| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Определение маркеров аллергии? >>>
|
 |
| Автор | Тема: Определение маркеров аллергии? | ||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
 06.10.2014 // 17:01:33
Уважаемые коллеги, Доброго времени суток. Снова нуждаюсь в помощи и совете. Меня пытают на тему возможности определения аллергенов с помощью ВЭЖХ-МС/МС. Так как это все же протеомика, я в этом вообще не алё, о чем честно предупредил, но очень просят посмотреть, можем ли мы это делать и если да, то что для этого нужно... Мои скудные познания в этом деле ограничиваются знанием о существовании IgE и пониманием того, что аллергенов в каждом объекте может быть просто тьма, так что надо смотреть на конкретный объект. В качестве объекта мне предложили пыльцу и, например, молоко. Немного погуглив по молоку нахожу отсыл на казеин и т.д., однако не могу найти ни описаний пробоподготовки, ни чего либо еще... Отсюда просьба - посоветуйте, пожалуйста, что-нибудь почитать (подготовка проб, их анализ, что-нибудь базовое по этой тематике), чтобы хоть как-то въехать в тему. Я понимаю, что в идеале для этой работы нужен еще HR-MS, а с моим QqQ далеко не уедешь, да и нанопоточки у меня также нет. В общем, ахтунг  Область категорически не моя и никого в радиусе 200 км нет, чтобы спросить, что делать
|
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
kump Пользователь Ранг: 3127 |
 06.10.2014 // 17:57:43
Ну поскольку антигены они большие или очень большие (белки, полисахариды, гликопротеиды, липо- и нуклео-протеиды, в противном случае имунного ответа может и не быть), то скорее всего искать нужно в направлении эксклюзионной хроматографии. |
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
06.10.2014 // 18:10:26
Большое спасибо за ответ! Если я правильно Вас понимаю, Вы говорите об их выделении в чистом виде? Правильно ли я понимаю, что в ряде случаев можно обойтись обычной ОФ ВЭЖХ, если получить дайджесты с использованием трипсина? Скажу честно, раньше у меня всегда была проблема/задача избавиться от белка, а вот теперь пытаются навязать его определение... Можно ли белок высадить, отделить супернатант, а потом уже под действием фермента получить дайджесты и уже с ними работать? Ведь в любом случае надо же от низкомолекулярных соединений избавляться? Или без фореза и кучи специфичных реагентов никак? |
||
|
kump Пользователь Ранг: 3127 |
06.10.2014 // 19:24:47
Ну так подробно я Вам не отвечу. Но процедуры выделения антигенов довольно рутинные. Это Вам нужно обратиться к литературе по медицинской(ветеринарной) микробиологии, иммунологии, производству вакцин и сывороток. |
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
06.10.2014 // 21:18:51
Спасибо большое за совет! Поищу! 
|
||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
06.10.2014 // 21:22:37
Я тоже сегодня пытался просто осадить. Ацетонитрилом. И с удивлением обнаружил, что они, гады, белки, в смысле, могут еще и разваливаться при осаждении. Масс-спектр плазмы крови сильно отличается после разбавления водой и после осаждения ацетонитрилом. В области 1 - 10 кДа одни пики поисчезали, хотя теоретически должны были осесть только тяжелые, да еще и куча новых пиков объявилиось |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
06.10.2014 // 21:35:30
Добрый вечер! Скажите пожалуйста, а Вы центрифугировали полученную пробу? Я обычно еще при 10 тыс оборотов кручу пробу где-то минут 20... |
||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
06.10.2014 // 23:29:01
Я пробовал 13400 5 мин и 3000 10 мин. Кстати, ввел после осаждения и ЦФ пробу в нанохроматограф по аналогии с дайджестом БСА за что был жестоко наказан. Умерли и предкологка и колонка. Значит там осталось немало тяжелой "грязи". На вид раствор был вполне прозрачным и бесцветным. |
||
|
ATem Пользователь Ранг: 655 |
06.10.2014 // 23:50:51
они умерли от одного вкола? Можно нескромный вопрос - какой же был объем введен и какой концентрации? Я понимаю, нанопоточка - штука требовательная к качеству проб и квалификации оператора, но чтоб за раз... |
||
|
Andrew VIP Member Ранг: 1370 |
06.10.2014 // 23:58:25
Да откуда ж я знаю концентрацию? Взял плазму, добавил двойной объем ацетонитрила, отцентрифугировал. Осадок был весьма приличный. Отобрал аликвоту. Разбавил в пять раз водой, чтобы в пробе не было слишком много ацетонитрила, т.к. градиент с 2% начинаетсч. И ввел 10 мкл (как при установке р-р дайджеста БСА вводили. И ффсе. Померла колонка. 100 микрон внутренней диаметр. И предколонка не спасла. |
||
|
virtu VIP Member Ранг: 2135 |
07.10.2014 // 1:41:19
Редактировано 1 раз(а) Для затравки: Инфы, честно сказать, много, поэтому надо определиться с "направлением". Для R&D (т.е. поиск неизвестных молекул и разработка методик хим. анализа) здесь, конечно, неплохо бы иметь дополнительно HR-MS/MS и nano/micro-HPLC. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 25
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
