| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
Уменьшение времени удерживания в полтора раза при втором заколе >>>
|
 |
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
 20.03.2012 // 16:43:52
Известен эффект, когда после остановки насоса происходит слипание гидрофобной привитой фазы в водных элюентах. Повторные вводы дают значительно меньшее время удерживания по той причине, что часть пор сорбента банально перекрыта слипшимися щетками прививки. У вас фаза достаточно гидрофобная, но элюент практически на 100% состоит из ацетонитрила. Что ж такое вы там делите? |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
boberk Пользователь Ранг: 105 |
20.03.2012 // 18:20:59
Редактировано 1 раз(а) Прибор Shimadzu 20 серии. Аналиты совершенно разные: от очень гидрофобных (90%ACN) до фосфатов (20mM AcONH4). Эффект одинаковый. Третий ввод еще чуть-чуть уменьшает время выхода, последующие совпадают с третим. |
||
|
Женя Пользователь Ранг: 181 |
20.03.2012 // 18:40:24
Колонка достаточно была насыщена? |
||
|
boberk Пользователь Ранг: 105 |
20.03.2012 // 18:47:19
Вы имеете в виду уравновешена? Да, достаточно. |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
20.03.2012 // 23:37:54
На этот вопрос Вы не ответили. Кроме того, в Shimadzu 20 три типа насосов, для двух из них - 2 варианта создания градиента или смешения компонентов изократики Почему из Вас подробности клещами тащить надо? Градиент у Вас или изократика? Сколько лет прибору? были ли раньше сложности с клапанами? Через сколько времени после его включения на рабочий режим Вы проводите 1-й ввод образца? Что будет, если Вы без ввода пробы будете полдня гонять прибор в рабочем режиме? В каком растворителе Вы оставляете колонку на ночь? И с какой скоростью меняете элюенты от рабочего до ночного и обратно, если конечно меняете? Ответ на любой из этих вопросов может подсказать решение Вашей поблемы. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
boberk Пользователь Ранг: 105 |
22.03.2012 // 10:49:45
Редактировано 1 раз(а) Прошу прощения за неполноту информации. 1. LC-20AD. 2. Изократика. 3. Прибору 5-6 лет. 4. За период моей работы (1,5 года) сложностей с клапанами не было. 5. Первый ввод образца - минут через 10 после набора температуры термостатом. 6. Не совсем понятен вопрос. Что значит гонять? 7. Знаю, что это не совсем правильно, но ночь храню в том же элюенте. 8. Соответственно, не меняю. Большое спасибо за внимание и советы. |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
22.03.2012 // 13:34:48
Большое пожалуйста.  Но ясности нет. Колонка (надо понимать) везде одна и та же? Она у вас там - единственная? Другие пробовали? На каком составе элюента в изократике у вас начинаются спецэффекты- на водных или на 100% ацетонитрила тоже (то есть- на любых составах)? И поподробней, поподробней. Складывается такое впечатление, как будто это только Волгину надо или мне, но никак не вам. Стоило бы описать процесс в деталях, а не просто: 1) Да; 2) Нет. Например: Прихожу утром, сую виалу (вещество такое то, столько то мкг/мл в растворе МеCN/H2O/buffer) в автодозатор, запускаю поток Х мл/мин элюента в изократике состава (.......), запускаю детектор ДАД, лампа греется (или всю ночь горела ), грею термостат, варю себе кофе, запускаю анализ, после которого насос отключается (или не отключается), далее идет второй ввод по программе сиквенса, третий, пятый ... десятый. В итоге время удерживания было там такое, тут- сякое. Давление- там такое, тут- эдакое. Ну, как? |
||
|
boberk Пользователь Ранг: 105 |
22.03.2012 // 15:08:07
Редактировано 1 раз(а) Попробую подробнее. Колонки у нас всего две  Вторая Prontosil 120-5-C18 (150*4,6). Такого эффекта при использовании этой колонки не наблюдалось.Прихожу утром,запускаю детектор ДАД, грею термостат, готовлю виалу (вещество 6-amino-7H-purin-2-ol, 800 мкг/мл в воде), запускаю поток 0,2 мл/мин элюента в изократике состава (20mM AcONH4), запускаю анализ (t выхода=3,5), после которого насос не отключается, далее идет второй ввод из той же виалы (t=1,4), потом колю эту же пробу прямым вводом в масс спектрометр, затем возвращаюсь к хроматографу. Третий, четвертый заколы (другая проба,зашкалы в обоих случаях) (t=1,4). Давление по ходу хроматограммы немного меняется. В первом случае 5,6 MPa в начале 5,8 в конце, во втором случае 5,8 в начале 5,9 в конце. Хроматограммы с давлением прилагаются в порядке заколов. Благодарю за помощь. [IMG] /IMG] [IMG] /IMG] [IMG] /IMG] [IMG] /IMG] |
||
|
Serga Пользователь Ранг: 1806 |
22.03.2012 // 16:01:02
Редактировано 1 раз(а) Интересное кино. Сильно похоже на гуанин. (Только он 2-амино-6-оксипурин). Ну да ладно. Не знаю, что скажет Волгин, а мое ИМХО такое, что этот эффект тебя и посетил (слипание щеток прививки в гидрофильной среде). Колонка Discovery HS C18 очень гидрофобная и ее прививка- без полярных вставок, потому для нее такое поведение- практически норма. Едва ли ее можно использовать с чисто водными элюентами. Для разделения достаточно полярных азотистых оснований лучше бы иметь колонку с гидрофильными вставками. И удерживание будет получше, и эффекты послабее. У тебя несколько выходов. Либо вернуться к Prontosil'у (на составах буфер/MeCN=85/15), либо немного органики с этой колонкой использовать. Пронто здоровая колонка, но никто не заставляет держать расход 1,0 мл/мин, можно сбавить до 0,5 и даже 0,3 (Но время жалко). Или подыщи другую маленькую колонку. Или присматривайся к HILIC хроматографии с высокими содержаниями MeCN. LC-MS'у такое больше по душе. |
||
|
Волгин VIP Member Ранг: 1326 |
22.03.2012 // 16:08:29
Ну вот, теперь можно делать некие предположения. 1. У Вас элементарный перегруз колонки. Об этом говорит масштаб шкалы: 0.6 AU в первой хроматограмме, 1.0 - во второй, 4.0 в третьей и четвертой. Сужу по хроматограммам - там указаны по шкале Y единицы mAU. И хотя у Вас аналит дико поглощающий, вариант перегруза скидывать со счетов нельзя. В случае колонки Prontosil 120-5-C18 (150*4,6) этого не происходит из-за того, что площадь ее сечения почти в 5 раз превосходит колонку с Discovery HS C18, а объем - в 7 раз больше. 2. Из-за чего это может происходить. Опять же самое элементарное - Вы вводите в первый раз существенно меньше образца. В противоположном случае (то есть каждый раз Вы вводите одно и то же количество) может быть следующее предположение: накануне Вы перед уходом как следует отмыли колонку. Сорбент колонки не очень подходит для анализа сильно оснОвных веществ, для этого Супелко предлагает Supelcosil LC-18-DB. Поэтому первую порцию аналита колонка частично необратимо сорбирует, снимая таким образом перегрузку. Вторая порция поглощается уже меньше, третья и последующие уже незначительно. Повторяю, это только предположения. 3. Колонка Ваша не предназначена для работы в элюенте без органического модификатора. И, как справедливо заметил Serga, ее поверхность элюентом на смачивается и в поры аналит не попадает, что еще сильнее снижает нагрузочную характеристику. Для работы в таких условиях многие фирмы выпускают специальные сорбенты. PS Посмотрел - а меня Serga таки опередил. Но редактировать не буду для возможности сравнения точек зрения и врожденной графомании
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 23
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
