Российский химико-аналитический портал  химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов  
карта портала ::: расширенный поиск              
 


ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ...
  1. Аналитический форум | Список форумов | Войти в систему | Регистрация | Помощь | Последние темы | Поиск

Форум химиков-аналитиков, аналитическая химия и химический анализ.

ТСХ фосфолипидов >>>

  Ответов в этой теме: 6

[ Ответ на тему ]


Автор Тема: ТСХ фосфолипидов
Angeliani
Пользователь
Ранг: 3

02.11.2012 // 13:19:32     
Редактировано 1 раз(а)

Здравствуйте, форумчане!
Работаю с мембранами эритроцитов: физико-химия + состав.
Возникли сложности при разгоне фосфолипидов мембраны на ТСХ.
Экстрагирую Фолчем, упариваю в токе азота, разгон идет в двух направлениях: хлороформ(16,5 мл)+метанол(7 мл)+вода(1,3 мл) и хлороформ(14 мл)+метанол(6 мл)+аммиак(1 мл).
Проявляю йодом.
Методика вроде как отработана, раньше все шло замечательно: отдельные фосфолипиды потом метилировались и отправлялись на ГХ. А спустя месяц стопор: вместо пятне сопли практически с фронтом и все.
В связи с этим хотелось бы спросить:
- может ли быть проблема в том, что мембраны морозились? Лежали полгода-год при -60. Некоторые образцы прошли 2-3 цикла заморозки-разморозки.
- может ли быть проблема в методе или реактивах? Авось кто сталкивался с похожими граблями.
- какие изменения претерпевают липиды после проявления йодом? Каков вообще механизм? Есть опасения что могут "поплыть" время на ГХ.
Всем спасибо
ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
gingerino
Пользователь
Ранг: 207


02.11.2012 // 15:09:27     
Редактировано 1 раз(а)

Точно сейчас не скажу, всё таки пятница вечер ))... Но в первую систему надо добавить немного уксус. И бензола..

Прописи посмотрю только 5 числа
Angeliani
Пользователь
Ранг: 3


02.11.2012 // 16:39:09     

gingerino пишет:
Прописи посмотрю только 5 числа

Будьте так добры!
Angeliani
Пользователь
Ранг: 3


05.11.2012 // 12:56:58     
Уточнил детали: по этой методике давно и эффективно разделяли фосфолипиды - то есть в самих прописях граблей не должно быть
А проба как шла соплями, так и идет...
Spectrometrist
Пользователь
Ранг: 777


05.11.2012 // 15:59:23     
А как идут стандарты? - загоните смесь синт. стандартов и посмотрите что и как. По одному на класс, на фосфохолины я бы взял 2 (посмотрет' пойдут ли в одном пятне или начнет все ползти).

Если стандарты идут нормально, а экстракт - нет и все с'езжает, добавьте ту же смесь стандартов в экстракт и посмотрите там ли знакомые пятна или уехали куда в сторону.

Из этого будет ясно где проблема (но может не ясно, что именно происходит).
gingerino
Пользователь
Ранг: 207


06.11.2012 // 16:44:22     

Angeliani пишет:
Уточнил детали: по этой методике давно и эффективно разделяли фосфолипиды - то есть в самих прописях граблей не должно быть
А проба как шла соплями, так и идет...

Мы разделяли:
1 направление хлороформ - метанол - 25% аммиак (13:7:1);
2 направление хлороформ - ацетон - метанол - уксусная кислота (10:4:2:1)
Каталог ANCHEM.RU
Администрация
Ранг: 246
Бидистиллятор из нержавеющей стали UD-2050 Бидистиллятор из нержавеющей стали UD-2050
Предназначен для получения дважды дистиллированной воды повышенного качества. Применяются в медицинских учреждениях, аптеках, лабораториях и для технических нужд. Производительность 5 л/ч.
[ Информация из каталога оборудования ANCHEM.RU ]
Chamomillablue
Пользователь
Ранг: 1302


07.11.2012 // 4:28:36     

Angeliani пишет:
- может ли быть проблема в том, что мембраны морозились? Лежали полгода-год при -60. Некоторые образцы прошли 2-3 цикла заморозки-разморозки.
- может ли быть проблема в методе или реактивах? Авось кто сталкивался с похожими граблями.
- какие изменения претерпевают липиды после проявления йодом? Каков вообще механизм? Есть опасения что могут "поплыть" время на ГХ.
Всем спасибо

Очень даже может быть, особенно после циклов заморозки-разморозки. Плюс, значение имеет как были заморожены и в чем: если сперва заморозили в жидком азоте, а потом перенесли в -60 - это одна песня, если просто в -60 поставили - другая.
Проявлять йодом - печалька. Токсичная и вредная печалька Если анализ качественный, то лучше ФМК или сварить реактив Васьковского, если липиды нужны для дальнейшего анализа, то лучшезавести примулин (в каталогах СИГМА есть).
По своему опыту скажу, что после 3 недель неправильного хранения при -76 выделенных ультрацентрифугированием мембран, на ГЖХ получили 80% оксикислот - продуктов окисления, которые вполне могут плыть соплёй.

  Ответов в этой теме: 6

Ответ на тему


ААС, ИСП-АЭС, ИСП-МС - прямые поставки в 2022 году

ПОСЛЕДНИЕ НОВОСТИ ANCHEM.RU:      [ Все новости ]


ЖУРНАЛ ЛАБОРАТОРИИ ЛИТЕРАТУРА ОБОРУДОВАНИЕ РАБОТА КАЛЕНДАРЬ ФОРУМ

Copyright © 2002-2022
«Аналитика-Мир профессионалов»

Размещение рекламы / Контакты