Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
![]() |
|
ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
![]() |
ТСХ фосфолипидов >>>
|
![]() |
Автор | Тема: ТСХ фосфолипидов | |||||
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
![]() Редактировано 1 раз(а) Здравствуйте, форумчане! Работаю с мембранами эритроцитов: физико-химия + состав. Возникли сложности при разгоне фосфолипидов мембраны на ТСХ. Экстрагирую Фолчем, упариваю в токе азота, разгон идет в двух направлениях: хлороформ(16,5 мл)+метанол(7 мл)+вода(1,3 мл) и хлороформ(14 мл)+метанол(6 мл)+аммиак(1 мл). Проявляю йодом. Методика вроде как отработана, раньше все шло замечательно: отдельные фосфолипиды потом метилировались и отправлялись на ГХ. А спустя месяц стопор: вместо пятне сопли практически с фронтом и все. В связи с этим хотелось бы спросить: - может ли быть проблема в том, что мембраны морозились? Лежали полгода-год при -60. Некоторые образцы прошли 2-3 цикла заморозки-разморозки. - может ли быть проблема в методе или реактивах? Авось кто сталкивался с похожими граблями. - какие изменения претерпевают липиды после проявления йодом? Каков вообще механизм? Есть опасения что могут "поплыть" время на ГХ. Всем спасибо ![]() |
|||||
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
||||||
gingerino Пользователь Ранг: 207 |
![]() Редактировано 1 раз(а) Точно сейчас не скажу, всё таки пятница вечер ![]() Прописи посмотрю только 5 числа |
|||||
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
![]()
Будьте так добры! |
|||||
Angeliani Пользователь Ранг: 3 |
![]() Уточнил детали: по этой методике давно и эффективно разделяли фосфолипиды - то есть в самих прописях граблей не должно быть ![]() А проба как шла соплями, так и идет... |
|||||
Spectrometrist Пользователь Ранг: 777 |
![]() А как идут стандарты? - загоните смесь синт. стандартов и посмотрите что и как. По одному на класс, на фосфохолины я бы взял 2 (посмотрет' пойдут ли в одном пятне или начнет все ползти). Если стандарты идут нормально, а экстракт - нет и все с'езжает, добавьте ту же смесь стандартов в экстракт и посмотрите там ли знакомые пятна или уехали куда в сторону. Из этого будет ясно где проблема (но может не ясно, что именно происходит). |
|||||
gingerino Пользователь Ранг: 207 |
![]() Мы разделяли: 1 направление хлороформ - метанол - 25% аммиак (13:7:1); 2 направление хлороформ - ацетон - метанол - уксусная кислота (10:4:2:1) |
|||||
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
|||||
Chamomillablue Пользователь Ранг: 1302 |
![]()
Очень даже может быть, особенно после циклов заморозки-разморозки. Плюс, значение имеет как были заморожены и в чем: если сперва заморозили в жидком азоте, а потом перенесли в -60 - это одна песня, если просто в -60 поставили - другая. Проявлять йодом - печалька. Токсичная и вредная печалька ![]() По своему опыту скажу, что после 3 недель неправильного хранения при -76 выделенных ультрацентрифугированием мембран, на ГЖХ получили 80% оксикислот - продуктов окисления, которые вполне могут плыть соплёй. |
|
||
Ответов в этой теме: 6 |
|
ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
Размещение рекламы / Контакты |