Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Определение маркеров аллергии? >>>

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: Определение маркеров аллергии?
ATem
Пользователь
Ранг: 655

06.10.2014 // 17:01:33     
Уважаемые коллеги,

Доброго времени суток. Снова нуждаюсь в помощи и совете. Меня пытают на тему возможности определения аллергенов с помощью ВЭЖХ-МС/МС. Так как это все же протеомика, я в этом вообще не алё, о чем честно предупредил, но очень просят посмотреть, можем ли мы это делать и если да, то что для этого нужно...
Мои скудные познания в этом деле ограничиваются знанием о существовании IgE и пониманием того, что аллергенов в каждом объекте может быть просто тьма, так что надо смотреть на конкретный объект. В качестве объекта мне предложили пыльцу и, например, молоко.
Немного погуглив по молоку нахожу отсыл на казеин и т.д., однако не могу найти ни описаний пробоподготовки, ни чего либо еще...
Отсюда просьба - посоветуйте, пожалуйста, что-нибудь почитать (подготовка проб, их анализ, что-нибудь базовое по этой тематике), чтобы хоть как-то въехать в тему. Я понимаю, что в идеале для этой работы нужен еще HR-MS, а с моим QqQ далеко не уедешь, да и нанопоточки у меня также нет.

В общем, ахтунг Область категорически не моя и никого в радиусе 200 км нет, чтобы спросить, что делать
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
kump
Пользователь
Ранг: 3190


06.10.2014 // 17:57:43     
Ну поскольку антигены они большие или очень большие (белки, полисахариды, гликопротеиды, липо- и нуклео-протеиды, в противном случае имунного ответа может и не быть), то скорее всего искать нужно в направлении эксклюзионной хроматографии.
ATem
Пользователь
Ранг: 655


06.10.2014 // 18:10:26     
Большое спасибо за ответ!

Если я правильно Вас понимаю, Вы говорите об их выделении в чистом виде? Правильно ли я понимаю, что в ряде случаев можно обойтись обычной ОФ ВЭЖХ, если получить дайджесты с использованием трипсина? Скажу честно, раньше у меня всегда была проблема/задача избавиться от белка, а вот теперь пытаются навязать его определение...
Можно ли белок высадить, отделить супернатант, а потом уже под действием фермента получить дайджесты и уже с ними работать? Ведь в любом случае надо же от низкомолекулярных соединений избавляться? Или без фореза и кучи специфичных реагентов никак?
kump
Пользователь
Ранг: 3190


06.10.2014 // 19:24:47     
Ну так подробно я Вам не отвечу. Но процедуры выделения антигенов довольно рутинные. Это Вам нужно обратиться к литературе по медицинской(ветеринарной) микробиологии, иммунологии, производству вакцин и сывороток.
ATem
Пользователь
Ранг: 655


06.10.2014 // 21:18:51     
Спасибо большое за совет! Поищу!
Andrew
VIP Member
Ранг: 1370


06.10.2014 // 21:22:37     
Я тоже сегодня пытался просто осадить. Ацетонитрилом. И с удивлением обнаружил, что они, гады, белки, в смысле, могут еще и разваливаться при осаждении. Масс-спектр плазмы крови сильно отличается после разбавления водой и после осаждения ацетонитрилом. В области 1 - 10 кДа одни пики поисчезали, хотя теоретически должны были осесть только тяжелые, да еще и куча новых пиков объявилиось
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Центр коллективного пользования Центр коллективного пользования "Состав вещества" ИВТЭ УрО РАН
Центр выполняет по договорам аналитические исследования по элементному и вещественному анализу методами плазменно-эмиссионной спектроскопии, рентгенодифрактометрии, сканирующей электронной микроскопии, рентгеноспектральному и Рамановскому микроанализу на современном оборудовании
ATem
Пользователь
Ранг: 655


06.10.2014 // 21:35:30     
Добрый вечер!

Скажите пожалуйста, а Вы центрифугировали полученную пробу? Я обычно еще при 10 тыс оборотов кручу пробу где-то минут 20...
Andrew
VIP Member
Ранг: 1370


06.10.2014 // 23:29:01     
Я пробовал 13400 5 мин и 3000 10 мин.
Кстати, ввел после осаждения и ЦФ пробу в нанохроматограф по аналогии с дайджестом БСА за что был жестоко наказан. Умерли и предкологка и колонка. Значит там осталось немало тяжелой "грязи". На вид раствор был вполне прозрачным и бесцветным.
ATem
Пользователь
Ранг: 655


06.10.2014 // 23:50:51     
они умерли от одного вкола? Можно нескромный вопрос - какой же был объем введен и какой концентрации? Я понимаю, нанопоточка - штука требовательная к качеству проб и квалификации оператора, но чтоб за раз...
Andrew
VIP Member
Ранг: 1370


06.10.2014 // 23:58:25     
Да откуда ж я знаю концентрацию? Взял плазму, добавил двойной объем ацетонитрила, отцентрифугировал. Осадок был весьма приличный. Отобрал аликвоту. Разбавил в пять раз водой, чтобы в пробе не было слишком много ацетонитрила, т.к. градиент с 2% начинаетсч. И ввел 10 мкл (как при установке р-р дайджеста БСА вводили. И ффсе. Померла колонка. 100 микрон внутренней диаметр. И предколонка не спасла.
virtu
VIP Member
Ранг: 2135


07.10.2014 // 1:41:19     
Редактировано 1 раз(а)


ATem пишет:
Отсюда просьба - посоветуйте, пожалуйста, что-нибудь почитать
Для затравки:
www.aoaceurope.com/2006/jacquelinevanderwielen.pdf
www.per-form.hu/dokumentacio/tomeg/Stephen_Lock_Allergen_Analysis.pdf
www.hesiglobal.org/files/13-Lutter-Detection%20Methods-April%202013.pdf
www.criticalpathservices.com/cps/presentations/CPS_PROTEOMICS_POSTER_16_Aug_2012.pdf
www.chem.agilent.com/Library/eseminars/Public/Novel%20Approaches%20for%20the%20Discovery%20of%20Allergenic%20Components%20in%20Gluten.pdf
www.fast-lcms2014.org/
www.absciex.com/Documents/Downloads/Literature/AB_SCIEX_iMethod_flyer_Allergens_Analysis_LC-MSMS_5720112-01.pdf

Инфы, честно сказать, много, поэтому надо определиться с "направлением".

Для R&D (т.е. поиск неизвестных молекул и разработка методик хим. анализа) здесь, конечно, неплохо бы иметь дополнительно HR-MS/MS и nano/micro-HPLC.

  Ответов в этой теме: 25
  Страница: 1 2 3
  «« назад || далее »»

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты