кислород не видит, а водород с углеродом есть в любой ПФ. Скажите, пожалуйста, а на какие диаметры колонок сейчас стоит затачиваться, На 75-150 микрон? |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2136 |
25.12.2015 // 1:33:31
Тут надо рассматривать много параметров вместе: цена, эксплуатационные качества, технические хар-ки, селективность, "кондовость", толерантность к "эффекту матрицы", информативность (например, УФ-спектр для ДМД) и др. Просто чутье рассматривать бессмысленно. Тут возникает вопрос. Какую полезную аналитическую инфу даёт детектор? Т.е. на выходе мы просто получаем отклик и всё? Есть возможность, например, самому настраивать его на желаемые элементы (N, P, S...)? Насколько селективен детектор, т.е. есть ли или могут быть интерференции? По пиковой чувствительности: 0.03нмоль в пике - это, например, для глицина 2.25нг в пике, что, если колоть 10мкл, составляет 0.225 нг/мкл или 0.225 мг/л, а этим, по современным меркам, никого не удивишь. Так же очень плохо, на мой взгляд, что, как понял, чутье зависит от градиента концентрации аналита в пике, т.е., чем "уже" пик, тем хуже. Сейчас в моде скорость анализа (минимальное время анализа при достаточной разрешающей способности хроматографической системы). Этот момент играет против Вашего детектора. А что насчёт линейной скорости элюента? Допустим, если в обоих случаях мы имеем одинаковую ширину пика, но линейная скорость элюента будет отличаться в два раза. Какая разница будет в чутье? |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
horizon Пользователь Ранг: 46 |
25.12.2015 // 11:03:10
Редактировано 1 раз(а) Вообще настройка селективности на разные элементы - довольно интересная штука. Я как химик-органик приобрел бы не задумываясь. Что касается капиллярных колонок, то имхо попробовать стоит на случай увеличения хроматографических показателей. Но они, мягко говоря, не очень распространены. И да, со скоростью надо что-то делать. |
||
|
horizon Пользователь Ранг: 46 |
25.12.2015 // 11:03:11
Редактировано 1 раз(а) Прошу прощения, был дубль. |
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
25.12.2015 // 16:00:33
Редактировано 1 раз(а) Огромное спасибо всем за интересные отзывы! так как я это только летом этого года начал и занимаюсь этим очень факультативно, не могу сказать, что пока выжал все из своей системы. Реально это одни из первых результатов, которые я очень хотел бы в дальнейшем улучшить. > Тут возникает вопрос. Какую полезную аналитическую > инфу даёт детектор? электронно-ядерный двойной резонансный спектр, правда пока с электронной частью еще много проблем, но решаемых, детект идет по одному или нескольким резонансам, самым ярким, или заранее выбранным, но полный спектр постфактум с задержкой в несколько минут тоже получается. > 0.03нмоль в пике - это, например, для глицина 2.25нг в пике, > что, если колоть 10мкл, составляет 0.225 нг/мкл или 0.225 мг/л, > а этим, по современным меркам, никого не удивишь. скажите, пожалуйста, к какой цифре надо стремиться, чтобы реально удивить? > чем "уже" пик, тем хуже. да, правильно, минимальный слот спектра 15мсек, но если сигнал слабый, то увидеть его не получается, и для улучшения приходится копить. Пока еще есть идеи как это улучшить. > А что насчёт линейной скорости элюента? да, это тоже критично, если скорость выше 20см/с в капилляре 0.7мм внутреннего диаметра, то все становиться совсем плохо. Эта скорость соответствует примерно 5мл/мин. Основная причина, почему я не получаю хороших результатов на 0.28мм капилляре - это скорость, тут я могу работать максимум на 0.5мл/мин, но желательны существенно меньшие скорости. > Допустим, если в обоих случаях мы имеем одинаковую ширину > пика, но линейная скорость элюента будет отличаться в два раза. > Какая разница будет в чутье? если по времени пики одинаковые, и скорость существенно меньше 5мл/мин (то есть 1мл/мин и меньше), то разницы практически нет. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2136 |
28.12.2015 // 20:02:16
Редактировано 1 раз(а) 10 аттограмм в пике (S/N > 10, RMS)  Но с таким типом детектирования это, на мой взгляд, не реально, по крайней мере, в этой вселенной Поэтому, имеет смысл сосредоточится больше на получении полного спектра, как дополнительной информации, т.е. чтобы для каждого пика можно было полный спектр получить без остановки потока элюента (желательно, хотя бы 10 точек/спектров на пик). Если это получится сделать, а так же будет возможность (без танцев с бубном) "настраиваться" на нужный элемент, и чутье будет 100фг-1нг в пике, то это будет очень хорошо.В целом, на 4-4.6мм (ID) колонках люди, в основном, работают на 1-2мл/мин. На 2-3мм - 0.2-0.8мл/мин. Вы можете установить ограничение, например, 1мл/мин или 0.5мл/мин. Лучше ограничиться имеено такими масштабами, т.к. они наиболее расространены, особенно в РФ. Не рекомендую лезть в "нано-"/"микро-" (колонки с ID < 1мм) - может лет через X такие системы и получат широкое распространение, но... |
||
|
igorchem Пользователь Ранг: 333 |
29.12.2015 // 1:54:12
Редактировано 1 раз(а) Спасибо virtu за интересный и содержательный ответ! > 10 аттограмм в пике (S/N > 10, RMS) Но с таким типом детектирования это, на мой взгляд, не реально, по крайней мере, в этой вселенной да, при резонансе по ядрам согласен, что не реально, но при резонансе по электронам примерно на пределе разумного > Поэтому, имеет смысл сосредоточится больше на получении полного спектра, как дополнительной информации, т.е. чтобы для каждого пика можно было полный спектр получить без остановки потока элюента (желательно, хотя бы 10 точек/спектров на пик). то, что у меня сейчас есть - это непрерывный спектр по времени с разнесением по веществам, то есть на выходе у Вас получается вместо одной хроматограммы - несколько, каждая для своего компонента и для ПФ (ПФ, бывает, 3 компоненты занимает, если градиент, например, метанол, вода, ТФУ) . А для каждой компоненты - свой спектр. Если компоненты не разделились, то и сумма спектров получается. Идея в общем-то старая, если это делать на оптике, первым кажется Расмус Бро в конце 90х сделал и я тоже чуток наследил, но не серьезно, а вот на ядренно-электронных спектрах я что-то такое еще не видел, но может просто ссылку проворонил, если кто-то знает, киньте-расстройте меня ею. Настроить на все элементы - думаю, что дело нескольких месяцев, то есть технологически алгоритм достаточно всеяден по элементам, и просто видит самые яркие сразу, а те, что послабее может тоже увидеть, если сказать, что де надо на этой частоте смотреть. Другое дело, что реальный Оверхаузен виден только на ну очень-очень медленных потоках или с остановкой потока. А так, да, даже мелкие белки можно аккуратненько окучить и их спектр на лету получить. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 10 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
