| Российский химико-аналитический
портал |
химический анализ и аналитическая химия в фокусе внимания ::: портал химиков-аналитиков ::: выбор профессионалов |
 |
|
| ANCHEM.RU » Форумы » 1. Аналитический форум ... |
 |
ВЭЖХ аминокислот в растениях и кормах . >>>
|
 |
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
 05.04.2004 // 7:31:27
Здравствуйте, Нина. Побывал на симпозиуме по хроматографии и хром. приборам в Клязьме с 15 по 19 марта 2004г с нашими стендовыми докладами. Высылаю наши опубликованные тезисы по разделению 21 аминокислоты в биопробах. Насчет пробаподготовки для определения аминокислот в комбикормах сказать ничего не могу, не занимался, т.к. сам врач-биохимик. Может тебе пригодится. ВЭЖХ АНАЛИЗ ОРТОФТАЛЕВЫХ ПРОИЗВОДНЫХ АМИНОКИСЛОТ В БИОЛОГИЧЕСКИХ ЖИДКОСТЯХ С ИСПОЛЬЗОВАНИЕМ УФ-ДЕТЕКЦИИ. А.А. Дутов, И. В. Темникова, Е.Ю. Левашина, Р. Р. Биктимеров, А.А. Федотова. Областной Медицинский Диагностический Центр, Чита и Областная Детская Клиническая Больница, Чита Клинический ВЭЖХ анализ аминокислот технически сложен и требует дорогостоящего хроматографического оборудования (флюориметрический детектор, градиентная система и специализированные колонки высокой эффективности – не менее 10.000 ТТ). Между тем, детектировать ортофталевые производные аминокислот можно и на УФ детекторе с использованием ступенчатого градиента низкого давления. Это позволяет адаптировать метод под хроматограф стандартной конфигурации (изократический насос, спектрофотометрический детектор, 6-портовый кран переключения потоков элюента Supelco, USA). Стандарты аминокислот (Sigma) в 0.01 М HCl (базовые 100 нг/мкл, рабочие 10 нг/мкл). Экстракция аминокислот из serum, ликвора и мочи (мочу фильтровали и разбавляли в 10 раз водой) сводилась к депротеинизации смесью ацетонитрил – изопропанол (3:2, v/v) и центрифугированию. Дериватизационный реагент (ортофталевый альдегид – 2-меркаптоэтанол) готовили по методу Preifer and Hill (1983) в модификации Teerlink et all (1994). Смешивали 1 часть экстракта биопробы, 1 часть дериватизационного реагента, выдерживали 1 мин и 5-10 мкл вводили в петлю инжектора. Для отработки разделения была специально выбрана старая колонка 100 ґ 4.6 мм с Диасорбом С16 7 мкм пониженной эффективности (около 4.000 ТТ), УФ детекция при 230 и 338 нм, скорость 1000 мкл/мин, давление 1000 psi. Удовлетворительного разделения удалось достичь на 4 ступенях элюента (далее аминокислоты приведены в последовательности выхода). 1-я (asp, glu) – 0.01 М фосфатный буфер рН 6.8 – органическая фаза (смесь ацетонитрила и метанола, 1:1, v/v), 95:5 (v/v). 2-я (asn, ser, gln, his, gly, thr, cit) тот же буфер и органическая фаза (85:15, v/v). 3-я (ala, tau, arg, tyr) тот же буфер и органическая фаза (75:25, v/v). 4-я (met, val, trp, phe, ile, orn, leu, lys) тот же буфер – смесь метанола и ацетонитрила (3:1, v/v), соотношение буфера и смеси 40:60 (v/v) + 0.2% тетрагидрофурана. Неполное разделение (но с четко обозначенными вершинами пиков) в парах глицин-треонин, аргинин-тирозин, метионин-валин и лейцин-лизин. Эти проблемы легко решаются использованием более эффективной колонки (около 6.000-7.000 ТТ). Чувствительность около 1 нг каждой аминокислоты при 230 нм и примерно в 7 раз ниже при 338 нм, что вполне достаточно для их анализа в биопробах. Продолжительность полного хроматографического цикла около 45 мин. В течение этого времени дериваты аминокислот остаются стабильными, а для повышения их устойчивости Teerlink et all (1994) рекомендуют заменить в дериватизационном реагенте меркаптоэтанол на меркаптопропионовую кислоту и обходиться минимальным количеством реагента. С уважением, Никита. |
||
|
ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|||
|
Julia Пользователь Ранг: 2 |
07.04.2004 // 16:15:36
Извините пожалуйста за наверное глупый и неуместный вопрос.. но всё же... Не занимается ли кто нибудь определением аминокислотного состава белков входящих в корма для кошек и собак??? а также выявлением наличия процентного содержания соевого белка? Просто тема очень актуальная.. но нигде практически нет информации 
|
||
|
Костя Пользователь Ранг: 576 |
07.04.2004 // 18:17:31
какой смысл там мерить соевый белок? это же корм для скотины - там нет мяса - есть копыта, хрящи, связки, глутамат натрия и соя... |
||
|
Senya Пользователь Ранг: 49 |
09.04.2004 // 11:48:18
Никита. Может у Вас имеется литературка, описывающая как необходимо готовить смесь для дериватизации аминокислот с флюориметрическим определением. А также параметры флюориметра (возб длинна волны, регист длина волны). Имеем большое желание определять аминокислоты в биолог жидкостях. Имеем изократический насос, термостат колонок, колонку 17000 т.т. и флюорат02М. Нет методики. Помогите!!! Можно на мыло sendoc@tut.by Заранее всем спасибо. |
||
|
Senya Пользователь Ранг: 49 |
09.04.2004 // 11:52:13
Неправильно адресок указал. Правильно так sen-doc@tut.by Извините. |
||
|
Каталог ANCHEM.RU Администрация Ранг: 246 |
|
||
|
Леонид VIP Member Ранг: 5266 |
09.04.2004 // 11:53:59
Весь спектр аминокислот за один проход в изократе сделать вряд ли удастся, даже на столь эффективной колонке. |
||
|
Senya Пользователь Ранг: 49 |
09.04.2004 // 11:57:56
Я это понимаю. Но можно в 2, 3 прохода. Но как? |
||
|
Никита Пользователь Ранг: 59 |
12.04.2004 // 10:17:12
На изократе уважаемый Senya, Вы можете разделить максимум 4-5 OPA-производных аминокислот, но не как 21. Если Вы такие же бедные как мы, то дели ОРА-производные аминокислоты на ступенчатом градиенте, к сожалению плавного градиента мы себе позволить не можем, что очень бы улучшило разделение. Но приходиться исходить из того, что есть. Закажите на Supelco 6-портовый кран переключатель для элюентов и фторопластовых капилляров, все это подключи и дели себе на здоровье. Только Тебе нужно вычислить за какое время новый элюент дойдет до кюветы детектора. Я не знаю ваших колонок, объемной скорости, поэтому решите эту проблему сами. Когда Ты будешь знать это время, то легко подберешь режим ступенчатого элюирования. Для того, что бы разделить большее количество производных аминокислот - прочти внимательно наши тезисы. Возьми 4 бутылки, приготовь в них 4 элюента (см.тезисы), причем буфер делай в одной посуде сразу на все 4 элюента, а потом готовь органику. Насчет литературки по флюдетектированию надо рыться в шкафах, пока времени нет. Но такие работы можно найти в интернете - где-нибудь на элзевире, в журналах Chrom.A,B и пр. Так что с литературой нет проблем, прсто нужно знать что Тебе конкретно нужно, а имея смекалку забугорные аналоги можно адаптировать и под наши условия. С уважением, Никита. |
||
|
Senya Пользователь Ранг: 49 |
12.04.2004 // 11:44:04
На счет разделения в изократическом режиме 21 аминокислоты я и не питал надежд на такое счатье. Но я видел статью где описывалось определение в 2-3 прохода. Вот об этом я и спрашивал. Если можно, скиньте ссылки по подготовке ОФА производных. |
||
|
Julia Пользователь Ранг: 2 |
12.04.2004 // 14:38:03
если вы так уверены, что там только рога и копыта... может вы делали этот анализ? Вообще-то производители кормов утверждают. что используют исключительно муку из мяса... никаких копыт... Но практика показывает, что некоторые корма явно не содержат незаменимых аминокислот... вот и интересовалась данным вопросом, поскольку хочется знать - глюк это или правда.... Если Вы не в сосотоянии помочь... пойдё спрошу ещё у кого-нибудь... толкьо создаётся впечатление, что тут больше принято дифирамбы петь , а не практикой заниматься кошки тоже имеют права жрать хорошую полноценную пищу, и если фирмы производители врут.. то потребители должны хотя бы представлять, кто врёт.. а как это сделать, если это никому не интересно???
|
| |
||
|
Ответов в этой теме: 39
|
||
| ЖУРНАЛ | ЛАБОРАТОРИИ | ЛИТЕРАТУРА | ОБОРУДОВАНИЕ | РАБОТА | КАЛЕНДАРЬ | ФОРУМ |
| Copyright © 2002-2022 «Аналитика-Мир профессионалов» |
|
Размещение рекламы / Контакты |
[]
