| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ТСХ фосфолипидов >>>
|
 |
| Автор | Тема: ТСХ фосфолипидов | |||||
|
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
 02.11.2012 // 13:19:32
Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте, форумчане! Работаю с мембранами эритроцитов: физико-химия + состав. Возникли сложности при разгоне фосфолипидов мембраны на ТСХ. Экстрагирую Фолчем, упариваю в токе азота, разгон идет в двух направлениях: хлороформ(16,5 мл)+метанол(7 мл)+вода(1,3 мл) и хлороформ(14 мл)+метанол(6 мл)+аммиак(1 мл). Проявляю йодом. Методика вроде как отработана, раньше все шло замечательно: отдельные фосфолипиды потом метилировались и отправлялись на ГХ. А спустя месяц стопор: вместо пятне сопли практически с фронтом и все. В связи с этим хотелось бы спросить: - может ли быть проблема в том, что мембраны морозились? Лежали полгода-год при -60. Некоторые образцы прошли 2-3 цикла заморозки-разморозки. - может ли быть проблема в методе или реактивах? Авось кто сталкивался с похожими граблями. - какие изменения претерпевают липиды после проявления йодом? Каков вообще механизм? Есть опасения что могут "поплыть" время на ГХ. Всем спасибо 
|
|||||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
|
gingerino Пользователь Ранг: 213 |
02.11.2012 // 15:09:27
Редактировано 1 раз(а) Точно сейчас не скажу, всё таки пятница вечер ))... Но в первую систему надо добавить немного уксус. И бензола.. Прописи посмотрю только 5 числа |
|||||
|
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
02.11.2012 // 16:39:09
Будьте так добры! |
|||||
|
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
05.11.2012 // 12:56:58
Уточнил детали: по этой методике давно и эффективно разделяли фосфолипиды - то есть в самих прописях граблей не должно быть  А проба как шла соплями, так и идет... |
|||||
|
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
05.11.2012 // 15:59:23
А как идут стандарты? - загоните смесь синт. стандартов и посмотрите что и как. По одному на класс, на фосфохолины я бы взял 2 (посмотрет' пойдут ли в одном пятне или начнет все ползти). Если стандарты идут нормально, а экстракт - нет и все с'езжает, добавьте ту же смесь стандартов в экстракт и посмотрите там ли знакомые пятна или уехали куда в сторону. Из этого будет ясно где проблема (но может не ясно, что именно происходит). |
|||||
|
gingerino Пользователь Ранг: 213 |
06.11.2012 // 16:44:22
Мы разделяли: 1 направление хлороформ - метанол - 25% аммиак (13:7:1); 2 направление хлороформ - ацетон - метанол - уксусная кислота (10:4:2:1) |
|||||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
|
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
07.11.2012 // 4:28:36
Очень даже может быть, особенно после циклов заморозки-разморозки. Плюс, значение имеет как были заморожены и в чем: если сперва заморозили в жидком азоте, а потом перенесли в -60 - это одна песня, если просто в -60 поставили - другая. Проявлять йодом - печалька. Токсичная и вредная печалька Если анализ качественный, то лучше ФМК или сварить реактив Васьковского, если липиды нужны для дальнейшего анализа, то лучшезавести примулин (в каталогах СИГМА есть).По своему опыту скажу, что после 3 недель неправильного хранения при -76 выделенных ультрацентрифугированием мембран, на ГЖХ получили 80% оксикислот - продуктов окисления, которые вполне могут плыть соплёй. |
| |
||
|
Ответов в этой теме: 6 |
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
