Форумы ANCHEM.RU: Идентификация FAME по ГХ-МСД

Российский химико-аналитический портал

химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов

карта портала ::: расширенный поиск

ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

Идентификация FAME по ГХ-МСД >>>

Ответов в этой теме: 7

[ Ответ на тему ]

Автор

Тема: Идентификация FAME по ГХ-МСД

metrim
Пользователь
Ранг: 646

21.12.2013 // 14:24:07

Посоветуйте начальную литературу по идентификации вещест по RT и масс-спектрам.
Задача: есть смесь из 30 FAME (внешний стандарт), то что удалось найти по каталогам и забодяжить. Разная длинна, разная степень ненасыщенности, ветвление, цикло и т.д.
И разумеется есть мои образцы. В хроматограммах образцов попадаются пики, которых нет в стандарте. Хочется их не только "учесть", но и идентифицировать, хотя бы приблизительно, но что бы можно было использовать в статье.
Само собой, просто искать по NIST уже пробовал. по FAME там не так много, как хотелось бы.
В распоряжении есть соответственно спектры известных по стандарту веществ, времена удержание и данные MRM , для сегментов отстроенных по стандарту.
Можно ли на основе этого хотя бы приблизительно сделать заключение о структуре "неизвестных" ?

ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

21.12.2013 // 17:51:26

Редактировано 1 раз(а)

metrim пишет:
Посоветуйте начальную литературу по идентификации вещест по RT и масс-спектрам.
Задача: есть смесь из 30 FAME (внешний стандарт), то что удалось найти по каталогам и забодяжить. Разная длинна, разная степень ненасыщенности, ветвление, цикло и т.д.
И разумеется есть мои образцы. В хроматограммах образцов попадаются пики, которых нет в стандарте. Хочется их не только "учесть", но и идентифицировать, хотя бы приблизительно, но что бы можно было использовать в статье.
Само собой, просто искать по NIST уже пробовал. по FAME там не так много, как хотелось бы.
В распоряжении есть соответственно спектры известных по стандарту веществ, времена удержание и данные MRM , для сегментов отстроенных по стандарту.
Можно ли на основе этого хотя бы приблизительно сделать заключение о структуре "неизвестных" ?

Помимо RT и RRT (что более точнее), следует вычислить для каждого пика эквивалентную длину цепи (ЭДЦ/ECL) -- этот показатель позволяет довольно точно идентифицировать ЖК.
А вообще, масс-спектры МЭЖК, увы, совсем не информативны и тот же NIST для трёх пиков подряд с точностью 99% напишет что у вас, например, всё это -- пальмитолеиновая кислота.
Лучше делать пиколиниловые эфиры (если у вас DB-5, например), или DMOX, если у вас DB-23.
Что почитать...
Во-первых, начать с классики: W.W. Christie -- Gas chromatography and lipids -- например, вот этот раздел (хотя, вся книга чертовски полезна) lipidlibrary.aocs.org/GC_lipid/05_gc_fa/index1.htm

metrim
Пользователь
Ранг: 646

21.12.2013 // 18:18:13

Chamomillablue пишет:
Помимо RT и RRT (что более точнее), следует вычислить для каждого пика эквивалентную длину цепи (ЭДЦ/ECL) -- этот показатель позволяет довольно точно идентифицировать ЖК.

Это то же самое что ECN ? А что в нем информативного ?? Это же вроде просто вычтенные двойные связи (то что я читал)

А вообще, масс-спектры МЭЖК, увы, совсем не информативны и тот же NIST для трёх пиков подряд с точностью 99% напишет что у вас, например, всё это -- пальмитолеиновая кислота.

Ну вообще то то что в ней есть, а есть многие - NIST определяет довольно точно, так что зря вы про неё так.

Лучше делать пиколиниловые эфиры (если у вас DB-5, например), или DMOX, если у вас DB-23.

Тут уж увы - что есть. Образы метилированы и с этим - ничего не попишешь.
Колонки переставлять в принципе можно, если быть уверенным, что будет ТОЛК , а не просто посмотреть-поиграться

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

21.12.2013 // 19:42:41

Редактировано 2 раз(а)

metrim пишет:
Это то же самое что ECN ? А что в нем информативного ?? Это же вроде просто вычтенные двойные связи (то что я читал)

Про ELC (эквивалентную длину цепи, а не эквивалетное углеродное число) и его приложение к анализу МЭЖК можно почитать вот здесь:
Mjøs SA (2003) Identification of fatty acids in gas chromatography by application of different temperature and pressure programs on a single capillary column. J. Chromatogr. 1015: 151–161
Ну и про RT вот здесь:

Farkas O, Zenkevich IG, Stout F, Kalivas JH, Héberger K. (2008) Prediction of retention indices for identification of fatty acid methyl esters. J. Chromatogr. A. 1198-1199:188-95

Ну вообще то то что в ней есть, а есть многие - NIST определяет довольно точно, так что зря вы про неё так.

Да почти каждый день с этим сталкиваюсь, так что знаю о чём говорю

))
Для пальмитолеиновой и пальмитовакценовой ЖК NIST c совпадением 99% предлагает 7, 9, 11-16:1 -- выбирай, мол, сам. Тут как раз и пригождается RRT и ECL.
NIST и олеиновую-то с цис-вакценовой не всегда достоверно распознаёт...

Тут уж увы - что есть. Образы метилированы и с этим - ничего не попишешь. Колонки переставлять в принципе можно, если быть уверенным, что будет ТОЛК , а не просто посмотреть-поиграться

От пиколиниловых толк есть однозначно: они дают мощный пик молекулярного иона + внятную, легкоинтерпретируемую фрагментацию, которая позволяет достоверно установить положение двойной связи, метильного радикала и т.д.
Кстати, есть метод конверсии метиловых эфиров в пиколиниловые всего за 1 час при +45 градусах. Рекомендую потренироваться "на кошках", скажем, на оливковом масле или на подсолнечном

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

21.12.2013 // 20:17:19

А вообще, если хотите разобраться с X-FA, то сообщите что за образец (вид), количество материала, какая была пробоподготовка и условия GC-MS, ну и хроматограммы желательно приложить.
И не брезгуйте пиколиниловыми эфирами -- их синтез прост, а информации дают много.

metrim
Пользователь
Ранг: 646

21.12.2013 // 20:52:31

Chamomillablue пишет:
А вообще, если хотите разобраться с X-FA, то сообщите что за образец (вид), количество материала, какая была пробоподготовка и условия GC-MS, ну и хроматограммы желательно приложить.

Образцы - бактериальные культуры.
Хлороформ-метанол-вода
SPE
Отобраны раздельно фракции нейральных, глико- и фосфолипидов.
Затем с каждой фракцией - щелочной гидролиз (100градусов) и метилирование с BF3 (80 градусов)
Анализ - DB-1, градиент от 80 до 250 (не помню точно) , продолжительность 73 минуты.

Есть еще подозрение, что процедура гидролиза для нейтральных липидов - недостаточно эффективна, какой то уж шибко малый выход получился.

И не брезгуйте пиколиниловыми эфирами -- их синтез прост, а информации дают много.

Я не брезгую, я просто не умею, и рисковать полученными 100µl образца в совершенно незнакомой методике - стремно.
Если можно - предложите протокол.

Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246

УФ-Вид спектрофотометры Analytik Jena SPECORD® PLUS
SPECORD® PLUS – новая серия УФ-Вид спектрофотометров для проведения качественного и количественного анализа веществ в растворе по спектрам поглощения и пропускания и изучения свойств поверхностей и поверхностных взаимодействий твёрдых проб по спектрам отражения и рассеивания.

[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]

Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302

21.12.2013 // 21:12:15

Редактировано 1 раз(а)

Кстати, интактные липиды можно подвергнуть прямой переэтерификации, минуя омыление.
Я, например, с нейтральными ацилглицеринами -- НАГ (ТАГ, ДАГ и МАГ) работал по такому протоколу:
1-5 мг НАГ + 500 мкл бензола (чтобы растворить их) + 3 мл MeOH + 300 мкл AcCl выдержать час при +65, затем отогнать растворители, капнуть в колбу воды и гексаном экстрагировать МЭЖК.
Это заметно экономит время на омылении при 100% выходе продукта. А ещё этот метод годится даже для бактерий и растительных тканей без предварительной экстракции (им пользуемся не только мы, но и такие гуру липидной науки как Джон Олродж)

А по поводу пиколиниловых есть вот такой протокол (но лично я с ним ещё не работал, но планирую в ближайшее время внедрить в практику, пока же синтезирую их по "классическому" методу из свободных ЖК через их хлорангидриды и т.д.):

Dubois N, Barthomeuf C, Berge J-P (2006) Convenient preparation of picolinyl derivatives from fatty acid esters. Eur. J. Lipid. Sci. Technol. 108: 28—32

metrim
Пользователь
Ранг: 646

02.01.2014 // 20:03:20

Спасибо за советы!
Статьи скачал, изучаю во что все это для меня обернется ...

Может быть будут еще какие советы от опытных ?


Ответов в этой теме: 7	Ответ на тему

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU: [ Все новости ]

Размещение рекламы / Контакты